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【摘要】 目的 建立反相高效液相色谱（HPLC）法测定鼻炎灵丸中木兰脂素含量的方法。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱：Diamonsil C18(4.6mm×200mm);流动相：乙腈-四氢呋喃-水（44：1：55）；检测波长：278nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃。结果 木兰脂素在0.3156～1.8936μg范围内线性关系良好，r=0.9999，平均回收率96.6%，RSD为1.8%。结论 本方法简便、准确、灵敏度高，稳定性好，可有效控制鼻炎灵丸的质量。
【关键词】 高效液相色谱；鼻炎灵丸；木兰脂素
Determination of magnolin in biyanling pill by HPLC
YU Yan,HAN Yi.The Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110032,China
【Abstract】 Objective To establish a method for determination of the content of magnolin in Biyanling pill by HPLC.Methods The HPLC method was used,The analytical column was Diamonsil C18 column (4.6mm×200mm),The mobile phase consisted of acetonitrile-tetrahydrofuran-water (44:1:55),the detector wavelength was 278nm,the flow rate was 1.0ml/min,and the column temperature was 30℃.Results The calibration curve was linear (r=0.9999) in the range of 0.3156～1.8936μg for magnolin.The average recovery of the method was 96.6% with RSD 1.8%.Conclusion The method is simple,accurate,sensitive and stable,and can be used for the quality control of Biyanling pill.
【Key words】 HPLC;biyanling pill;magnolin
鼻炎灵丸为卫生部药品标准中药成方制剂第十册收载品种，具有祛风清热，消肿通窍的作用，主要由苍耳子、辛夷、白芷等八味药组成，适用于鼻渊、鼻塞、鼻流浊涕等急、慢性鼻炎［1］。原标准过于简单，未对方中药味做含量测定，为了提高本品的质量标准，本文对方中君药辛夷中的木兰脂素进行了含量测定，经对供试样品的测定，本方法稳定可靠，准确性高，重复性好。
1 仪器与试药
1.1 仪器 美国Agilent1100高效液相色谱仪，G1311A四元梯度泵，G1313A自动进样器，G1315柱恒温箱，G1315B二极管阵列检测器；AS3120A超声波清洗器。
1.2 试药 木兰脂素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110882-200203）。供试样品（辽宁中医药大学附属医院自制；批号20040301、20040306、20040309、20040313、20040317）。乙腈为色谱纯。水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18(4.6mm×200mm);流动相：乙腈-四氢呋喃-水（44：1：55）；检测波长：278nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：10μl。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取木兰脂素对照品2.63mg,置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1ml含木减脂素105.2μg）。
2.3 供试品溶液的制备［2］ 取本品研细，取约3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯20ml，称定重量，浸泡30min，超声处理30min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3ml，加于中性氧化铝柱（100～200目，2g，内径9mm，湿法装柱，用乙酸乙酯5ml预洗）上，用甲醇15ml洗脱，收集洗脱液，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。
2.4 阴性对照液的制备 按处方及工艺制备不含辛夷的样品，按供试品溶液的制备方法制备。
2.5 测定法 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液，注入高效液相色谱仪，记录液相色谱图。由色谱图可知，在与对照品色谱峰相应的位置上供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照液在此峰位无吸收，对本品的木兰脂素含量测定无干扰（见图1）。
A木兰脂素对照品 B供试品 C阴性对照
图1 鼻炎灵丸HPLC色谱图2.6 线性范围考察 精密吸取浓度为105.2μg/ml的木兰脂素对照品溶液3.0、6.0、9.0、12.0、15.0、18.0μl，注入液相色谱仪中，记录色谱峰面积，进样量X（μg）与色谱峰面积Y经线性回归，得回归方程为：Y=529.67X-3.0533，r=0.9999,木兰脂素在0.3156～1.8936μg范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液（批号：20040301）10μl，连续进样5次，木兰脂素色谱峰面积分别为：421.7、422.8、420.7、422.6、422.5，峰面积值的RSD为0.2%，结果表明本方法精密度较好。
2.8 重复性试验 取批号为2004301的样品5份，分别制备成供试品溶液，按样品含量测定方法测定，结果木兰脂素的含量分别为4.81、4.78、4.85、4.73、4.75mg/g，RSD为1.0%，表明本方法重复性良好。
2.9 稳定性试验 取同一供试品溶液（批号：20040301），分别在0、2、4、6、8h测定峰面积：513.9、518.4、519.7、521.6、516.1，RSD为0.6%，表明本品溶液8h内稳定性良好。
2.10 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品（批号：20040301）1.5g，共计5份，分别加入一定量的木兰脂素对照品，按上述方法制备成供试品溶液，测定木兰脂素含量，计算回收率，结果见表1。 表1 回收率试验结果
2.11 样品含量测定 分别取5批样品，按上述方法制备成供试品溶液，再按本文选定的色谱条件测定峰面积，用外标法计算样品中木兰脂素的含量，结果见表2。表2 样品中木兰脂素的含量测定结果批号 木兰脂素含量
3 讨论
在供试品溶液的制备过程中，为了获得样品中木兰脂素的最佳提取方法，本实验对提取溶剂、提取方法和提取时间进行了考察，分别选用乙酸乙酯、甲醇和乙醇为提取溶剂，考察了超声提取和加热回流提取两种方法，并考察了超声提取20min、30min、40min木兰脂素的提取率，结果表明以乙酸乙酯为溶剂，先浸泡再超声30min的方法为最佳提取方法。
本实验在流动相的选择时，曾参照文献以乙腈-水（38：62）［3］、乙腈-水（45：55）［4］等为流动相进行实验，结果均为分离度较差或峰拖尾，加入四氢呋喃后峰形明显改善［5］，分离度达到1.5以上。本文所述木兰脂素的含量测定方法，具有简便快速、灵敏度高、重复性好等特点，可有效控制本品的质量。
【参考文献】
1 鼻炎灵丸质量标准［S］.中药部颁标准.10：200.
2 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）.北京：化学工业出版社，2005，126-127.
3 周琦，辛俐华.HPLC法测定鼻渊丸中木兰脂素的含量.中国药师，2006，9（3）：213-215.
4 徐丽华，崔保国，于宗渊.RP-HPLC法测定辛夷中木兰脂素与辛夷脂素的含量.药物分析杂志，2003，23（6）：426-427.
5 方红，郭群，苏玮，等.高效液相色谱法测定中药辛夷中木兰脂素的含量.药物分析杂志，2002，22（5）：342-345.
(编辑：李 木)
作者单位：110032 辽宁沈阳，辽宁中医药大学附属医院