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ITP患儿T细胞凋亡率及其与血小板抗体相关性研究 (pdf)
［摘要］ 目的 研究特发性血小板减少性紫癜（ITP）患儿血小板抗体、T细胞凋亡率及其二者相关性。方法 分别检测ITP患儿组及正常对照组血小板抗体PAIgG水平、T细胞凋亡率，并进行相关性分析。结果 患儿组PAIgG显著高于正常对照组；T细胞凋亡率显著低于正常对照组；二者呈对数负相关。结论 T细胞凋亡率降低是ITP患儿免疫紊乱的重要发病机制。干预T细胞凋亡有望成为一种新的治疗ITP的有效手段。
［关键词］ 特发性血小板减少性紫癜；T细胞凋亡率；血小板抗体
特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopacnic prupura,ITP），是一种自身免疫性疾病，既有血小板抗体增高之体液免疫紊乱，又有T细胞亚群比例失调等细胞免疫功能紊乱。有报道其T细胞凋亡率降低，但其T细胞凋亡率与血小板抗体水平是否存在相关性尚未见报道。为此我们做了初步探讨，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2003年1月～2005年12月在我科住院的36例ITP患儿，其中男20例，女16例，平均年龄3岁4个月，均符合ITP诊断标准。对照组24例，均为健康体检儿童。
1.2 研究方法
血小板抗体PAIgG检测方法参照文献［1］。外周血T细胞的分离：无菌采集患儿外周静脉血3 ml，肝素抗凝，以淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，采用溶血素溶解红细胞，经T细胞分离富集柱分离纯化的T淋巴细胞，用含20%小牛血清的RPMI1640培养液调整细胞浓度为2×106SAP/P免疫组化法检测其纯度大于98%，锥虫蓝拒染法检测其活性大于95%。T细胞凋亡率的检测：取100 μl T细胞悬液，加入AnnexinVFITC及PI悬液各5 μl，混匀，室温避光约5 min，加入缓冲液0.5 ml，混匀，用流氏细胞仪检测凋亡细胞数，并计算百分比。
1.3 统计学方法
T细胞凋亡率（%）及血小板抗体均数组间比较均用t检验。T细胞凋亡率对数转换值与血小板抗体值相关性采用线性相关分析，应用SAS 8.22软件包完成。
2 结果
2.1 患儿组及对照组血小板抗体结果 见表1。
结果表明，ITP患儿组血小板抗体PAIgG显著高于正常对照组。 表1 ITP及对照组血小板抗体PAIgG均数比较
2.2 患儿组及对照组T细胞凋亡率结果 见表2。表2 患儿组及对照组T细胞凋亡率比较（略）结果表明，ITP患儿组T细胞凋亡率显著低于正常对照组。ITP患儿组T细胞凋亡率对数值与血小板抗体值相关性分析结果发现，二者呈对数负相关。相关系数为r=0.893，经检验，P＜0.05。
3 讨论
ITP是一种自身免疫性疾病，大多数患儿血小板自身抗体增多，导致血小板破坏加速，出现临床病症。其中尤以PAIgG阳性率最高，且与疾病的发展、疗效、预后关系最为密切。大量文献报道ITP患儿细胞免疫功能亦存在明显紊乱状况，表现为T细胞亚群失调，Th1/Th2比例增高，IL-2、γ干扰素等多种细胞因子分泌增多等［2］。近来有报道ITP患者T细胞凋亡率降低［3］。
免疫细胞的增殖和程序性死亡（即凋亡）是机体维持免疫平衡的重要手段。这一平衡的打破将不可避免地导致免疫紊乱，甚至发生免疫性疾病。许多研究表明，哮喘、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病中都存在T细胞凋亡和降低、细胞因子增多的现象［4］。
我们的观察发现，ITP患儿血小板自身抗体PAIgG显著高于正常对照组。T细胞凋亡率显著低于正常对照组，与文献报道一致。且血小板抗体PAIgG与T细胞凋亡率呈负相关。血小板抗体的产生虽然是由B细胞完成，但这一过程需要T细胞的活化及其分泌的细胞因子的参与。由于T细胞凋亡率降低，T细胞寿命延长，活化的T细胞增多，细胞因子增多，从而促使血小板抗体生成增多。表明T细胞凋亡率的降低是ITP患儿发病机制的重要环节，促使T细胞的凋亡将有望成为治疗ITP的一种新的有效手段，这方面的工作正在实验研究阶段。
［参考文献］
1 李蔚，侯明，张茂宏，等.自身免疫性血小板减少性紫癜的特异性免疫学诊断的研究.中华血液学杂志，2001，22：374-376.
2 Ogawara H,Handa H,Morital K,et al.High Th1/Th2 ratio in patients with chronic idiopathic thrombocytopenic purpura. Eur J Hacmatol,2003,71:285-288.
3 王琼玉，高清平.细胞凋亡和增殖在特发性血小板减少性紫癜中的作用.临床内科杂志，2003，20：421-423.
4 薛建敏，徐永健，张珍祥，等.哮喘患者外周血T细胞的凋亡及其分子机制.中华结核和呼吸杂志，1999，22：555-557.
作者单位： 330006 江西南昌，江西省儿童医院血液科
（编辑：宋 青）