点击显示 收起
流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae，Hi）是引起儿童严重细菌感染主要致病菌之一，尤其是社区获得性肺炎的重要病原菌，还可以引起化脓性脑膜炎、败血症等侵袭性感染 ［1］ 。它的耐药性已引起全球的广泛重视，为了解广州地区儿童鼻咽部Hi的耐药情况，我们将2000年3月～2002年12月我院呼吸科门诊及住院急性上呼吸道感染患儿鼻咽部分离到的346株Hi进行了β-内酰胺酶测定和耐药性分析。
1 材料和方法
1.1 标本来源 我院呼吸科门诊及住院急性上呼吸道感染患儿，年龄2～5岁，用鼻咽拭子采取鼻咽分泌物标本1714份。
1.2 Hi选择培养基 胰大豆蛋白胨琼脂（TSA）为基础，加入5%绵羊血，80℃水浴15min制备成巧克力琼脂，冷却至50℃左右，加入Isovitex添加剂和杆菌肽（300μg/ml）倾注平板。
1.3 Hi分离鉴定 用鼻咽拭子采取鼻咽分泌物放入保承培养基送检，取鼻咽分泌物与保承培养基混合物40μl接种于Hi选择培养基35℃5%CO 2 培养箱孵育18～24h。取无 色透明，边缘整齐，露滴状菌落涂片革兰染色，镜检为革兰阴性短小杆菌，多形态性，卫星试验及X、V因子需求试验阳性，即可鉴定为Hi。
1.4 药敏试验 用Etest法检测Hi对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、头孢呋辛、头孢克洛的耐药性。Etest纸条使用瑞典AB BioDisk公司产品（由葛兰素史克公司提供），操作按产品说明。K-B法检测Hi对氯霉素、复方新诺明、四环素及阿奇霉素的耐药性，药敏纸片使用OXOID公司产品。两种方法使用的药敏平板均为OXOID公司的HTM琼脂，操作按产品说明进行。
1.5 药敏质控 全部试验过程用Hi标准菌株ATCC49247和ATCC49766进行质控，结果完全合格。
1.6 结果判断 按照NCCLS2000年M100—S10标准。
1.7 β-内酰胺酶测定 头孢硝基噻酚显色反应方法，试剂采用OXOID公司产品，操作按产品说明进行。
2 结果
2.1 Hi分离率 从1714份急性上呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本中分离到346株Hi，分离率为20.2%。
2.2 346株Hi药敏结果 见表1。
表1 346株Hi对9种抗生素的耐药性
注:阿奇霉素的药敏试验株为171株，四环素、氯霉素、复方新诺明药敏试验株为214株，其他抗生素的试验株为346株。
2.3 β-内酰胺酶检测结果 346株Hi中44株β-内酰胺酶阳性，产酶率为12.7%。
3 讨论
Hi的生长营养要求高，需要有X、V因子存在，我们采用的Hi选择性培养基在巧克力琼脂中加入了Isovitex添加剂（X、V因子）及杆菌肽，富含X、V因子，能抑制其他细菌生长，提高了分离率，该培养基易于制备，是分离Hi的理想培养基。
氨苄西林是治疗Hi感染的常用药，近年来，各国Hi对氨苄西林的耐药性逐渐上升，Hi对氨苄西林的耐药机制主要由于细菌产生的β-内酰胺酶，Doem等报道1994～1995年美国β-内酰胺酶阳性Hi占临床分离株的36.4%，耐氨苄西林的Hi达38.9%，并发现β-内酰胺酶阴性而氨苄西林耐药的Hi（BLNAR）及β-内酰胺酶阳性而阿莫西林/克拉维酸耐药的Hi（BLPACR），1997年美国耐氨苄西林的Hi是41.6%，包括加拿大在内的北美地区是33.5% ［2，3］ ;欧洲平均为14.5%，西班牙、法国、比利时超过20%，中国香港高达37.1%，瑞士8.6% ［4，5］ 。本组346株Hi对氨苄西林耐药率为14.2%，与欧洲平均水平接近，低于中国香港、美国、包括加拿大在内的北美地区，比北京的9.7%、上海的11%稍高 ［6］ ，与杭州的14.4%接近 ［7］ 。Hi对氨苄西林的耐药机制有两方面，一是产生TEM-1和ROB-1β-内酰胺酶，该机制由质粒介导，部分为质粒接合子，并携带完整的TnA型转座子及其他耐药基因;另一机制是细胞壁上青霉素结合蛋白（PBPs）突变导致与氨苄西林的亲和力下降 ［7］ 。本组Hi有49株对氨苄西林耐药，其中44株是由于β-内酰胺酶阳性产生的耐药，占89.8%，5株是非媒介导机制导致β-内酰胺酶阴性而氨苄西林耐药（BLNAR），占10.2%，说明Hi对氨苄西林的耐药机制主要由于细菌产生的β-内酰胺酶;Doem等报道β-内酰胺酶阴性Hi中氨苄西林中介（BLIAR）占2.7%，BLNAR占1.3% ［3］ ;本组Hi中BLIAR占3.2%，BLNAR占1.5%，与Doem等报道接近，未发现β-内酰胺酶阳性而阿莫西林/克拉维酸耐药的菌株（BLPACR）。
我们通过对346株Hi的耐药性监测发现Hi对β-内酰胺酶类抗生素的耐药性较低，尤其是头孢类抗生素，而复 方新诺明的耐药率高达51.4%，低于北京的65.5%，高于上海的46.1% ［6］ ，且出现对氨苄西林、氯霉素、四环素、复方新诺明的多重耐药性，同时对其中两种抗生素都耐药的Hi占5.8%，同时对其中三种抗生素耐药的Hi占5.8%，同时对四种抗生素都耐药的Hi占4.6%，可见多重耐药性应引起重视。因此，临床治疗Hi感染不宜使用磺胺类抗生素，应首选β-内酰胺类抗生素及加酶抑制剂的复合制剂。由于Hi的耐药性存在地区性差异，因此，不同国家和地区应重视开展对Hi的耐药性监测，这对指导当地临床治疗Hi感染有非常重要的意义。
参考文献
1 杨永泓，沈叙庄，刘秀云，等.我国流感嗜血杆菌疾病的研究历史及现状.中华儿科杂志，1997，35（4）:216-218.
2 Doem GV，Bruggemann AB，Pierce G，et al.Antibiotic resistance among clinical isolates of Heamophilus influenzae in the Uinited States in1994and1995and detection of bata-lactamase-positive strains resistant to amoxicillin-clavulanate:results of a national multicener surveillance study.Antimicrob Agents Chemother，1997，41:292-295.
3 Doem GV，Jones RN，Pfaller MA，et al.Haemophilus influenzae and Mooraxellacatarrhalis from patients with community-acquird respiratoˉry tract infections:antimicrobial susceptibility pattems from the SENTRY antimicrobial surveillanceprogram（United States and Canada，1997）.Antimicrob Agents Chemother，1999，43:385-389.
4 Felmingham D，Washington J.The Alexander project group.Trend in anˉtimicrobial susceptibility of bacterial respiratory tract pathogens Findings of the Alexander project1992-1996.J Chemotherapy，1999，11，Suppl:5-21.
5 Liassine N，Gervaix A，Hegi R，et al.Antimic