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【摘要】 目的 探讨SKP2与P27在子宫内膜异位症中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化SP的方法检测EMs组(异位内膜和在位内膜各30例)中SKP2和P27的表达，并与30例正常内膜对照组在位内膜进行比较。结果 SKP2在EMs组(异位内膜组和在位内膜组)相对表达量明显高于正常对照组(P<0.01);异位内膜组的相对表达量明显高于在位内膜组(P<0.01);在位内膜组分泌期SKP2的表达量明显高于增生期(P<0.05)。P27在EMs组(异位内膜组和在位内膜组)的相对表达量明显低于正常对照组(P<0.01,P<0.05);异位内膜组的相对表达量明显低于在位内膜(P<0.05);正常对照组分泌期P27的表达量高于增生期(P<0.05)。SKP2与P27在EMs组(异位内膜组和在位内膜组)的表达量呈负相关。结论 SKP2的表达上调和P27的表达下调可能与EMs的发病有关;SKP2和P27可能协同参与了EMs的发病。
【关键词】 子宫内膜异位症;SKP2;P27;免疫组织化学
Objective To investigate the presentation and clinical significance of SKP2 and P27 in endometriosis.Methods Immunohistochemistry was used to detet the expression of SKP2 and P27 in the endometriosis group, including the ectopic endometrium from 30 cases with endometriosis(ectopic endometrium group) and the eutopic endometrium from the same cases(eutopic endometrium group),and those in the normal endometrium of 30 cases without endometriosis(control group).Results The increased expression level of SKP2 was seen in the endometriosis group (ectopic endometrium group and eutopic endometrium group) compared with that of control group. Increased expression of SKP2 was deteted in the ectopic endometrium group compared with that of the eutopic endometrium group. The expression of SKP2 in secretory phase was significantly higher than that in proliferative phase in the eutopic group. We revealed decreased expression of P27 in the endometriosis group (ectopic endometrium group and eutopic endometrium group)compared with that in control group. Decreased expression of P27 was detected in the ectopic endometrium group compared with that in the eutopic endometrium group. The expression of P27 in secretory phase was slightly higher than that in proliferative phase in the control group. The expression of SKP2 and P27 in the endometriosis group (ectopic endometrium group and eutopic endometrium group) has negative correlation.Conclusion The upregulation of SKP2 and the down regulation of P27 in the endometriosis suggestes that SKP2 and P27 may play a role in the pathogenesis of endometriosis. The SKP2 and P27 may cause the endometriosis together.
[Key words] endometriosis;SKP2;P27;immunohistochemistry
子宫内膜异位症是指具有生长功能的子宫内膜组织(腺体和间质)出现在子宫腔被覆内膜及宫体肌层以外的其他部位所引起的一种病变[1]。子宫内膜异位症虽为良性疾病，却具有恶性肿瘤的生物学行为,主要表现为细胞增殖、转移、浸润和复发等特点，使之成为当今妇科的难治之症。研究认为0.7%～1.6%的EMs会发生恶变[2]。故越来越多的学者关注其与恶性肿瘤之间的相似性，并称之为“良性癌”。研究表明，异位子宫内膜细胞得以在宫腔外种植并继续存活与其凋亡和增殖特性改变有关[3]。S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein2，SKP2)和P27是细胞增生周期的关键调节因子，故本研究采用免疫组织化学的方法检测子宫内膜异位症中SKP2与P27蛋白表达,探讨二者与该症发生发展的关系，为临床治疗提供新的思路。
1 资料与方法
1.1 临床材料
收集佳木斯大学附属第一医院妇产科2009年10月-2010年4月，因子宫内膜异位症行腹腔镜/剖腹探查手术，术后病理证实为子宫内膜异位症的组织标本30例，均为增生期;术中选其在位子宫内膜，增生期16例和分泌期14例。选择同期因单纯子宫肌瘤行子宫切除手术的30例患者的正常子宫内膜组织为对照，其中增生期16例，分泌期14例。患者年龄无统计学差异，均月经周期规则，无长期用药史，无恶性肿瘤史，术前3个月未经任何内分泌药物治疗。月经周期的划分根据末次月经及病理学诊断结果确定。
1.2 试剂
SKP2鼠抗人单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术公司，P27鼠抗人单克隆抗体、链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)试剂盒、DAB显色剂和柠檬酸抗原修复液均购自福州迈新生物技术公司。
1.3 实验方法
EMs组:腹腔镜或开腹手术时取异位病灶组织，并于术前征得患者同意于术中麻醉状态下刮取在位子宫内膜，无菌生理盐水冲洗后，分别立即放入10%的中性福尔马林溶液固定12～24h，常规脱水，石蜡包埋，切片(4μm)备用。对照组:因单纯子宫肌瘤行子宫切除手术时取子宫内膜组织，无菌生理盐水冲洗后，后续处理同EMs组。免疫组织化学步骤按试剂盒说明操作，均以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为空白对照,以乳腺癌为阳性对照。
1.4 阳性结果判断标准
光学显微镜下观察组织切片的显色反应，SKP2和P27均定位于胞核，为棕黄色或棕褐色。根据着色强度及范围分为:阴性(-)，无阳性染色细胞或细胞着色率<5%;弱阳性(+)，阳性细胞数5%～25%;阳性(++)，阳性细胞数25%～50%;强阳性(+++)，阳性细胞数>50%。由2名有经验的病理科医师双盲读片。
1.5 统计学处理
所有数据均经Excel数据库整理,采用SPSS17.0统计软件进行统计分析。两组之间阳性率比较用χ2检验及精确概率检验,应用Spearman’s分析对SKP2和P27蛋白表达的相关性进行分析，以α=0.05为检验水准。
2 结果
2.1 三种不同子宫内膜组织中SKP2的表达
见表1。表1 三种不同子宫内膜组织中SKP2的表达
2.2 三种不同子宫内膜组织中P27的表达
见表2。 表2 三种不同子宫内膜组织中P27的表达
2.3 SKP2、P27在子宫内膜异位症中的相关性表达
见表3。表3 SKP2、P27在子宫内膜异位症中的相关性表达
3 讨论
3.1 SKP2在不同子宫内膜组织中的表达及意义
S期激酶相关蛋白2(SKP2)是Zhang等[4]于1995年从大量的恶变细胞中发现的一种能与S期激酶cyclinA-CDK2相互作用的蛋白，因其主要存在于恶变细胞的S期，故以此得名。SKP2是Cullin2F-box SCF E3酶复合体中的一种，能在泛素蛋白体途径中特异性地识别底物，介导其泛素化降解，是细胞从G1期进入S期的必需因子[5]，具有促进细胞通过G1/S转换“关卡”的作用,使本来应该停止增殖或生理性凋亡的细胞不停地进入细胞周期,促进细胞周期的进展,从而促进DNA的复制、细胞的增殖，与肿瘤的发生、发展关系密切[6]。本研究统计结果显示,SKP2在EMs组的阳性表达率明显高于正常对照(P<0.01),提示SKP2的表达或过高表达可促使异位内膜的生长,可能使异位子宫内膜细胞具有更强的分裂增殖、浸润、转移、复发的倾向，与其临床表现的恶性生物学行为有关。SKP2在EMs在位内膜组分泌期明显高于增生期(P<0.05)，推测SKP2的表达可能与孕激素的上调有关。
3.2 P27蛋白在不同子宫内膜组织中的表达及意义
P27是Polyak等于1994年发现的新的细胞周期抑制基因。它是一类涉及细胞周期调控、信号传导及细胞粘附的多功能蛋白,其活性部分由P13K/Akt1信号传导途径调控[7]。P27作为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin -dependent kinase inhibitor，cro)家族的一员,广泛抑制各种细胞周期素(cyclin)和细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)的活性，具有阻止细胞通过G1至S期转换的“关卡”作用，抑制细胞分裂与增殖，促进细胞分化及凋亡，从而实现对细胞周期的负性调控[8]。此作用一旦减弱或消失，细胞就可能出现无限增殖进而形成肿瘤，故P27又被称作是抑癌基因。研究发现,P27蛋白的低表达与子宫内膜异位症发生可能有关[9]。本研究结果显示:P27在正常子宫内膜的表达多定位于腺体细胞核,表达有周期性变化,分泌期明显高于增生期(P<0.05),与Metsuzaki等[10]的观点一致。P27在正常子宫内膜组中的表达高于EMs组(在位内膜组和异位内膜组),其差异有显著性(P<0.05，P<0.01);EMs在位内膜组表达高于异位内膜组，差异有显著性(P<0.05)，说明P27蛋白的表达降低或缺失可能在子宫内膜异位症发生发展过程中起重要作用。
3.3 SKP2与P27表达的相关性
SKP2参与P27的泛素化降解,与细胞周期的进展、DNA的复制、细胞的增殖密切相关[11]。本研究发现S期激酶相关蛋白2(SKP2)与细胞周期依赖性激酶抑制因子P27之间的表达存在负性相关。SKP2的高表达，这可能导致了SKP2底物降解的紊乱，如P27、P21、cyclinA、cyclinD1、cyclinE、E2F-1等，从而促进了子宫内膜异位症的发生。此外,子宫内膜细胞中P27蛋白表达水平下降或功能性失活可能导致细胞周期的负性调控机制出现异常,使其负性调节细胞增殖能力随之下降,从而提高异位内膜细胞的增殖活性,进而使SKP2抗原表达明显增加。因此,本实验选用免疫组化法检测SKP2和P27在子宫内膜中的表达并分析二者的相关性，进一步明确SKP2和P27在子宫内膜异位症发生中的作用,这对探索子宫内膜异位症的临床诊断和治疗的新方法有着重要意义。
【参考文献】
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10 Metsuzaki S, Canis M, Murakami T, et al. Expression of the cyclin-dependent kinase inhibitor P27 in eutopic endometrium and peritoneal endometriosis. Fertility Sterility, 2001, 5: 956-960.
11 吕育纯,饶靖红,李爱禄，等.SKP2在宫颈癌组织中的表达及其临床意义.实用癌症杂志,2010,25(2):136-139.