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【摘要】 目的 检测孕妇血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的含量，研究母婴传播与HBV-DNA含量的关系。找出可致胎儿宫内感染的孕妇血清HBV-DNA临界值，以指导临床。方法 选择来我院产检的孕妇，应用ELISA法检测HBVM 5项指标，选择HBsAg阳性病例再用FQ-PCR技术进行HBV-DNA定量检测。选出了137例研究对象。同样对137例新生儿的脐血、静脉血分别进行上述两项检测。结果 （1）HBeAg阳性组血清HBV-DNA含量明显高于HBeAg阴性组，差异有显著性（P<0.05），说明HBV-DNA含量与HBeAg的存在有明显的关系;（2）孕妇血清HBV-DNA含量与新生儿静脉血HBV-DNA含量呈正相关;（3）当孕妇血清HBV-DNA含量>105 Copies/ml时，其宫内感染率明显高于含量<105 Copies/ml组，HBV母婴传播率差异有显著性(P<0.05)。结论 （1）孕妇血清HBV-DNA含量的高低反映HBV垂直感染的强弱，新生儿脐血、外周血中HBV-DNA含量与母血含量呈正相关;（2）孕妇血清HBV-DNA含量存在影响HBV母婴传播的浓度界面；（3）孕妇血清HBV-DNA含量>105 Copies/ml时，其宫内感染率明显增高，可以作为HBV母婴传播的预测指标指导临床。
【关键词】 肝炎病毒 乙型 疾病传播 宫内感染 定量测定
Relationship between intrauterine infection and serum HBV-DNA concentration in pregnant women
LIN Jian-chun，WANG Xue-li，HUANG Qiu-qun.Boai Hospital of Shilong in Dongguan,Guangdong 523325，China
［Abstract］ Objective To investigate the relationship between serum HBV-DNA content in pregnant women and intrauterine infection of their fetuses.Methods HBVM was detected by ELISA when pregnant women was examined in my hospital，HBV-DNA was detected by FQ-PCR in HBsAg(+) pregnant women，newborn’s cord blood and serum HBV-DNA was detected by FQ-PCR in 137 HBV-DNA(+) pregnant women too.Results （1）The contents of HBV-DNA in HBeAg positive groups were obviously higher than in the HBeAg negative groups（P<0.05）.（2）The HBV-DNA contents of cord blood and serum were positively correlated to those of maternal blood.（3）The intrauterine infection rate in the pregnant women whose HBV-DNA contents were more than 105 copies/ml was significantly higher than that whose were less than 105 copies/ml (P<0.05).Conclusion （1）The HBV-DNA contents of cord blood and serum are positively correlated to those of maternal blood.（2）It seems that the maternal serum critical HBV-DNA levels may influence the mother-infant HBV transmission rate.（3）The intrauterine infection rate in the pregnant women whose HBV-DNA contents are more than 105 copies/ml is significantly higher than that whose are less than 105 copies/ml.
［Key words］ hepatitis B virus;disease transmission;intrauterine infection；quantitative determination
乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病，流行病学已证实围生期感染的婴儿，85%～90%转为慢性病毒携带者［1］。国内外诸多研究已经证明，孕妇血HBV-DNA阳性可以导致胎儿宫内感染，感染的风险随母体血清HBV-DNA含量的升高而增高［2~5］。因此，通过监测孕妇血清HBV-DNA浓度、降低其含量以减少HBV母婴传播，成为一个引人关注的问题［6］。本研究以HBV-DNA阳性孕妇为研究对象，应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测孕妇血清及配对新生儿血清、脐血的HBV-DNA含量，探讨孕妇血清HBV-DNA含量对HBV母婴传播的影响。
1 资料与方法
1.1 一般资料 对2003年7月~2006年7月在来我院门诊产前检查孕妇，进行HBVM 5项指标检测，对HBsAg阳性者进行HBV-DNA测定，以HBV-DNA阳性者为研究对象。产后留脐血5 ml及婴儿股静脉血3 ml，分离血清后放-70 ℃冰箱保存。先对新生儿脐血HBV-DNA进行定量检测。阳性再定量检测外周血HBV-DNA，若仍为阳性，则判为宫内感染。
1.2 试验方法
1.2.1 血清免疫学标志物检测 应用ELISA检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，乙肝ELISA试剂盒由中山生物工程公司生产，按说明书操作。
1.2.2 HBV-DNA定量检测 荧光定量PCR检测法，采用AG-9600 Amplisensor荧光定量系统(美国Biotrom icstechnologies corp提供)测定。试剂由深圳匹基生物工程公司生产，按说明书操作。
1.2.3 结果 表达HBV-DNA定量结果以指数形式表示，测定范围为103～1010 Copies/ml。
1.3 统计分析方法 全部数据用SPSS 10.0统计软件处理。采用χ2检验，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
见表1、表2。表1 孕妇不同水平HBV-DNA与新生儿脐血、外周血HBV-DNA阳性例数的关系表2 137例孕妇血清HBV-DNA水平与HBeAg的关系注：χ2=28.06，P<0.05
2.1 宫内感染的发生情况 137例HBV-DNA阳性孕妇所分娩的新生儿，有70例血清HBV-DNA检测阳性，宫内感染率为51.1%(表1)。这与文献［7］的记载基本一致。
2.2 妇孕血清HBV-DNA的水平与宫内感染的关系 本文所检测的情况表明脐血、血清中的HBV-DNA量与产妇中的HBV-DNA也存在一个正相关性［8］，孕妇血中HBV-DNA值越高，新生儿脐血、外周血中的HBV-DNA拷贝数越多。随着孕妇血清HBV-DNA含量的增高，胎儿发生宫内传染的危险性也增高。由表1可见105~106与106~107和108~109与>109两个相邻浓度界面间宫内感染差异无显著(P>0.05)，另三个相邻浓度界面间宫内感染差异具有显著性(P<0.05)，当孕妇血清HBV-DNA含量>105 Copies/ml时，其宫内感染率明显高于含量<105 Copies/ml组(P<0.05)［9］。根据孕妇HBV-DNA测定值，分别向下累计和向上累计婴儿HBV感染率，以分析孕妇不同HBV-DNA浓度界面对HBV母婴传播的影响(表1)。本组资料向下累计和向上累计划分出5个孕妇血HBV-DNA测定值界面，HBV-DNA测定值在5个界面中HBV母婴传播率的差值差异均有显著性(P<0.05)。平均差值达50%以上。
2.3 新生儿脐血与血清HBV-DNA的阳性率关系 新生儿脐血与血清之间HBV-DNA的阳性率差异无显著性（P>0.05）。但脐血中HBV-DNA的阳性率比血清高，这是由于脐血样本易受母血污染，出现假阳性的几率大，所以不受母血污染的婴儿外周血才是确诊胎儿宫内感染HBV的依据［10，11］。
2.4 孕妇血清HBV-DNA的水平与HBeAg的关系 137例HBV-DNA阳性血清中HBeAg阳性率高达76.4%且HBV-DNA的含量有宫内感染率均比HBeAg阴性者高，两者含量差异具有显著性(P<0.05)。说明这两种血清学标志模式组具有很强的传染性［9］。
3 讨论
孕妇血清中HBV-DNA是反映HBV宿主传染性直接指标［12］，本研究采用荧光定量PCR技术，配对检测137对孕妇与婴儿HBV-DNA含量，不仅显示胎儿脐血、外周血HBV-DNA测定值与孕妇HBV-DNA测定值呈正相关，亦证明了HBV宫内感染的风险随孕妇HBV-DNA测定值增高而上升的观点［2~5］，那么，随着孕妇HBV-DNA含量的变化，是否存在一个影响HBV母婴传播的浓度界面呢?即孕妇在某一血清HBV-DNA水平上下，HBV母婴传播率存在明显差异。由表1可见在105~106与106~107之间，和108~109与>109之间，两个相邻浓度界面间宫内感染差异无显著（P>0.05）。由本组资料向下累计和向上累计可以看出，当孕妇血清中HBV-DNA浓度，在<105与>105之间，到<109与>109之间的每一个浓度界面时，宫内感染率差异有显著性，其差值均数为50%以上。说明孕妇HBV-DNA含量存在影响HBV母婴传播浓度界面［6］。
HBV易母婴传播，而且多数发生在无症状HBV携带者，由本组资料可见：（1）当孕妇血清HBV-DNA含量>105 Copies/ml时，其宫内感染率明显高于<105 Copies/ml组，而含量<105 Copies/ml时，宫内感染率仅为5%以下。因此可将105 Copies/ml作为HBV传播浓度临界值，用于预测HBV母婴传播概率。在孕妇妊娠期做血清学及HBV-DNA定量监测，当孕妇血清HBV-DNA含量>105 Copies/ml时，积极进行免疫防护，可极大地降低宫内感染的发生率［9］。（2）当母血HBV-DNA>108 Copies/ml时，宫内感染率高达97.4%，据报道即使及时注射高效免疫球蛋白(HBIG)仍可能有高达43%的宫内感染率［13］，据此应加强宣传，提高婚检率，孕前力争使HBV-DNA至少降至这一水平以下，最好能降至105这一水平以下，HBV母婴传播的机会将会大大减少，目前迅速降低血清HBV-DNA含量已有所突破［14］。随着抗病毒药物的研究进展，拉米呋啶(lamivudine)已显示能有效地抑制HBV在体内的复制［15］，这使孕前迅速降低血清HBV-DNA含量、减少HBV母婴传播成为可能。
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作者单位：532235 广东东莞，东莞市石龙博爱医院