HPLC法测定抗骨质增生丸中淫羊藿苷的含量

【摘要】  建立HPLC法测定抗骨质增生丸中淫羊藿苷的含量。方法 用Diamonsil C18 （4.6mm×200mm，5μm）色谱柱，流动相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，检测波长：270nm。结果 淫羊藿苷在0.04052～0.5065μg范围内与峰面积线性关系好，r=0.99995，平均回收率为99.4%，RSD为0.6%（n=6）。结论 本法测定简便，结果准确，重复性和分离度好，可用于抗骨质增生丸的质量控制。

【关键词】  HPLC 淫羊藿 抗骨质增生丸 含量测定

 【Abstract】  Objective   To establish a HPLC method for the determination of icariin in Kanggu zhizengsheng pills.Methods  A DiamonsilTM C18 column （200mm×4.6mm, 5μm） was used with a mobile phase of acetonitrile-water（26:74）. The flow rate was1.0ml·min-1 and the detection wavelength was 270nm. Results  The linear range was at 0.04052?g～0.5065?g （r=0.99995） and  the average recovery was 99.4% with RSD0.6%（n=6）.Conclusion  The determination method is simple and accurate and it can be used for the quality control of Kanggu zhizengsheng pills.

    【Key words】  HPLC; icariin; Kanggu zhizengsheng pills ; determination

    抗骨质增生丸为卫生部药品标准中药成方制剂第一册收载的品种［1］，由熟地黄、淫羊藿、肉苁蓉等九味中药组成，具有补腰肾、强筋骨、活血、止痛等功效。用于治疗增生性脊椎炎、颈椎综合征、骨刺等骨质增生症。原标准中无含量测定方法，方中淫羊藿为主要药味,其有效成分为淫羊藿苷。有关淫羊藿苷的含量测定方法，主要为HPLC法［2，3］。为能有效地控制药品质量，本研究用HPLC测定淫羊藿苷，建立质量控制标准。

　　1  仪器与试药

　　Shimadzu HPLC色谱仪（Shimadzu LC-20A Liquid Chromatograph, Shimadzu SIL-20A Auto Sampler, Shimadzu SPD-M20A Diode Array Detector, Shimadzu CTO-10AS VP Column Oven）LC Solution 色谱工作站。水为I级纯化水，乙腈为色谱纯，其他为分析纯。淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：110737-200312）。抗骨质增生丸：山东临清华威药业有限公司生产（批号：20060507、20060601）。

　　2  试验方法与结果

    2.1  色谱条件  色谱柱：Diamonsil C18 柱（4.6mm×200mm，5μm），柱温：35℃，流动相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，检测波长：270nm。

    2.2  溶液的制备

    2.2.1  对照品溶液的制备  精密称取淫羊藿苷对照品10.13mg，加甲醇制成每1ml含淫羊藿苷20.26μg的溶液，备用。

    2.2.2  供试品溶液的制备  取本品，剪碎，混匀，取3g，精密称定，加等量硅藻土，置索氏提取器中，加氯仿40ml，加热回流2h，弃去氯仿液，药渣挥干，精密加甲醇50ml，称重，超声1h，加甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液。

    2.2.3  阴性对照溶液的制备  取缺淫羊藿的处方，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

    2.3  系统适用性试验  分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液进样10μl，色谱图见图1。淫羊藿苷峰保留时间为20.9min，阴性对照色谱图在淫羊藿苷峰位置无干扰峰。

    2.4  线性关系考察  精密吸取对照品溶液2、5、10、20、25μl，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，进行线性回归，得方程：Y=-4.80×103+2.26×106X，r=0.99995，线性范围为0.04052～0.5065μg。

    图1  HPLC色谱图2.5  精密度试验  取对照品溶液连续进样7次，每次10μl，峰面积积分值RSD=0.8%

    2.6  重复性试验  取同一批号（20060601）样品6份，按供试品液制备方法制备，依法测定，结果淫羊藿苷含量RSD=1.0%，表明本法重复性好。

    2.7  稳定性试验  取同一样品溶液（20060601）在0、6、12、24h分别进样10μl，依法测定，淫羊藿苷峰面积RSD=0.5%，表明样品溶液在24h内稳定。

    2.8  加样回收试验  取已知含量的样品（20060601），精密加入淫羊藿苷对照品适量，按样品测定方法测定含量，计算回收率，结果见表1。表1  回收率试验结果

    2.9  样品测定  取6批样品，按2.2.2项下方法制备样品溶液，依法测定淫羊藿苷的含量，结果见表2。表2  6批样品含量测定结果

    3  讨论

    3.1  考察流动相中乙腈对淫羊藿苷保留时间和分离度的影响  曾采用抗骨增生胶囊中测定淫羊藿苷的流动相乙腈-水（30：70）［4］，乙腈-水（28：72）、乙腈-水（27：73），结果表明乙腈量增大，保留时间提前，但分离效果差，与杂质峰无法分离，以乙腈-水（26：74）较合适。

    3.2  本实验考察了供试品溶液的提取方法（索氏提取与超声处理）和提取时间，结果索氏提取2h，能除去大部分干扰杂质，超声处理1h后继续超声，含量不再增加，故采用此提取方法。

【参考文献】
  1 卫生部药品标准中药成方制剂，第一册，86.

2 干国平,李水清,张莲萍,等.HPLC法测定更年灵胶囊中淫羊藿苷的含量.中国药师,2006,9（8）:743-744.

3 洪行球,黄燕芬.HPLC测定乳腺康颗粒剂中淫羊藿苷的含量.中成药,2004,26（2）:165-167.

4 国家药典委员会.中国药典，一部.北京：化学工业出版社，2005，470-471.

作者单位：417000 湖南娄底，娄底市药检所