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【摘要】 目的 建立HPLC法测定盐酸格拉司琼葡萄糖注射液的含量和有关物质。方法 采用氰基柱， 0.05mol/L醋酸钠缓冲液[含0.25%(ml/ml)三乙胺，用冰醋酸调节pH值至6.0]-甲醇(50：50)为流动相;检测波长为302nm;流速为1.0ml/min;柱温为30℃。结果 盐酸格拉司琼在34.63～124.67μg/ml范围内线性关系良好，平均回收率102.0%，RSD%为0.98%。结论 本方法灵敏迅速，准确可靠，可用于盐酸格拉司琼葡萄糖注射液的质量控制。
【关键词】 盐酸格拉司琼;HPLC;含量测定;有关物质
【Abstract】 Objective To study a new method for determination content and related compounds of Granisetron Hydrochloride and Glucose Injection by HPLC.Method Separation was carried out on an CN column using 0.05mol/L sodium acetate buffer [with 0.25% (ml/ml)triethylamine, pH adjusted to 6.0 by glacial acetic acid] - methanol (50:50) at detection wavelength 302 nm. The flow rate was 1.0 ml/min and column temperature was 30℃.Result The linear range of Gatifloxacin concentration was from 34.63 to 124.67 μg/ml.The average recovery of sample was 102.0% and RSD was 0.98%.Conclusion This method is sensitive and accurate with good repeatability and suitable for the quality control of Granisetron Hydrochloride and Glucose Injection.
【Key words】 Granisetron Hydrochloride; HPLC; content determination; related compounds
盐酸格拉司琼(Granisetron Hydroehloride)是一种高选择性的5-HT3受体拮抗剂，具有强效止呕作用，对因放疗、化疗及手术引起的恶心和呕吐具有良好的预防和治疗作用[1]。本品选择性高，无锥体外系反应、过度镇静等副作用。本文采用HPLC法测定盐酸格拉司琼葡萄糖注射液的含量及有关物质，结果准确可靠，辅料及降解物等不干扰主药测定。
1 仪器与试药
瑞士梅特勒XS205电子天平;美国安捷伦公司Agilent 1200高效液相色谱仪;瑞士梅特勒MP220 pH计;Phenomenex Luna 5μCN色谱柱(25cm×4.6mm);药物制剂国家工程研究中心BC-50E低温光照仪;上海建恒仪器有限公司SDH-01低温恒温恒湿箱;盐酸格拉司琼对照品(批号：100558-200602，含量：99.8%)，购自中国药品生物制品检定所;盐酸格拉司琼葡萄糖注射液[批号：10020601、10020602、10020701，规格：50ml盐酸格拉司琼3mg(以C18H24N4O计)与葡萄糖2.5g]，扬子江药业集团有限公司生产;配制流动相用甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余化试均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
用氰基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.05mol/L醋酸钠缓冲液[含0.25%(ml/ml)三乙胺，用冰醋酸调节pH值至6.0]-甲醇(50：50)为流动相;检测波长为302nm;流速为1.0ml/min;柱温为30℃;进样量为20μl。理论板数按盐酸格拉司琼峰计算为7647。
2.2 含量测定
2.2.1 供试品溶液制备
取本品作为供试品溶液。
2.2.2 对照贮备液制备
取盐酸格拉司琼对照品34.70mg，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含盐酸格拉司琼0.6926mg的溶液。
2.2.3 阴性对照与空白干扰试验
取按处方制法制得缺盐酸格拉司琼的阴性对照适量，按供试品溶液制备法同法制得阴性对照液。取阴性对照液与流动相(空白溶剂)注入液相色谱仪，记录色谱图。由阴性对照色谱图与空白溶剂色谱图可知：在盐酸格拉司琼主峰相对应的位置无色谱峰出现，证明阴性对照与空白溶剂不干扰本品的含量测定。结果见图1。
图1 盐酸格拉司琼葡萄糖注射液HPLC色谱图A 阴性对照溶液图，B 空白溶剂图，C 样品溶液图 2.2.4 线性关系考察 分别精密量取对照储备液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8ml，分别置10ml量瓶中，分别加流动相稀释至刻度，摇匀，制成浓度为50%、80%、100%、120%、150%、180%的对照溶液。按上述色谱条件分别进样，测定峰面积，以对照浓度X(μg/ml)为横坐标，盐酸格拉司琼峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=1.60752e-006X+1.20833，r=0.9999，结果表明盐酸格拉司琼在34.63～124.67μg/ml范围内线性关系良好。
2.2.5 精密度试验
取浓度为100%的对照溶液，按上述色谱条件分别进样20μl，测定峰面积，计算对照品峰面积的RSD为0.06%，表明仪器的进样精密度良好。
2.2.6 重复性试验
取本品(批号：10020601)，照“2.2.1”项下制备供试品溶液，分别制备6份，按上述色谱条件分析，记录各色谱图，计算测得格拉司琼的平均含量为0.9861μg/ml，RSD为0.21%，表明方法的重复性良好。
2.2.7 稳定性试验
取上述供试品溶液，在室温放置，分别于0、2、4、6、8、10、12h，按上述色谱条件分析，记录色谱图，峰面积的RSD为0.12% 。说明盐酸格拉司琼样品溶液在12h内稳定。
2.2.8 回收率试验
精密量取对照贮备液5.0ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含格拉司琼62.02μg的对照溶液;精密量取1ml，置5ml量瓶中;另取已知格拉司琼含量(批号10020601：0.9861μg/ml)的样品，精密量取1ml ，置上述5ml量瓶中，摇匀;同法制备6份，进样，测定峰面积，计算平均回收率为102.0%，RSD为0.98%，结果表明方法的准确性良好。
2.3 有关物质
2.3.1 测定方法
取本品作为供试品溶液，精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照上述色谱条件，取对照溶液100μl注入液相色谱仪中，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各100μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍(扣除5-羟甲基糠醛相对应位置的峰面积)。
2.3.2 专属性试验
本品经高温、高湿、酸、碱、光照和氧化破坏试验。结果表明，经高温、高湿、酸、碱、光照和氧化破坏后产生的杂质峰能与主峰基线分离。
2.3.3 定量限与检测限
取对照品溶液，逐步稀释后进样100μl，待主峰峰高为基线噪音10倍时确定定量限为4.8ng，主峰峰高为基线噪音2倍时确定检测限为0.48ng。
2.3.4 溶液的稳定性
取供试品溶液，在室温放置，分别于0、2、4、6、8、10、12h，按上述色谱条件分析，记录色谱图，杂质总和的RSD为3.77% 。说明本品的有关物质检查溶液在12h内稳定。
2.3.5 重复性试验
取本品(批号：10020601)，照“2.3.1”项下制备供试品溶液，分别制备6份，按上述色谱条件分析，记录各色谱图，计算杂质总峰面积和的RSD为0.91%，表明方法的重复性良好。
2.4 样品的测定
2.4.1 含量测定
取对照品溶液、供试品溶液分别进样测定，按外标法以峰面积计算3批样品的含量分别为98.6%、99.2%和99.0%。
2.4.2 有关物质测定
分别取对照品溶液、供试品溶液进样测定，调节检测器灵敏度，记录色谱图至主峰保留时间的2倍，按主成分自身对照法计算3批样品的有关物质分别为0.47%、0.52%和0.47%。
3 讨论
3.1 实验条件的确定
根据格拉司琼分子的结构特征，因其含氮基团，在C18色谱柱上保留较强，易造成拖尾现象。故本实验采用CN 柱。通过进行分析试验后，选择甲醇与0.05mol/L醋酸钠缓冲液[含0.25%(ml/ml) 三乙氨]为流动相，在流动相中加入的三乙胺以及选择冰醋酸调节pH 6.0，可消除格拉司琼色谱峰拖尾现象，使峰形对称，提高分离选择性的目的。
3.2 稳定性的考察
经有关物质以及含量测定的稳定性试验结果，可知供试品溶液在12h内基本稳定，无新的杂质峰出现。
3.3 方法专属性考察
对本品进行高温、高湿、酸、碱、光照和氧化破坏试验，结果可知，供试品经上述破坏试验后的分解产物与主峰均能达到较好的分离,同时对本品的辅料进行测定，结果也表明辅料对主峰不形成干扰，主峰与相邻杂质峰的分离度均符合要求。综上所述，本法能够准确的用来进行含量及有关物质的测定，具有专属性强、无干扰、分析快速准确的特点，且操作简便。
【参考文献】
1 陈新谦.新编药物学,第13版.北京：人民卫生出版社，1997，347.
2 国家药典委员会.中国药典,二部.北京：化学工业出版社，2005,559.