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【摘要】 目的 探讨利用气相色谱-质谱（GC/MS）建立一种快速检测中毒患者血液毒鼠强的方法。方法 考察5种有机溶剂液-液法提取血液毒鼠强的回收率，研究毒鼠强的线性方程、最低检测限及精密度。结果 乙酸乙酯提取毒鼠强的回收率为90.40%，RSD=2.8%，n=5；毒鼠强线性方程为y=156.5x+236.1,r=0.9988；最低检测限为4ng/ml；日内精密度为RSD为4.3%，日间精密度为RSD为6.7%。解析了毒鼠强质谱图的主要碎片归属。结论 所建方法简单快速、灵敏度高、选择性好，可用于临床中毒患者血液毒鼠强的检测。
【关键词】 气相色谱-质谱联用；毒鼠强；中毒；血液
The determination of tetramine in blood of acute poisoning patients by GC/MS and clinical application
SUN Cheng-wen,LI Yu-rong,XV Shui-ying,et al.
Affiliated Hospital,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100039,China
【Abstract】 Objective In order to build a method by gas chromatograpy-mass spectrometry(GC/MS)quantitative technique for the determination of tetramine in blood of acute poisoning patients.Methods Researching the extraction rate of tetramine in blood by five kinds of organic solvents including benzene,acetic ether,acetone,chloroform,aether and the standard curve,detection limit,the precision,the repeatability of tetramine.Results The result showed that the extraction yield of acetic ether for tetramine is 90.40%,RSD=2.8%,n=5,and it is an ideal extraction solvent;tetramine work curve is y=156.5x+236.1,r=0.9988;the detection limit is 4ng/ml;RSD of the precision within a day is 4.3%,RSD of the precision between days is 6.7%.GC/MS spectrum of tetramine was also analyzed.Conclusion The extraction and analysis method of tetramine established is sensitive and speciality and is good enough to the diagnosis of the acute poisoning patient.
【Key words】 gas chromatography-mass spectrometry;tetramine;poisoning;blood
毒鼠强又名424，是一种急性杀鼠剂，毒性是氰化物的100倍，对人的半数致死量为100×103ng/kg［1］。其毒理作用尚不清楚，有报道认为它是一种作用于神经系统受体的毒物［2］。近年来，毒鼠强在我国使用广泛，因管理或使用不当造成大量人员、家畜伤亡，给社会造成了严重危害。毒鼠强的结构特殊（见图1），分析难度大，分析方法多见于司法系统用于司法鉴定［3～5］，分析样品多为食物、水、尸体脏器甚至是骨灰。这些方法不能满足医院对毒鼠强中毒患者血液样品的检测需要。本文采用权威的GC/MS技术对毒鼠强进行检测，它有效地结合了GC的高分离能力和MS的高鉴别能力，建立了一种准确的血液毒鼠强检测方法。本方法既可以对毒鼠强中毒患者进行检测，也可以用于鼠强中毒案中的司法鉴定。
1 材料与方法
1.1 毒鼠强
国家CDD提供毒鼠强，为1×105ng/ml乙醇溶液储存液，同时稀释成工作液。
1.2 试剂
苯、乙酸乙酯、丙酮、乙醚、氯仿，试剂均为色谱纯，水为双蒸水。
1.3 气相色谱-质谱仪
AGILENT公司最新产品：GC/MS 6890N-59731，配HP-5MS毛细管色谱柱（长度30m、直径0.25mm、膜厚0.25μm）。
1.4 色谱条件
进样口温度260℃，气质接口280℃。程序升温：起始温度120℃，保持1min,以速率10℃/min升温至270℃,保持10min。氦气作载气，纯度99.999%，载气流速1ml/min。1μl进样，分流比10∶1。
1.5 质谱条件
离子源（EI）电压70eV，温度230℃，四极杆温度为150℃。定性分析采用全扫描（SCAN）方式采集数据，粒子选择范围m/z 30～250。定量分析采用选择离子（SIM）进行数据采集，离子选择m/z212、240和132。
1.6 毒鼠强液-液提取方法
取血液1ml，加所选有机溶剂5ml，震荡器震荡1min。离心分离上层有机溶剂。重复萃取1次，合并2次分离的有机溶剂，60℃水浴，氮气挥干，残渣用100μl乙醇定溶。取1μl进样GC/MS。
2 结果与讨论
2.1 标准曲线和检测限
2.1.1 标准曲线
用1×105ng/ml储存液配制10、100、400、800、1200ng/ml的毒鼠强溶液，进样1μl。以毒鼠强浓度（x）和峰面积（y）进行线性回归，得标准曲线方程为y=156.5x+236.1,r=0.9988，见表1、图2。表1 毒鼠强标准曲线 （略）
2.1.2 最低检测限（SIM）
信噪比（S/N）取5∶1时，测得毒鼠强的最低检测限为4ng/ml。
2.2 有机溶剂选择及回收率
分别测定了苯、乙酸乙酯、丙酮、乙醚、氯仿液-液萃取法对血液外加毒鼠强（200ng/ml）的回收率。回收率由高至低依次为苯、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、乙醚，分别为93.2%、90.7%、86.6%、86.1%、82.9%。可以看出，苯、乙酸乙酯对毒鼠强回收率较高，考虑到苯毒性较大，会对工作人员造成伤害，所以选择乙酸乙酯较为合适。乙酸乙酯回收率为90.4%，RSD=2.8%，n=5，见表2。
表2 乙酸乙酯提取毒鼠强（200ng/ml）的回收率 （略）
2.3 精密度（SIM）
2.3.1 日内精密度
200ng/ml的毒鼠强，连续进样6次，测得RSD为4.3%。
2.3.2 日间精密度
200ng/ml的毒鼠强，连续进样4天，每天进样3次，测得RSD为6.7%。
2.4 建立毒鼠强检索谱库和谱图解析
由于毒鼠强在美国早已禁止生产、使用，在美国NIST谱库没有做毒鼠强标准质谱图，所以不能对毒鼠强进行检索。本研究利用所选的色谱质谱条件分析毒鼠强，获得了毒鼠强质谱图（SCAN范围m/z30～250)，建立了自己的检索质谱库，并对质谱图中分子离子峰m/z240、基峰m/z212及相对丰度较高的m/z132、m/z92可能的合理解析为见图1、图3。
3 方法应用
3.1 中毒患者血液样品毒鼠强的测定
例1，患者，男，司机，某日凌晨4点，在一小饭店食用馅饼2个，约15min出现抽搐，急送医院抢救。用所建方法分析患者血液，检测到毒鼠强，浓度为214ng/ml。随后对黏附在该患者衣服上的呕吐物进行检测，发现高浓度毒鼠强，确诊患者为毒鼠强中毒。图4为呕吐物检测的总粒子流图（SCAN），RT=7.82min处为毒鼠强。
3.2 血液灌流在清除血液中毒鼠强的作用
毒鼠强化学性质稳定，在外界环境中不易分解，在生物体内不被代谢，中毒后排泄非常困难，中毒1年后仍能从患者血液中检测到毒鼠强。毒鼠强中毒没有特效解毒药，只能用镇静类药物进行对症治疗。目前，血液灌流是治疗毒鼠强中毒相对较好的方法，而监测患者血液毒鼠强浓度可以评价血液灌流的效果，从而指导临床合理的治疗。表3为例1患者 2天2次灌流前后血液毒鼠强浓度，可以看出监测血液毒鼠强浓度的必要性。本患者如果不监测血液浓度，临床医生一般会认为第二次灌流前的浓度应该低于第一次灌流后的浓度。我们总结38例中毒患者的46次血液灌流前后毒鼠强浓度，显示一次血液灌流平均可以降低血液中31%的毒鼠强（RSD=13%），38例患者血液浓度范围为95～473ng/ml。但因为毒鼠强在体内排泄困难，灌流后存在严重的组织反渗现象。表3 例1患者两次灌流前后血液毒鼠强浓度 （略)
另外，本研究还根据毒鼠强中毒患者病情一般比较危重的特点对毒鼠强提取步骤进行了灵活的变更。血液毒鼠强提取可以改为“取血液和乙酸乙酯各取1ml，震荡1min离心后即可取上层有机相进样”。如此可大大地缩短检测时间，提高抢救效率。即使是牺牲一点定量上的准确性也是值得的。血液和乙酸乙酯1∶1提取毒鼠强的回收率为70.50%，RSD=4.3%，n=5。
【参考文献】
1 中华人民共和国化学工业部上海化工毒物咨询中心.常用化学品卫生与安全数据库，2004.
2 Esser T, Karu AE, Toia RF, et al. Recognition of tetramethylenenedisulfo tetetramine and related sulfamides by the brain GABA-gatedchloride channel and a cyclodiene sensitive monoclonal antibody.Chem Res toxicol,1991,4(2):162-167.
3 中国刑警学院毒物分析教研室.毒物分析.北京：群众出版社，2001，10.
4 公安部物证鉴定中心.全国鼠药中毒检验技术研讨会论文集，1999，190-192.
5 关富玉，张亚超，罗毅.鼠药毒饵中毒鼠强的气相色谱测定方法.军事医学科学院院刊，1993，17（4）：292-293.
（编辑：宋青）