HPLC法测定小儿清热宁颗粒中黄芩苷的含量

【摘要】  目的 建立小儿清热宁颗粒中黄芩苷的含量方法。方法 采用高效液相色谱（HPLC）法测定小儿清热宁颗粒中黄芩苷的含量。结果 HPLC法测得本品中黄芩苷的含量为0.648～0.652mg/ml，在0.40～2.00μg/ml的范围内，溶液的浓度与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9998，加样回收率为99.76%（n=5），RSD为0.9%。结论 本品定量方法简便、准确，专属性强，能够控制该制剂的内在质量。

【关键词】  小儿清热宁颗粒；高效液相色谱法；含量测定；黄芩苷

    【Abstract】  Objective  To establish a method for the determination of baicalin in Xiaoer qingrening granules.Methods  A Diamosil TM C18 column （250 mm×4.6 mm,5μm） was used with a mobile phase of methyl alcohol -water- acetic acid （45:55:1）.The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 322 nm. Results  The Baicalin showed a good linear relationship within a range of 0.40～2.00μg/ml（r=0.9998）,the average  recovery  was 99.76% with RSD 0.9%（n=5）.Conclusion  The HPLC method is accurate and reliable,it can be used for the quality control of this product.

    【Key words】  Xiaoer qingrening granule; HPLC; determination; baicalin

    小儿清热宁颗粒是由黄芩、金银花、柴胡、板蓝根、羚羊角粉等药物组成，该方是在大量临床实践的基础上，以中医辨证为主，结合现代医学及现代药理基础研制出的治疗流感、病毒感染、上呼吸道感染的有效药物，为更好地控制其质量，保证该制剂的临床疗效，本文采用HPLC法对制剂中的主要成分黄芩苷进行了含量测定，现报道如下。

    1  实验材料

    1.1  仪器  LC-2010A高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站，UV-2401型紫外分光光度仪（日本导津）。

    1.2  试药  黄芩苷对照品（中国生物制品检定所，批号：110715-200212）；小儿清热宁颗粒（河南辅仁堂制药有限公司，批号：20071018；20071223；20080126）；甲醇为色谱纯；其余试剂为分析纯。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件与系统适应性试验  色谱柱：Diamosil TM（钻石）C18（5μm,250mm×4.6mm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（45：55：1）；检测波长：276nm；流速：1.0ml/min；柱温室温（25℃）；进样量：10μl；理论塔板数按黄芩苷峰计应不低于1500。

    2.2  溶液的制备

    2.2.1  对照品溶液的制备  精密称取在60℃减压干燥的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

    2.2.2  供试品溶液的制备  精密称取本品10g，置50ml容量瓶中，加60%甲醇适量使溶解，超声处理20min，放置室温，加60%甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

    2.3  标准曲线的制备  精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.1mg的溶液，分别量取对照品溶液4、8、12、16、20μl ，进样测定，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，得回归方程为Y=1151340.8+100157.4X，r=9998，线性范围0.40～2.00μg/ml。

    2.4  精密度和稳定性试验  取样品（批号：20071018），精密称取10g，置50ml容量瓶中，加60%甲醇适量使溶解，超声处理20min，放置室温，加60%甲醇至刻度，摇匀，取上述溶液重复进样5次，进样量10μl，其峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.85%，表明精密度较好。取同一样品溶液，在0、2、4、6、12、24h分别进样测定，结果5次测得值（黄芩苷，mg/ml）的RSD为1.3%，可见黄芩苷在24h内稳定。

    2.5  加样回收率试验  精密量取已知含量的样品（批号：20071018，含量为0.529mg/ml）适量，共5份，分别定量加入黄芩苷对照品适量，按“2.2.2供试品溶液的制备”方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，结果见表1。 表1  加样回收率试验 

    2.6  样品的含量测定  分别称取三个批号的样品适量，照正文所述方法测定黄芩苷的含量，结果见表2。表2  含量测定结果

    3  讨论

    3.1  检测波长的确定  在选择测定波长时，本文曾取样品在200～350nm波长范围内进行扫描，结果在276.5nm处有最大吸收，故选择测定波长为276nm。

    3.2  流动相的选择【1】  本文比较了甲醇-水-磷酸（50：50：0.3）和甲醇-水-冰醋酸（50：50：1）等流动相，结果以甲醇-水-冰醋酸（45：55：1）分离效果最好。采用HPLC法对该制剂中的黄芩苷进行含量测定，结果准确，方便简捷，重现性及回收率均理想，可以有效控制产品的内在质量。

【参考文献】
  1 国家药典委员会.中华人民共和国药典，2005年版（一部）.北京：化学工业出版社，2005，370-371；405-406.

作者单位：225300 江苏泰州，泰州市第四人民医院