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【摘要】 目的 建立人血浆中奥美拉唑浓度的HPLC测定方法。方法 以C18柱（250mm×4.6mm，5um，Discovery）为色谱柱，乙腈:0.01mol/L K2HPO4（pH7.5）＝35:65（v/v）为流动相，检测波长302nm。结果 奥美拉唑峰形良好，血浆中内源性物质不干扰样品的测定，批内、批间精密度符合要求，在0.02～2μg/ml浓度范围内线性关系良好。结论 本法灵敏度高，专属性强，血样处理方法简便。适于药代动力学研究的要求。
【关键词】 奥美拉唑；HPLC法；血药浓度
Determination of omeprazole concentration in plasma by HPLC
LIU Yun , PAN Qi-qi，Dept of Clinical Pharmacology, Jiangsu Province Hospital, Nanjing 210029,China
【Abstract】 Objective The aim of the present study was to establish a method which can determine the blood concentration of omeprazole. Methods The RP-HPLC method was used. The analytical column was Discovey C18 (4.6mm×250mm,5μm) and the mobile phase consisted of acetonitrile-0.01mol/LK2HPO4 (35：65,v/v).The pH was adjusted to 7.5±0.1 with phosphoric acid and triethylamine at fiow rate of 1.0ml/min. The detection wavelength for omeprazole was 302nm. Results The substance of plasma did not hinder sample from determining. The linear range was 0.02-2μg/ml.The minimum detection limit was 0.02μg/ml. The inter-day and intra-day RSD was less than 15%. Conclusion Be confirmed, the indexes of the method can up to all the requirement to determine creature samples and it is simple and sensitive. So, it is applicable to determine the concentrations of omeprazole in human plasma.
【Key words】 omeprazole； HPLC； concentration in plasma
奥美拉唑是一种高效的胃酸分泌抑制剂，在人体内经细胞色素P450氧化酶催化代谢。在人群中存在着奥美拉唑羟化代谢多态性，导致奥美拉唑的血药浓度存在明显的个体差异［1,2］。本研究针对奥美拉唑的这一特点，试图建立一种具有较高灵敏度又方便易行的HPLC方法来测定奥美拉唑的血药浓度，为其药代动力学研究奠定基础。
1 材料和方法
1.1 药品与试剂 奥美拉唑（南京奥赛康）；乙腈（色谱纯,Merck公司）；磷酸氢二钾、三乙胺、磷酸均为分析纯。
1.2 仪器与色谱条件 高效液相色谱仪（Waters）；N2000色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；高速低温离心机（上海安亭科学仪器厂）；液体快速混合器（江西医疗器械厂）；METTLER TOLEDO 320—S pH计。
色谱条件：色谱柱为Discovery C18柱（250mm×4.6mm，5um）；柱温为30℃；流动相为乙腈:0.01mol/L K2HPO4（pH7.5）＝35:65（v/v）；流速为1.0ml/min；检测波长为302nm。
1.3 标准溶液的配制 精取奥美拉唑对照品10mg，用乙腈溶解，使成浓度为100μg/ml的标准贮备液A。精取A液，用乙腈稀释成浓度为10μg/ml的标准贮备液B。分别量取B液0.2、0.5、1.0ml，A1液0.25、1.0、2.0ml，加入10ml容量瓶，乙腈定溶，使成浓度分别为0.2、0.5、1.0、2.5、10、20μg/ml的系列标准溶液，置4℃冰箱备用。
1.4 血浆样品的预处理 精取血样200μl，加入400μl乙腈，涡旋混合30s，12000rpm低温离心15min，取500μl上清液置于50℃水浴挥干，加入100μl流动相溶解，涡旋混合30s，12000rpm低温离心10min，取上清液20μl进样分析。
1.5 标准曲线的制备 精取1.3项下系列标准溶液各20μl，分别加入空白血浆180 μl，配成浓度分别为0.02、0.05、0.1、0.25、1.0、2.0μg/ml的标准血浆，按照1.4项下方法进行处理和进样分析。以样品峰面积（A）对血药浓度（C）进行线性回归，得标准曲线。
1.6 回收率测定 按1.5项下方法制备高、中、低3种浓度为0.05、0.25、2μg/ml的质控血样，另用乙腈代替血浆，配制相当于血药浓度分别为2、0.25、0.05μg/ml的标准溶液，每个浓度点配制5份，按照1.4项下方法操作，记录峰面积。以各浓度标准溶液峰面积的平均值为标准，将质控血样峰面积分别与之比较，计算绝对回收率。
1.7 精密度测定 按1.5项下方法制备高、中、低3种浓度为0.05、0.25、2μg/ml的质量控制血样，每个浓度点配制5份，按照1.4项下方法操作，记录峰面积，代入当日标准曲线，计算批内精密度。按同样方法连续测定3批，计算批间精密度。
2 结果
2.1 血浆样品的色谱行为 在本实验所采用的色谱条件下，空白血浆、空白血浆加奥美拉唑及奥美拉唑血浆样品色谱图如Fig1所示。奥美拉唑的保留时间为6.0min左右，峰形良好，血浆中内源性物质不干扰样品测定。Fig1 HPLC chromatograms of the plasma sample
A.Blank plasma; B.Blank plasma spiked with omeprazole; C.Plasma sample of volunteer
2.2 线性范围和定量下限 以奥美拉唑峰面积A对浓度C（μg/ml）作线性回归处理，得标准曲线方程：Y=107458*C－302.23，（r=0.9999，n＝5）。结果表明，奥美拉唑峰面积与其血药浓度在0.02～2.0μg/ml范围内具有良好的线性关系。血浆中奥美拉唑的定量下限为0.02μg/ml。
2.3 回收率 高、中、低3种浓度奥美拉唑的绝对回收率结果见Tab1。
2.4 精密度 高、中、低3种浓度奥美拉唑的批内、批间精密度结果见Tab2、3。Table 3 Inter-day precision of the method
3 讨论
奥美拉唑属于苯丙咪唑类衍生物，在光照条件下不稳定,见光易分解,操作过程要尽量避光进行［2］。
由于奥美拉唑在酸性条件下不稳定，易转化成中间体、次磺酸、次磺酰胺，增加了杂质峰的影响［3］，实验采用乙腈:0.01mol/L K2HPO4＝35:65（v/v）为流动相，以三乙胺调pH值至7.5，保证了奥美拉唑的稳定性，同时少量三乙胺的加入对峰形有所改善。
本实验所用的血浆样品处理方法与以往的文献报道有所不同［1～4］：血样用乙腈除蛋白后，定量吸取上清液，水浴中通空气吹干，流动相溶解后进样。此方法与以往文献方法相比，操作简单，不需大量使用有机溶剂，减少了安全隐患，也更经济。此方法虽在浓缩样品的同时也浓缩了血样中的内源性物质等干扰组分，但从空白血浆同法操作后的色谱行为来看，通过调节流动相比例，可避开杂峰的干扰。
【参考文献】
1 胡玉荣,张楠. RP－HPLC法测定人血浆中奥美拉唑浓度及其在健康男性志愿者药代动力学研究.中国临床药理学与治疗学, 2005, 10(9):1065-1068.
2 付良青,黄 丰. 中国健康志愿者的奥美拉唑及其代谢产物的药代动力学.中国药理学与毒理学杂志,2003,17(1):51-54.
3 Hofmann U, Schwab M, Treiber G， et al. Sensitive quantification of omeprazole and its metabolites in human plasma by liquid chromatography-mass spectrometry,Journal of Chromatography B: Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences， 2006,831:1-2 (85-90).
4 Huang J, Xu Y. Development of a liquid chromatography/tandem mass spectrometry assay for the quantification of rabeprazole in human plasma, Rapid Commun. Mass Spectrom， 2005， 19:16 (2321-2324).
本课题为江苏省卫生厅医学科技发展基金资助项目
作者单位： 1 210029 江苏南京，江苏省人民医院临床药学研究室
2 210029 江苏南京，南京中医药大学
(编辑：黄 杰)