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【摘要】 目的 研究德康产通博益脑片与通博益脑胶囊在正常人体的药理学与生物等效性。方法 18名健康男性志愿受试者随机交叉口服40mg受试制剂通博益脑片和参比制剂通博益脑胶囊40mg后，采用高效液相色谱法，以卡马西平为内标，测定两种制剂的血浆药物浓度。结果 受试制剂和参比制剂均符合一级吸收开放性一室模型，主要药物代谢动力学参数0～12h药-时曲线下面积(AUC0～12)分别为(2719.9±1551.7)和(2820.8±1668.1)ng·h/ml;锋浓度(Cmax)分别为(820.1±420.1)和 (760.0±415.4)ng/ml;达峰时间(Tmax)分别为(2.4±0.6)和(2.5±0.6)h;血浆半衰期(T1/2) 分别为(2.2±0.8)和 (2.4±0.9)h。相对生物利用度为 (99.69±13.51)%。结论 通博益脑片与通博益脑胶囊为生物等效制剂。
【关键词】 通博益脑片;通博益脑胶囊;药动学;生物等效性
【Abstract】 Objective To study the pharmacokinetics and bioequivalence in Dekang Pharmaceutical limited company and reference products Tong Bo Benefician Brain tab. Methods Tong Bo Benefician Brain capsules and Tong Bo Benefician Brain tab were given to 18 male healthy volunteers with a dose of 40mg according to a randomized cross over design. Plasma concentrations of omeprazole were determined by HPLC. Results The concentration-time curves of both preparations fitted to a one-compartment model. The main pharmacokinetic parameters AUC0 12，Cmax，Tmax ，T1/2 were (2719.9±1551.7) and (2820.8±1668.1) ng.h/ml、(820.1±420.1) and (760.0±415.4) ng/ml,(2.4±0.6) and (2.5±0.6) h ,(2.2±0.8) and (2.4±0.9) h respectively. Relative bioavailability was (99.69±13.51)%.Conclusion Tong Bo Benefician Brain tab,Tong Bo Benefician Brain capsules were bioequivalent.
【Key words】 Tong Bo Benefician Brain capsules ;Tong Bo Benefician Brain tab;pharmacokinetics;bioavailability
湖南德康制药股份有限公司生产的通博益脑胶囊(CTB)对于提高脑组织的供血状况，保护脑细胞，改善脑细胞功能具有较好功效，且能抗凝。该药上市后，疗效卓著，深受欢迎。为了吞咽更便利，应部分患者服用习惯的要求，本厂又拟开发第8类新药-通博益脑片(TTB)。为更好地对TTB人体药物代谢动力学和相对生物利用度进行深入研究，并进一步评价其生物等效性，为临床用药提供参考。特对两种通博益脑制剂的不同剂型进行实验研究。
1 药品、试剂与仪器
1.1 药品
受试制剂(T制剂)为湖南德康制药股份有限公司生产的通博益脑片TTB，规格为20mg/粒，批号为20080901;参比制剂(R制剂)为湖南德康制药股份有限公司生产的通博益脑胶囊CTB，规格为20mg/粒，批号为20080902;CTB对照品(湖南德康制药股份有限公司);卡马西平(内标，中国药品生物制品检定所,批号20080201)。
1.2 试剂
甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸二氢铵为分析纯，所有试验用水均为重蒸馏水。
1.3 仪器
Agilent 1100 型高效液相色谱仪及Agilent 1100 型VWD检测器(美国Agilent公司);INV-2044固相萃取仪 (美国);梅特勒-托利多AB135-S电子天平(瑞士)。
2 方法与结果
2.1 血药浓度测定方法[2]
色谱条件：采用Hypurity ODS2柱(150mm×4.6mm，5μm)为色谱柱，柱温为30℃，流动相为0.05mol/L NH4H2PO4-乙腈(62.6：37.4，V/V)，流速为1.0ml/min，进样量40μl。在此色谱条件下，空白血浆、标准溶液、空白血浆中加入标准溶液和受试者服药后血浆样品的色谱图见图1。保留时间CTB、TTB约为4.0min，内标约为5.1min，血浆内源性物质及其他杂质不干扰样品的分离测定。 图1 高效液相色谱图 标准溶液的配置：精确称取CTB对照品21.7mg，置25ml容量瓶中，以少量甲醇溶解并用硼酸-氯化钾缓冲液定容至刻度，得浓度为868mg/ml 的CTB标准溶液，再用硼酸-氯化钾缓冲液进一步稀释成浓度为86.8、8.68、0.868mg/ml 的CTB标准溶液。称取卡马西平6.5mg ，置25ml 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，应用时进一步稀释为10.4g/ml的内标溶液。血浆样品处理：取待测血浆0.5ml，置5ml离心管中，加入10μl内标溶液(浓度为10.4μg/ml)，充分摇匀，全部取出，放入预先用2ml甲醇和2ml重蒸馏水活化好的固相萃取柱(ODS C18)中，用30%甲醇1ml充分洗涤，弃去洗涤液，用1ml甲醇洗脱，洗脱液用氮气吹干，残渣用100μl流动相溶解，取40μl进样。标准曲线制备：用空白血浆将CTB标准溶液稀释成浓度为6.944、13.888、27.776、69.44、138.88、277.76、694.4、2604.0ng/ml的系列标准溶液，按血浆样品处理方法处理并测定，以TTB、CTB峰面积与内标峰面积之比对TTB、CTB浓度进行线性回归，得标准曲线方程。回归方程为AreaOmz/AreaIS= 0.00169257C-0.0034733，相关系数r=0.9997。线性范围为6.944～2604.0ng/ml，最低定量限为6.944 ng/ml。以信噪比S/N大于3计，方法的最低检测限为1.7ng/ml。萃取回收率：在空白血浆中加入标准溶液，分别配制成低(27.776 ng/ml)、中(277.76ng/ml)、高(2604.0ng/ml)3个浓度，按血浆样品处理方法处理并测定;另用甲醇配制相应浓度的TTB标准溶液，不经任何处理，取40μl直接进样，以此为标准，将两组峰面积进行比较并计算。结果TTB的低、中、高浓度的萃取回收率分别为84.5%、82.5%、75.2%，内标的萃取回收率为88.0%。方法回收率及精密度: 取空白血浆及标准溶液，按“线性范围和最小可定量浓度”项下方法制备TTB低、中、高3个浓度(27.776、277.76、2604.0ng/ml)的质量控制样品，每一浓度平行操作5份，代入线性方程计算浓度，以测得值与加入值的比值计算回收率，并计算日内精密度。连续3天配制并测定上述浓度样品，考察方法的日间精密度。结果见表1。方法的回收率均在85%～115%之内，日内、日间精密度的RSD均小于15%，符合生物等效性研究的方法学要求。表1 TTB回收率及精密度样品稳定性：用空白血浆配制3个不同浓度(10、100、400ng/ml)的样品，分别进行冻融试验、样品-20℃冻存及室温稳定性试验。结果样品反复冻、融4次、-20℃冻存条件下40d、室温放置12h，稳定性均良好。
2.2 生物利用度试验及生物等效性评价
受试者：18名健康志愿受试者均为男性，年龄(21.8±0.9)岁，身高(170.8±3.5)cm，体重(61.7±5.7)kg，无烟酒嗜好，试验前经询问病史、体格检查和实验室检查未发现异常，无药物过敏史和药物依赖史，无慢性病史，两周内未服用任何药物。受试期间统一进食清淡饮食，不使用除试验(参比)制剂以外的任何药物，不接受烟、酒及含咖啡饮料。受试者试验前签署知情同意书，试验方案经医学伦理委员会批准。 试验方法：采用两周期双交叉试验设计。将受试者随机等分成两组，每组9人。两组受试者禁食12h后，于早上8:00分别口服T制剂或R制剂40mg，用温开水200ml送服。服药后2h可自由饮水，服药后4h及10h统一进食。于受试者服药前及服药后0.5、1.0、1.5、2、2.5、3、3.5、4、5、6、8、10、12h 取静脉血3ml。清洗1周后，交叉单剂量服用R制剂或T制剂，并于相同时间点采集血样。将血样置肝素管中，立即离心，分离出血浆，并在2h 内通过固相萃取处理，氮气吹干，密封，于冰箱冷藏放置。药代动力学分析：18名受试者血药浓度-时间数据经DAS药动学程序(中国数学药理学会，孙瑞元等编)处理，符合一室模型。0～12h的药-时曲线下面积(AUC0～12)以梯形面积法求得，达峰时间(Tmax)及峰浓度(Cmax)均用实测值，相对生物利用度( F)= AUC0～12(T)/ AUC0～12(R) ×100%。其他主要药代动力学参数T1/2Ka (吸收速率常数)、T1/2Ke (消除速率常数)、 Tlog(滞后时间)用DAS药动学程序处理求得。数据统计方法：AUC0～tn和Cmax经对数转换后进行药物间、周期间、个体间的三因素方差分析，再以双、单侧t检验进行等效性判断。若T制剂AUC0～tn对数值的90%可信限落在R制剂80～125%范围内，Cmax对数值的90%可信限落在R制剂70%～143%范围内，则认定T制剂与R制剂生物等效[2，3]。Tmax经对数转换后进行方差分析。血药浓度测定结果：18例受试者口服T制剂和R制剂40mg后各时间点的平均血药浓度-时间曲线见图2。图2 平均血药浓度-时间曲线 药代动力学参数：主要药代动力学参数见表2。生物等效性评价[4]：将AUC0～12、Tmax、Cmax分别经三因素方差分析，仅个体间差异有极显著(P<0.01)，药物间、周期间差异均无显著性(P>0.05)。经双向单侧t检验，log AUC0～12TL=6.24，TH=4.81，均大于T0.05(1.74)，P<0.05;log AUC0～12TL=5.51，TH=2.46，均大于T0.05(1.74)，P<0.05。等效性检验结果合格，说明T制剂与R制剂均在规定的80%～120%范围内，90%置信区间AUC0～12为96.30%～112.26%，Cmax为101.31%～122.17%。T制剂相对于R制剂的生物利用度为(99.69±13.51)%，两制剂具有生物等效性。表2 单剂量口服T制剂和R制剂40mg后的主要药代动力学参数
3 讨论
通博益脑片中主要成分为远志、五味子、石菖蒲、莱菔子等药。通博益脑片中远志Polygala tenuifolia Willd含远志皂苷元、细味远志素、远志醇、远志碱、N-乙酰葡萄糖。味辛、苦，性温。归心、肾、肺经。远志煎剂灌胃可使小鼠自发活动减少，安静，可使用下剂量(MED以下)的戊巴比妥钠小鼠入睡，能明显对抗戊四氮所致的小鼠惊厥。从而用于心肾不交、失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚等症[3]。对高血压症及其并发症状有一定治疗作用。是通博益脑片的君药。通博益脑片中五味子为木兰科植物，北五味子Schisandra Chinensis(Turcz.)Baill的干燥成熟果实。主要成分为联苯环辛烯型木脂素，还有抗坏血酸与维生素E等。具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效。五味子具有明显的镇静作用，五味子醇甲(schizandrol-A)能减少小鼠自主活动，延长Phenobarbital的睡眠时间。可改善人的智力活动，抗疲劳，提高工作效率，可提高大鼠大脑黑质纹状体和下丘脑中Dopamine的含量。去氧五味子素(deoxyschizandrin)有扩血管作用，对于由PGFzx、CaCl2、Noradrenaline引起的离体狗肠系膜动脉收缩有抑制作用，能增加豚鼠离体心脏及麻醉狗冠脉血流量。用含五味子的饲料喂家兔能调节心肌细胞和心肾小动脉的能量代谢，提高心肌代谢酶活性，改善心肌的营养和功能[4]。五味子为通博益脑片的臣药。通博益脑片中石菖蒲[5]为天南星科多年草本植物Acorus gramineus soland.的根茎。味辛性温，归心、胃经。含丁香油酚、细辛醛、细辛酮、棕榈酸。可治中恶卒死，客忤癫痫，善开心孔，通达九窍，明益耳目，补养五脏。用于痰湿蒙闭清闭，清阳不升所致的神识昏谜。石菖蒲是通博益脑片的佐药。通博益脑片中莱菔子为十字花科植物Raphnus sativus L.的干燥成熟种子。含芥子碱(sinapine)、莱菔子素、邻苯二甲酸丁二酯。味辛、甘，性平。归肺、脾、胃经。它的主要降压成分是白芥子碱。中医认为莱菔子能开宣肺气，顺气化痰，润肠通便，调节人体整个气机升降，平稳降压[6]。莱菔子水提物对麻醉犬、猫、兔、鸭静脉注射均可引起血压下降，作用缓慢而持久。醇的总提物亦有降压作用。芥子碱硫酸氢盐亦有显著的降压作用。芥子碱静脉注射能明显降低实验性肺动脉高压，还明显降低体动脉压。莱菔子1ml/kg给麻醉犬静脉注射后可使平均动脉压、肺动脉平均压、体血管阻力明显降低，左室作功指数、右室作功指数减少;心输出量、每博输出量、心脏指数、心搏指数变化不明显[7]。莱菔子可作为一血管扩张剂。莱菔子对高血压症及其并发症状有一定治疗作用。是通博益脑片的佐药。本研究建立的HPLC法采用偏中性的磷酸盐溶液为流动相，以卡马西平作为内标，色谱条件稳定。血浆样品采用固相萃取进行预处理，方法简便，特异性高，无内源性物质及其他杂质干扰。方法的回收率、精密度等符合药代动力学和生物利用度研究的要求。本研究所选流动相、内标和样品预处理方法均有较大改进。AUC0～12、Tmax、Cmax分别经三因素方差分析，周期间差异无显著性(P>0.05)，说明实验设计合理，无周期间影响。T制剂和R制剂的各主要药动学参数之间差异没有显著性(P>0.05)。双、单侧t检验结果表明，两者为生物等效制剂。本实验表明，通博益脑片口服吸收好，约2.5h 达血药浓度峰值，在人体内符合一级吸收开放性一室模型特征。消除较快，其消除半衰期约2h，与通博益脑胶囊相似。结论：本实验表明，通博益脑片与通博益脑胶囊具有相似的药物代谢动力学过程和生物利用度，两者为生物等效制剂。
【参考文献】
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