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【摘要】 目的 建立克利贝特片含量的HPLC测定法。方法 采用C18色谱柱，以水-乙腈-三乙胺 （60:40:1）（用磷酸调节pH值至7.0±0.1）为流动相，检测波长232nm。结果 克利贝特在1.608～8.04μg范围内线性关系良好,平均回收率为100.1%（RSD=0.45%）。结论 采用反相高效液相色谱法测定克贝特片的含量，该法专属性强，重现性好。
【关键词】 克利贝特；HPLC；测定
【Abstract】 To establish a HPLC method for determination of clinofibrate tablets.Methods Diamonsil C18 column （250mm×4.6mm, 5um） was used with a mobile phase of water-acetonitrile-triethylamine（60：40：1）,which was adjusted to pH 7.0 with phosphoric acid .The folw rate was 1.0ml/min and the detection wavelength was 232nm.Results Clinofibrate had a good linearity in the range of 1.608～8.04μg and the average recovery was 100.1% with RSD of 0.45%.Conclusion This method is specific and reproducible,and it can be used for the determination of clinofibrate tablets.
【Key words】 clinofibrate；HPLC；determination
克利贝特（Clinofibrate）是日本住友公司研发的一种新型的纤维酸类降血脂新药，1981年首次在日本上市，临床主治各种类型的高脂血症。本品在国内尚未上市，我公司研制的克利贝特片质量稳定可控,已完成临床前各项研究工作。本实验采用反相高效液相色谱法测定克利贝特片的含量，该法专属性强，重现性好。
1 仪器与试药
仪器：Agilent 1100系列高效液相色谱仪；UV-2401紫外-可见分光光度计；METTLER AG 245电子天平（精度十万分之一）。
试药：克利贝特片（扬子江药业集团有限公司试制，规格：0.2g；批号：060426、060427、060428）；乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Diamonsil（钻石）C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；以水-乙腈-三乙胺 （60:40:1）（用磷酸调节pH值至7.0±0.1）为流动相，检测波长232nm，流速：1.0ml/min,进样量20μl；柱温为室温。在上述色谱条件下，按克利贝特峰计算理论板数不低于3000。
2.2 测定波长的选择 取克利贝特对照品适量，精密称定，用甲醇制成每毫升约含10μg的溶液，紫外-可见分光光度法，在400～200nm波长范围内扫描，结果见图1。克利贝特在232nm波长处有最大吸收。
2.3 专属性试验［1］ 取克利贝特片细粉适量（约相当于克利贝特10mg），置50ml量瓶中，加流动相适量，超声使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm孔径微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，结果见图2。
2.4 空白试验 按处方配比制备克利贝特片的阴性溶液，取阴性溶液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明辅料不干扰测定。
2.5 线性试验 取克利贝特对照品适量，精密称定，用流动相分别制成每毫升含0.0804、0.1608、0.2412、0.3216、0.402mg的溶液。在上述色谱条件下分别进行测定，记录色谱图，峰面积分别为：3375.129、6879.072、10349.787、13703.528、17384.082，以对照品进样量（X）与峰面积（Y）进行线性回归，得回归方程：Y=2166813.6 X -114.4（r=0.9999）。结果表明，克利贝特在1.608～8.04μg范围内，进样量与峰面积线性关系良好。
2.6 供试品溶液稳定性 取同一批号样品（批号: 060428）的供试品溶液，分别于0、2、4、6、8与24h进样，测得其峰面积分别为8732.07324、8731.31055、图1 克利贝特的紫外吸收图谱8714.62598、8715.05273、8743.63174及8739.45162，平均值为8729.36（RSD=0.14%），结果表明，供试品溶液在24h内稳定。
2.7 重复性试验 取同一批号样品（批号: 060428），重复测定6次，测得的含量分别为100.1%、100.3%、100.2%、99.7%、99.9%、100.1%，平均值为100.1%，RSD为0.22%。
2.8 回收率试验 取克利贝特对照品各约16、20、24mg，分别置于100ml量瓶中，按处方加入辅料，制成3个浓度的模拟样品，每个浓度各3份，取供试品溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算回收率，结果分别为99.4%、100.6%、99.9%、100.0%、100.7%、99.7%、99.9%、100.6%、100.3%，平均值为100.1%，RSD为0.45%。
图2 克利贝特片的HPLC测定图谱2.9 样品测定 取克利贝特片细粉适量（约相当于克利贝特10mg），置50ml量瓶中，加流动相适量，超声使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm孔径微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪。另取克利贝特对照品适量，精密称定，加流动相稀释制成每毫升中含克利贝特0.2mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。3批样品的含量分别为101.3%、101.6%及100.9%。
3 讨论
在选择色谱条件时,笔者用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，比较了0.03mol/L磷酸二氢钠溶液－甲醇（60:40） 用磷酸调节pH值至3.0～4.5， 0.1%磷酸－乙腈（60:40）等流动相系统，最终确定本文色谱条件,分离效果较好。
用HPLC法测定克利贝特片含量快速、准确、可靠，不仅可以进行克利贝特的含量测定，而且还可以进行有关物质的检测。
【参考文献】
1 陈年根，刘新泳，任兆平.克利贝特的合成.中国医药工业杂志,2007，38（2）:
作者单位：江苏泰州,扬子江药业集团江苏扬子江医药经营有限公司