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［摘要］ 目的 研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）在胃癌患者血清及肿瘤组织中的表达情况，探讨其临床意义。方法 应用ELISA法对60例非肿瘤疾病手术患者和60例胃癌患者术前、术后血清VEGF水平进行定量测定，并应用免疫组化法测定肿瘤组织的VEGF。结果 胃癌患者术前血清VEGF高于对照组（P＞0.05）。两组术后较术前升高，肿瘤组术后较术前升高（P＜0.05）。肿瘤组术前血清VEGF水平、肿瘤组织中的VEGF与浆膜受累、淋巴结转移及临床病理分期有关。肿瘤组术后随访30～36个月中出现复发转移和死亡的患者，术前VEGF表达较其他患者升高（P＜0.05）。结论 血清VEGF水平及肿瘤组织中的VEGF与胃癌的浸润、转移有关，检测血清VEGF及肿瘤组织中的VEGF对胃癌浸润、转移程度和预后的判断有重要意义。
［关键词］ 胃肿瘤；微转移；血管内皮生长因子
Expression and significance of VEGF in serum and tumor tissue in gastric cancer
ZHOU Hai-yin,LI Jian,QIAO Shi-ming,et al.Department of General Surgery,The Central Hospital of Yangpu District,Shanghai 200090,China
［Abstract］ Objective To evaluate the clinical significance of vascular endothelial growth factor (VEGF) expression in serum and tumor tissue in gastric cancer patients.Methods The pre-operational and post-operational levels of serum VEGF were measured by ELISA kit in 60 cases of gastric cancer and 60 cases of non-carcinoma as the control group,the expression of tumor tissue VEGF was measured by immunohistochemical assay.Results The pre-operational level of serum VEGF in gastric cancer was higher than that in the control group(P＞0.05).The post-operational level of serum VEGF was increased in both groups,especially in the tumor group(P＜0.05).The expression of VEGF in serum and tumor tissue was positively correlated with tumor invasion depth,lymph-node metastasis and clinical pathological stage.A follow up of 30～36 months reveals the pre-operational level of serum VEGF of tumor recurrence and death in patients was higher than the others in the tumor group(P＜0.05).Conclusion The expression of serum VEGF and tumor tissue VEGF is closely correlated with invasion and metastasis of gastric cancer.Serum VEGF and tumor tissue VEGF assay may be used to pre-operatively predict invasion and metastasis and used to evaluate prognosis.
［Key words］ stomach neoplasm;micrometastasis;vascular endothelial growth factor
肿瘤的增殖和转移是血管新生依赖性的。在肿瘤血管生成过程中，血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）是目前了解的功能最强大的特异性血管生长调节因子，各种转化生长因子、表皮生长因子、IL-6、IL-12、野生型P53及一些原癌基因均可上调VEGF产生促血管活性［1］，故VEGF可能为促血管活性因子的最后共同道路［2］。本研究通过对胃癌患者手术前后血清VEGF的定量测定及肿瘤标本中VEGF表达情况，探讨其与临床病理及肿瘤预后的关系。现分析报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择我院普外科2002年11月～2003年5月期间住院接受手术治疗的胃癌患者60例，其中男33例，女27例，年龄35～85岁，中位年龄68岁。其中Ⅰ期8例，Ⅱ期15例，Ⅲ期34例，Ⅳ期3例。对照组选择同期住院手术的非肿瘤患者60例。
1.2 方法
1.2.1 血清标本采集 在术前、术后第7天和术后6个月每月1次分别抽取清晨空腹静脉血3ml，离心分离血清，置于-20℃冻存待测。
1.2.2 血清VEGF定量检测 采用双抗体夹心ELISA法，样本中的VEGF与酶标板上的抗人VEGF单抗结合，再与结合有生物素的抗人VEGF抗体结合，经辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，与酶底物反应染色，在492nm测定与VEGF浓度相对应的OD值。以标准品的OD值画出标准曲线，根据样品OD值在该曲线图上查出相应的VEGF含量。
1.2.3 肿瘤组织VEGF检测 肿瘤组织经常规固定、石蜡包埋、切片后，采用Envision二步法染色。一抗采用鼠抗人VEGF单克隆抗体。肿瘤组织VEGF以肿瘤细胞胞质内出现棕黄色颗粒为阳性。VEGF判断标准：（-）为无瘤细胞着色，（+）为着色瘤细胞数＞10%。
1.2.4 统计学方法 用SPSS11.0软件做统计分析，P＜0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 围手术期血清VEGF水平比较 围手术期两组血清VEGF水平见表1。从表1可见，术前肿瘤组血清VEGF水平虽高于对照组，但差异无显著性（P＞0.05）。术后两组血清VEGF均较术前明显升高（P＜0.05）。肿瘤组术后血清VEGF较对照组明显增加，两组差异有显著性（P＜0.05）。表1 围手术期血清VEGF水平比较
2.2 肿瘤组术前血清VEGF与肿瘤临床病理参数的关系 肿瘤组术前血清VEGF与肿瘤临床病理参数的关系见表2。从表2可见，肿瘤组织细胞中的VEGF表达阳性患者的血清VEGF水平虽高于表达阴性者，但差异无显著性（P＞0.05）；有淋巴结转移的患者血清VEGF水平显著高于无淋巴结转移者（P=0.003）；肿瘤侵犯浆膜的患者血清VEGF水平显著高于浆膜未受累者（P=0.037）；临床分期为Ⅲ和Ⅳ期患者血清VEGF水平显著高于Ⅰ和Ⅱ期者（P=0.029）。 表2 肿瘤组术前血清VEGF与肿瘤临床病理参数的关系注：*TNM分期根据新国际T.N.M胃癌分期转换为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期
2.3 随访 术后60例均得到随访，5例Ⅰ期和2例Ⅱ期患者术后未化疗而未得到术后随访时的外周血（随访至今均存活），其余53例患者有术后6个月共6次随访的血清检测结果。随访30～36个月，在53例患者中11例死亡，5例出现转移和复发，其余37例无瘤存活，死亡及转移复发的患者术前的血清VEGF水平高于无瘤存活的患者（见表3），且差异有显著性（P＜0.05）。死亡11例中7例术后VEGF持续高水平表达，5例表达量逐渐升高；5例出现复发和转移的患者，其中3例术后血清VEGF水平持续高表达，并且表达量升高；37例无瘤存活者中21例术后VEGF水平持续低表达，6例升高后转低，10例术后VEGF水平出现逐渐升高，目前正密切随访中。表3 死亡及转移复发者与无瘤存活者术前的血清VEGF水平比较
3 讨论
VEGF是一种特异的作用于内皮细胞的多功能因子，作为一个重要的促血管生成因子，在原位诱导血管生成的作用十分强大［3］。VEGF作为内皮细胞特异有丝分裂原刺激内皮细胞增生、促使血管渗漏、刺激细胞迁移，导致纤维蛋白原外渗进入肿瘤间质而促成肿瘤浸润组织的血管生成，从而形成肿瘤内部高密度的微血管网。VEGF还能刺激淋巴内皮细胞增生，增加肿瘤高血源性和高淋巴源扩散的风险［4］。VEGF还可通过诱导Bcl-2的表达、激活有丝分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）和抑制c-JNK(c-jun-NH3-kinase）而抗肿瘤细胞凋亡。
本研究结果显示，肿瘤侵犯浆膜、有淋巴结转移、临床分期较晚的患者血清VEGF水平显著升高，提示血清VEGF水平在一定程度上反映肿瘤进展的程度。Lissoni等研究指出，晚期恶性肿瘤伴有VEGF内源性分泌增加，提示血清VEGF水平升高，则预后较差。Hyodo的研究发现，在胃肠肿瘤中，有远处转移患者的血清VEGF较无远处转移的患者明显增高，且转移患者化疗前VEGF水平低者化疗效果及生存期较升高者好。Kumar等的研究发现，结直肠癌淋巴结阳性患者的血清VEGF比阴性者明显升高。Fujisaki发现血清VEGF水平与Duke’s分期显著相关。Celen等报道诊断结直肠肿瘤VEGF的敏感性高于CEA等肿瘤标志物［5］。
术前肿瘤组血清VEGF水平虽高于对照组，但无统计学意义，术后两组血清VEGF均较术前升高，但肿瘤组较非肿瘤组更为明显，这可能与手术创伤、术后伤口生长及创面修复有关。在随访血清VEGF水平变化中，我们发现出现复发、转移及死亡组术前的血清VEGF较无瘤存活组明显升高，可以反映肿瘤病变的严重程度。复发、转移及死亡组围手术期的血清VEGF水平有升高，但差异无显著性，这可能为术前除原发肿瘤以外，微转移灶分泌入循环血中的VEGF占较大比例，手术清除了原发灶，但对于微转移灶无效，手术创伤及术后修复使VEGF水平升高，又促进了微转移灶的进一步发展，因此我们认为血清VEGF是特异性较高的微转移检测指标。
肿瘤组织中VEGF阳性表达率亦随肿瘤侵犯浆膜、淋巴结转移、临床分期进展而增加。本研究显示，血清VEGF水平和肿瘤组织中VEGF阳性表达率两者之间无显著相关，这可能与血清VEGF反映全身组织的VEGF水平，而肿瘤组织中VEGF阳性表达率仅反映局部肿瘤组织中VEGF有关。尽管如此，无论是术前血清VEGF水平或肿瘤组织中VEGF阳性表达都与肿瘤的转移、分期及预后密切相关。故检测血清VEGF是判断肿瘤分期和预报胃癌术后肿瘤复发及生存的独立指标之一［6］，定期检测血清VEGF水平的变化还可以对肿瘤治疗效果及肿瘤复发转移提供依据。
随着对VEGF研究的深入，可以设想通过VEGF和VEGF受体抗体的功能阻断，阻止肿瘤血管生成，可能成为抑制肿瘤生长和预防肿瘤转移的生物靶点之一。
［参考文献］
1 Heer K,Kumar H,Speirs V.Vascular endothelial growth factor in premeropansal women-indicator of the best time for breast cancer surgery.Br J Cancer,1998,78(9):1203-1207.
2 顾斐.血管生长抑制因子在乳腺癌的临床诊治中的应用.国外医学·外科学分册，1999，26（5）：261-264.
3 Dlate KH,Breier G,Weich HA,et al.Vascular endothelial growth factor is a potential tumor angiogenesis factor in human gliomas in vivo.Nature,1992,359(6398):845-848.
4 Arii S,Mori A,Uchida S,et al.Implication of vascular endothelial growth factor in the development and metastasis of human cancers.Hum Cell,1999,12(1):25.
5 Celen O,Kahraman I,Yildirim E,et al.Correlation of vascular endothelial growth factor(VEGF)and CEA with clinicopathological variables in colorectal cancer patients.Neoplasma,2004,51(4):293-299.
6 C Fondevila,JP Metges,J Fuster,et al.p53 and VEGF expression are independent predictors of tumor recurrence and survival following curative resection of gastric cancer.British Journal of Cancer,2004,90:206-215.
作者单位： 200090 上海，上海市杨浦区中心医院普外科
(编辑：李建伟)