HPLC法测定加替沙星滴眼液的含量和有关物质

【摘要】  目的 建立HPLC法测定加替沙星滴眼液的含量和有关物质。方法 采用ODS柱， 1%三乙胺溶液(用磷酸调节pH至4.5)-乙腈(87:13)为流动相，检测波长325nm。结果 加替沙星在50～1000μg/ml范围内线性关系良好，平均回收率100.5%，RSD%为1.2%。结论 本方法灵敏迅速，准确可靠，可用于加替沙星滴眼液的质量控制。

【关键词】  加替沙星;滴眼液;HPLC;含量测定;有关物质

【Abstract】 Objective To study a new method for determination for related compounds and content of gatifloxacin eye drops by HPLC.Method Separation was carried out on an ODS column using 1% triethylamine (adjusted with phosphoric acid to a pH of 4.5) - acetonitrile (87:13) at detection wavelength 325 nm.Result The linear range of gatifloxacin concentration was from 50 to 1000 μg/ml.The average recovery of sample was 100.5% and RSD was 1.2%.Conclusion This method is sensitive and accurate with good repeatability and suitable for the quality control of gatifloxacin eye drops.

　　【Key words】 gatifloxacin; Eye Drops; HPLC; content determination; related compounds

　　加替沙星(gatifloxacin 以下简称为Ⅰ)是日本杏林制药公司继诺氟沙星、氟罗沙星和左氧氟沙星之后研发的氟喹诺酮类抗菌药[1]，加替沙星在眼科感染中应用广泛、安全、有效[2]。本公司根据临床需要开发滴眼液，采用HPLC法测定加替沙星含量和有关物质。

　　1 仪器与试药

　　瑞士梅特勒XS205电子天平;美国安捷伦公司Agilent 1100高效液相色谱仪;Diamonsil C18柱(4.6mm×200mm，5μm); Ⅰ对照品(中国药品生物制品检定所，含量99.8%，编号130531-200201);Ⅰ原料药(江苏永达药业有限公司，含量99.2%，批号20050122);Ⅰ滴眼液(扬子江药业集团有限公司中试产品);配制流动相用乙腈为色谱纯、水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以1%三乙胺溶液(用磷酸调节pH至4.5)-乙腈(87:13)为流动相;检测波长为325nm;进样量10μl;流速1.0ml/min;柱温：35℃;理论板数以Ⅰ峰计不低于2500。取辅料按处方比例配成空白溶液，进样测定结果表明辅料无干扰。见图1。

　　A.对照品溶液图 B.空白辅料图 C.样品溶液图

　　图1 加替沙星HPLC色谱图

　　2.2 溶液配制 精密称取Ⅰ对照品适量，加稀磷酸溶液(2→1000)适量使溶解，加0.039%磷酸二氢钠溶液稀释成每1ml中含0.5mg的对照品溶液。同法取Ⅰ样品适量，用0.039%磷酸二氢钠溶液稀释成每1ml中含0.5mg的供试品溶液。

　　2.3 线性关系考察 精密称取Ⅰ对照品适量，加稀磷酸溶液(2→1000ml)适量使溶解，加0.039%磷酸二氢钠溶液稀释成每1ml含10mg的溶液，精密量取上述溶液适量，制成每1ml含1、0.05、0.1、0.25、0.5、0.8、1.0mg的溶液，摇匀后进样测定，以峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=20295988C+22157，r=0.9999，表明在0.05～1.0mg/ml范围内线性关系良好，以信噪比S/N=3测定Ⅰ最低检测限为10.3μg/ml。

　　2.4 专属性试验 Ⅰ原料药经酸、碱、光照和氧化破坏试验。结果表明，经酸、碱破坏后产生的杂质峰能与主峰基线分离。

　　2.5 重现性和稳定性试验 精密取Ⅰ样品适量，加上述稀磷酸溶液，制得0.4、0.5、0.6mg/ml的溶液各3份，分别进样测定，计算得1峰面积RSD分别为0.47%、0.59%和1.02%。取上述0.5mg/ml的Ⅰ溶液，分别于0、1、2和4h进样测定，记录峰面积，计算得RSD为0.52%，表明1溶液在4h内稳定。

　　2.6 回收率试验 分别按处方量的80%、100%和120%精密称取Ⅰ原料药适量，加入处方量辅料，制得Ⅰ滴眼液的模拟样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液各3份，分别进样测定，计算平均回收率为100.5%，RSD为1.4%(n=9)。

　　2.7 样品测定

　　2.7.1 含量测定 取对照品溶液，供试品溶液分别进样测定，按外标法以峰面积计算3批样品的含量分别为99.7%、100.1%和100.4%。

　　2.7.2 有关物质测定 分别取对照品溶液，供试品溶液进样测定，调节检测器灵敏度，记录色谱图至主峰保留时间的3倍，按主成分自身对照法计算3批样品的有关物质分别为0.38%、0.47%和0.25%。

　　3 讨论

　　HPLC法测定Ⅰ所用流动相有1%三乙胺溶液(用磷酸调节pH至4.5)-乙腈和柠檬酸-乙腈等。当以柠檬酸-乙腈为流动相时调整流动相的比例，可在24min后检出Ⅰ经酸、碱破坏的产物。而采用本色谱条件不仅使Ⅰ的保留时间由25min提前至8min左右，且可在20min内可检测出Ⅰ经酸、碱破坏的产物。采用本法测定加替沙星滴眼液的含量和有关物质简单、快捷、方便。

【参考文献】
  　1 朱曼，王睿.第四代氟喹诺酮类抗菌药——加替沙星. 中国临床药理学与治疗学,2001,6(4):377.

　　2 杜煜,郭惠元.广谱、高效、低毒的新喹诺酮类抗菌药加替沙星. 国外医药·抗生素分册,2001,22(1):34-39.