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Department of General Surgery，Beijing Puren Hospital，Beijing100062，China
【Abstract】 Objective To investigate the significance of the relationship between the expression of vascular en-dothelial growth factor（VEGF）in the tissue and invasion and metastasis in colon carcinomas.Methods The levels of VEGF in the tissue were detected by ELISA in42cases of colon carcinoma and40cases of benign colon tumor.The differences were compared between benign and malignant diseases，volume of tumor，clinical stages.Results The levels of VEGF in tissue of colon carcinomas were obviously higher than that of benign tumor group and normal colon group（P<0.01）.Compared with the group of no lymph node metastasis，the VEGF level of lymph node metastasis group was obviously higher（P<0.05）.The VEGF levels were positively related with volume of tumor and clinical stages.And the levels of VEGF had ascending trends according to the clinical stages.Conclusion VEGF may play an important role in the invasion and metastasis of colon carcinomas.Monitoring the levels of VEGF in colon carcino-mas tissue may have the important significance on forecasting the invasion and metastasis of colon carcinomas.
【Key words】 colon neoplasm;VEGF;metastasis
新生血管的形成是恶性肿瘤生长和转移的重要步骤，此过程受多种因子调节，其中具有重要意义的是血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），其表达水平与肿瘤的浸润、转移和预后密切相关 ［1］ 。我们采用ELISA法研究VEGF在结肠癌、结肠良性肿瘤及结肠正常组织中的表达，探讨结肠癌组织中VEGF表达水平与侵袭、转移的关系，以及对临床的指导意义。
1 资料与方法
1.1 临床资料 选择2002年9月～2005年2月我院手术治疗的结肠癌患者共42例，男28例，女14例，年龄31～82岁，中位数年龄51.7岁。所有患者术前均经纤维结肠镜活检病理证实，其中乳头状腺癌21例，管状腺癌14例，粘液腺癌4例，印戒细胞癌3例，均行结肠癌根治术。Duke's分期A期7例，B期13例，C期19例，D期3例。
良性对照组为同期良性结肠肿瘤患者40例，男性25例，女性15例，年龄26～77岁，中位数年龄63.8岁，其中家族性息肉病2例，行全结肠切除术;较大的腺瘤性息肉15例，行局部肠段切除术;其它较小的息肉23例，均行高频电切术。
所有参加研究者术前均未接受过放化疗等。
1.2 方法
1.2.1 标本收集及处理 手术病人术中取结肠肿瘤组织和肿瘤周围5cm外的结肠组织;取正常结肠（因其它良性病变切除结肠者）10例作对照;均于-80℃冻存。
1.2.2 测定方法 检测时准确称量组织标本200mg，加入生理盐水1ml，研磨成匀浆，离心后取上清液，进行蛋白定量分析，按ELISA检测试剂盒（美国GB公司）使用说明加样检测，通过全自动酶标比色测定仪（DG3022A型）于450nm处读取吸光度值，所测值按标准曲线换算成VEGF蛋白的含量。
1.3 统计学方法 用SPSS11.5统计软件包作数据分析，资料间差异采用t检验，P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 VEGF在各组中的含量 结果见表1。结肠癌与结肠癌旁组织、良性肿瘤组织、正常结肠之间，差异均有显著性（P<0.01）。结肠癌旁组织与正常对照组之间差异无显著性（P>0.05）。结肠良性肿瘤与正常对照组之间差异有显著性（P<0.05）。
2.2 结肠癌组织VEGF水平与肿瘤生物学特性、病理特征的关系 42例结肠癌患者按Duke's临床分期、肿瘤大小、有无淋巴结转移、病理和分级情况分成各组，其VEGF的测定值见表2。可见临床分期A、B、C、D期之间，VEGF的表达水平逐渐升高，C、D期与A、B期相比较，差异有显著性（P<0.05）。肿瘤直径≥5cm者VEGF含量与<5cm者相比，二者差异有显著性（P<0.05）。有淋巴结转移患者的VEGF与无淋巴结转移患者相比，差异有显著性（P<0.05）。组织中VEGF含量与组织学类型、病理分化程度等临床病理特征之间差异无显著性（P>005）。
表1 VEGF在组织中的含量水平 （略）
表2 VEGF表达水平与结肠癌生物学特性的关系（略）
3 讨论
恶性肿瘤的增殖和转移是一个极其复杂的过程，在此过程中新生血管生成对肿瘤的发生、发展起着重要作用，是影响肿瘤生长和转移的重要因素。目前已识别的新生血管形成因子较多，VEGF是其中最重要的一种，它能够促进内皮细胞增生，直接作用于血管内皮细胞，增加微血管通透性，对肿瘤血管的形成及肿瘤细胞生物学行为均有重要影响，大量研究表明VEGF与肿瘤的侵袭和转移密切相关 ［1］ 。对结肠癌组织VEGF的免疫组化研究在国内外已见报道，表明VEGF的表达是标记结肠癌复发、远处转移及预后差的有效指标 ［2］ 。本研究检测了结肠癌、良性结肠肿瘤及正常结肠组织的VEGF含量，结果表明:结肠癌组VEGF的 含量显著高于结肠癌旁组织、良性肿瘤组织及正常对照组（P<0.01）;良性肿瘤组织与正常结肠之间差异有显著性（P<0.05）。结肠癌组织中的VEGF表达明显高于结肠良性肿瘤组织，良性肿瘤组织又明显高于正常结肠，说明在由正常结肠、癌前病变到结肠癌逐步演变的过程中，组织VEGF具有逐渐升高的趋势，并可能在此过程中起到重要的作用，这和Kumar的研究结论相似 ［3］ 。
肿瘤浸润程度、淋巴结转移情况是评价恶性肿瘤预后的重要指标 ［4］ 。通常当肿瘤直径≥1mm时即有新生血管形成以维持肿瘤的生长，肿瘤细胞亦可经血管进入血液循环发生血行转移。另一方面，肿瘤细胞可分泌多种血管生长因子如VEGF等，促进肿瘤组织的血管化，在血管生成中起着重要的作用。我们在研究中发现VEGF表达与结肠癌的病理类型、组织学分级无显著相关;而在肿瘤直径≥5cm者VEGF的含量明显增高，与<5cm者相比，二者差异有显著性（P<0.01），说明VEGF表达可能和肿瘤浸润深度有明显关系。并且结肠癌淋巴结转移组组织VEGF水平与未转移组相比，差异也有显著性（P<0.01），提示组织VEGF表达水平高，肿瘤的浸润能力强，生长快，容易早期发生淋巴结转移。由于许多隐匿性淋巴结转移患者不能被临床所发现，所以检测患者组织中VEGF的含量，可以作为评价肿瘤生长情况和预测结肠癌潜在转移复发的有效指标，为临床提供参考。临床分期也是判断结肠癌预后比较重要的因素之一，本研究结果显示组织VEGF表达水平与结肠癌临床分期密切相关，VEGF含量随分期增加而逐步升高，并且C、D期分别与A、B期相比差异均有显著性（P<0.01）。提示随着临床病期的进展，组织VEGF分泌量也更高，肿瘤的侵袭能力增强，发生转移的机会增大，预后不良。
总之，VEGF是促进肿瘤血管生成的重要细胞因子，可促进结肠癌组织的血管生成，其组织VEGF水平与结肠癌的发生发展有密切关系，在结肠癌组织中的含量明显高于结肠良性肿瘤组织和正常结肠组织，当肿瘤发生转移时，VEGF常过度表达。因此，组织VEGF表达水平可以作为判断结肠癌恶性进展程度的重要参考指标，在指导临床治疗方面有一定的参考意义。
【参考文献】
1 Asano M，Yukita A，Matsumoto T，et al.Inhibition of tumor growth and metastasis by an immunoneutralizing monoclonal antibody to human vas-cular endothelial growth factor/vascular permeability factor121.Cancer Res，1995，55（22）:5296-5301.
2 Ochs AM，Wong L，Kakani V，et al.Expression of vascular endothelial growth factor and HER2/neu in stage II colon cancer and correlation with survival.Clin Colorectal Cancer，2004，4（4）:262-267.
3 Kumar H，Heer K，Lee PW，et al.Preoperative serum vascular endothe-lial growth factor can predict stage in colorectal cancer.Clin Cancer Res，1998，4（5）:1279-1285.
4 Guba M，Seeliger H，Kleespies A，et al.Vascular endothelial growth fac-tor in colorectal cancer.Int J Colorectal Dis，2004，19（6）:510-517.
作者单位:100062北京，北京市普仁医院普外科