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【摘要】 目的 探讨Th1因子IL-2与胎膜早破的相关性。方法 酶联免疫吸附方法检测20例胎膜早破(PROM)，并与20例正常孕妇组比较两组孕妇血清IL-2含量;同时用免疫组化方法检测这两组中的孕妇胎膜IL-2表达并将各组孕妇血与胎膜中的IL-2所测量值进行相关性分析。结果 在PROM组IL-2在母血、胎膜中含量高于对照组(P<0.05)，并且在这两组中母血IL-2含量与胎膜IL-2表达水平呈正相关。结论 IL-2与PROM发生有关。
【关键词】 胎膜早破;IL-2;Th1型细胞因子
IL-2 in fetal membrane and premature rupture of membranes
GUO Hai-ying，MA Xiu-ju.Department of Obstetrics and Gynecology,Xingtai Medical College,Xingtai 054000，China
Objective To evaluate the clinical significance of IL-2 in premature rupture of the fetal membranes(PROM).Methods Using ELISA and immunochemistry respectively to test the quantity of IL-2 in pregnant serum，fetal membrane in the specimens of 20 PROM and 20 normal pregnant.Results The level of IL-2 of pregnant serum and fetal membrane with PROM were significantly higher than those in normal pregnant (P<0.05).Conclusion IL-2 level is correlated with PROM.
[Key words] premature rupture of membrane;IL-2;IL-1cellular immunity
胎膜早破(premature rupture of membrane,PROM)是指临产前胎膜破裂，胎膜早破后可引起羊膜腔羊膜绒毛膜炎，败血症等严重的并发症;是早产及围产儿死亡的最常见原因之一。胎膜早破的发病因素至今仍未完全明确，一般认为是基因环境等多因素造成的。本文从免疫角度研究胎膜早破，通过比较胎膜早破组与正常妊娠组孕妇血、胎膜中的Th1型因子IL-2并进行相关性分析，探讨Th1型因子IL-2与胎膜早破的关系。
本研究试验为：酶联免疫吸附方法、免疫组化法观察了Th1型细胞因子IL-2胎膜早破与正常妊娠的孕妇血清、胎膜组织的表达情况。
1 资料与方法
1.1 一般资料 试验设计为病例对照研究，研究对象为胎膜早破者20例、正常足月妊娠者20例。随机选择我院2006年12月至2007年6月产科病房住院分娩的单胎初产妇40例，平均年龄(26±2.8)岁，所有受试对象孕期均无吸烟史、营养不良，均无习惯性流产、妊娠高血压等妊娠并发症以及内外科合并症，胎膜早破者均在破膜12 h内剖宫产终止妊娠。
胎膜早破诊断标准参照《妇产科学》[1]中标准。
1.2 标本采集与处理 受试对象分娩前抽肘前静脉血5 ml，3 000 r/min，离心10 min，分离血清置-20 ℃ 冰箱待检。术后留取剖宫产近胎儿娩出口处胎膜两块1.5 cm×1.5 cm大小，用4%多聚甲醛固定、石蜡包埋备用。
1.3 试剂 IL-2的ELISA试剂盒购自北京晶美生物制剂有限公司，地高辛标记的IL-2免疫组化检测试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司。
1.4 实验步骤
1.4.1 血清IL-2因子的浓度测定 采用双抗体夹心ABC-ELISA法，根据样品的OD值在标准曲线图上求出相应的细胞因子IL-2浓度(按试剂盒说明操作)。
1.4.2 胎膜IL-2的测定 (1)将胎膜蜡块连续切片(厚4 μm)两张，分别做HE染色、IL-2免疫组化检测。(2)IL-2免疫组化检测(按试剂盒说明操作)免疫组化染色阳性均为胞质黄色-棕褐色染色,不着色为阴性。每张免疫组化片在光镜下至少随机选取3个图像，在计算机Motic Med 6.0数码医学图像分析系统内测定每个图像的吸光度值和面积，两者相除得出其面积单位的平均密度，取平均值代表该标本染色强度(OD)，即胎膜中的IL-2表达水平。
1.5 数据统计与检验 所有资料录入计算机，建立数据库，应用SPSS 14.0软件进行统计学处理，各数均用均数±标准差(x±s)表示,先进行方差齐性检验，方差齐用t检验和方差分析，不齐则用t′检验，单因素两组间比较用t检验，检验水准α=0.05，P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组临床资料对照 胎膜早破组20例，年龄(27.0±2.12)岁，孕(35.25±1.09)周;对照组20例，年龄(27.8±3.05)岁，孕(36.24±1.83)周。两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
2.2 母血、胎膜组织中Th1细胞因子IL-2水平及比较 各组胎膜组织中Th1型细胞因子IL-2水平比较：IL-2阳性反应物均为黄色颗粒，可分布于细胞浆，主要位于羊膜上皮细胞、成纤维细胞、绒毛膜滋养细胞。
2.2.1 两组母血Th1型细胞因子IL-2水平比较 PROM组母血中Th1型细胞因子IL-2均高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)，见图1。
2.2.2 两组胎膜组织中Th1型细胞因子IL-2水平比较 PROM组胎膜组织中Th1型细胞因子IL-2表达高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)，见图2。
2.2.3 两组母血与胎膜组织中Th1细胞因子IL-2的相关性 结果显示母血与胎膜组织中Th1细胞因子IL-2有相关性，呈正相关(PROM组：r=0.82，P<0.05;正常妊娠组：r=0.79，P<0.05)。见图3，4。
3 讨论
Th1型细胞因子IL-2与胎膜早破Th1型细胞因子IL-2是由活化的T细胞、NK细胞、巨噬细胞分泌[2]。它可以促进炎细胞的渗出与趋化并且激活单核-吞噬细胞、中性粒细胞等，此外对母胎界面滋养细胞的生长和代谢活性有较强的抑制和促凋亡作用。天然人IL-2是一个133个氨基酸残基组成的图1 两组母血Th1型细胞因子IL-2水平比较多肽,为分子量大约有15 kDa的糖基化蛋白[3]。IL-2受体属于Ⅱ型细胞因子受体家族，分布在除成熟红细胞外的几乎所有细胞表面，IL-2可以与细胞外基质相连的形式存在故通过旁邻的方式控制细胞生长。
胎膜早破是指临产前胎膜破裂，胎膜由以下组织构成：内面一层羊膜，外面一层由绒毛膜和已明显萎缩的包蜕膜及壁蜕膜组成。羊膜源于外胚层的无血管透明膜，主要靠羊水供应营养;绒毛膜由滋养叶细胞而来的中胚层组织，与羊膜不同，绒毛膜内有血管，通过弥散作用，羊膜也接受其营养，它与羊膜一样起保护作用，提供免疫耐受，防止早产发生;此外蜕膜组织由母体子宫内膜在孕激素作用下衍变来的。这三层组织共同维持胎膜完整，当胎膜细胞数量减少(无论细胞坏死与凋亡)、胶原纤维含量减少(无论纤维合成减少还是分解增多)及结构改变，均可因胎膜张力降低而导致胎膜早破的发生[4]。
通过本研究发现在PROM与正常组比较时,胎膜中IL-2在PROM患者中显著升高可能参与了胎膜早破的发生机制,推测有以下几方面原因:(1)PROM胎膜中IL-2升高表明了胎膜局部Th1细胞及Th1细胞因子占优势，细胞毒T细胞可以通过自身分泌颗粒酶溶解细胞坏死;还可以通过Fas-FasL途径诱导细胞凋亡;IL-2还可以通过刺激炎细胞分泌细胞因子如TNF、IL-6等发挥其细胞毒作用。(2)IL-2该因子自身的作用，它不仅促使胎膜细胞凋亡增加而且可诱导MMP表达，增强MMPs的活性,使胎膜降解[5]。(3)体外试验证明，IL-2具有抑制成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ胶原纤维和纤连蛋白作用，使胶原合成减少，胎膜张力降低而破裂[6]。
本文用ELISA法检测正常妊娠晚期与胎膜早破母血IL-2含量，结果表明胎膜早破患者孕妇血液均存在IL-2水平高于正常妊娠，提示其可能参与胎膜早破的发病机制。IL-2可能是通过以下机制：首先IL-2主要是由Th1细胞分泌的，那么它在母血中的升高反映母体内Th1细胞免疫反应是亢进的即母体内存在Th1炎性反应[7]，推测可能是进入母体内的胎儿抗原量比较多、与TCR亲和力高、APC类型多为巨噬细胞或母胎界面微环境细胞因子网络改变等因素导致。此表现与Gervasi等学者研究相一致，即胎膜早破母体血管内也存在血管炎性反应[8]，这一病理改变也与妊娠高血压疾病等相重叠。可能是激活的Th1细胞通过孕妇血液循环到达蜕膜层，一方面通过局部细胞毒作用;另一方面通过局部炎性细胞因子作用共同引起胎膜细胞的坏死，导致胎膜早破的发生。
此外，本研究还发现PROM组与正常组的母血与胎膜组织中Th1细胞因子IL-2有相关性且呈正相关，说明胎儿抗原在激活孕妇全身Th1/Th2漂移Th1极化同时也在母胎界面诱发此类改变并且两者间可能存在协同关系。由此提示我们也可以通过检测母血中Th1细胞因子IL-2水平预测胎膜早破发生。那么，不难看出在胎膜早破患者母体内以及局部的羊膜绒毛膜均存在Th1/Th2平衡偏移、Th1炎性亢进，而正常妊娠母体存在Th1/Th2型细胞应答生理性失衡,Th2型细胞因子占优势。两者表现矛盾，可以推测胎膜早破如同习惯性流产、早产、妊娠高血压疾病等病理妊娠一样也显示了母胎排斥现象，只是由于母胎排斥发生的时间、作用的靶器官不同而导致临床症状不同而已。
总之，胎膜早破产生不是由单一因素引起，它是由遗传、社会生物心理、环境等多方面因素导致的。
【参考文献】
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8 Gervasi MT，Chaiworapongsa T，Naccasha N,et al.Maternal intravascular inflammation in preterm premature rupture of membranes.Matern Fetal Neonatal Med,2002,11:171-175.
(本文编辑：江 宇)
作者单位：1 054000 河北，邢台医学高等专科学校第二附属医院妇产科 2 050000 河北，河北医科大学第二医院妇产科