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【摘要】 目的 探讨灵芝精粉和孢子粉混合物抗肿瘤的免疫学机制。方法 采用Elisa法测定不同剂量灵芝精粉和孢子粉混合物对S180荷瘤小鼠IL-2、TNF-α含量的影响。结果 小剂量组（0.5mg/kg体重）IL-2和TNF-α水平明显高于对照组（P＜0.05）。结论 小剂量的灵芝精粉和孢子粉混合物对荷瘤鼠IL-2、TNF-α均有一定的诱生作用，提示小剂量的灵芝精粉和孢子粉混合物可能通过影响宿主BRM系统而发挥其抑制肿瘤的作用。
【关键词】 灵芝精粉和孢子粉混合物；荷瘤鼠；IL-2；TNF-α
Stimulating effect of gandoerma lucidum extract and spore on IL-2 and TNF-α of Tumor Bearing Mice
ZHENG Zhen,SHEN Zi-yin,HUANG Hui,et al.
Institute for Integrating Chinese Medicine with Western Medicine Affiliated to Shanghai Fudan Universtiy,
【Abstract】 Objective To explore the immunity mechanism of anti-tumor effect of Ganoderma Lucidum Extract and Ganoderma Spore.Methods To determine the effect of different dosages of Gandoerma Lucidum Extract and Spore on IL-2 and TNF-( of S180 tumor bearing mice.Results The IL-2 level and TNF-( level in small dosage group of Gandoerma Lucidum Extract and Spore is significantly higher than that in the control group (P<0.05).Conclusion The small dosage group has certain stimulating effect on IL-2 and TNF-( of tumor bearing mice, which suggests that small dosage group of Gandoerma Lucidum Extract and Spore play anti-tumor effect by affecting the host BMR system.Gandoerma Lucidum Extract and Ganoderma Spore might be used for their potential effect on tumor biological therapy which is now widely applied for the adjunct treatment on cancer. The study observe stimulating effect of the small dosage group of Gandoerma Lucidum Extract and Spore on IL-2 and TNF-( of tumor bearing mice with a aim to have a primary exploration on its immunity mechanism of anti-tumor.
【Key words】 Ganoderma Lucidum Extract and Ganoderma Spore;Tumor Bearing Mice;IL-2;TNF-α
灵芝精粉和孢子粉混合物在肿瘤生物治疗方面可能具有潜在的应用前景，目前已被广泛用于癌症的辅助性治疗。本研究以S180荷瘤鼠为模型，观察了灵芝精粉和孢子粉混合物对IL-2、TNF-α的诱生作用，旨在对其抗肿瘤的免疫学机制进行初步探讨。
1 材料与方法
1.1 灵芝精粉和孢子粉混合物 由上海绿谷生物医药研究所提供，批号：970815。
1.2 动物及分组 雌性C57小鼠40只，体重20g左右，鼠龄40天。随机分为4组，每组10只；A组为空白对照组；B组为低剂量组（0.5mg/kg体重）；C组中剂量组（1mg/kg体重）；D组为高剂量组（2mg/kg体重）。
1.3 瘤株 小鼠S180肉瘤由中科院上海药物研究所提供。
1.4 动物模型 将1mm3S180瘤块用20号骨髓穿刺针接种于小鼠右前肢皮下，制成荷瘤小鼠模型。
1.5 给药方法 B组、C组、D组均于造模前1周开始口服相应剂量的灵芝精粉和孢子粉混合物，造模后继续服药20天，取血清测IL-2、TNF-α含量，并取实体瘤称重，并按下式计算抑瘤率。
抑瘤率（％）＝对照组瘤重-实验组瘤重 对照组瘤重×100％
1.6 Elisa测定IL-2、TNF-α含量 每组取8只小鼠，参照小鼠IL-2、TNF-α ElisaKit（美国Endogen公司产品）说明书程序，每孔加入50μl标准品或待测样品，根据OD450值绘制标准曲线，并计算待测样品IL-2、TNF-α含量。
1.7 统计学处理 采用两样本均数比较的t检验。
2 结果
2.1 灵芝精粉和孢子粉混合物对荷瘤小鼠的抑瘤作用 见表1，不同剂量的灵芝精粉和孢子粉混合物水溶液对荷瘤小鼠的肿瘤生长均有一定的抑制作用，与空白对照组相比，组间差异具有显著性（P＜0.05）；但不同剂量组间的瘤重差异无显著性。提示在本次实验的剂量范围内，灵芝精粉和孢子粉混合物的抑瘤作用无剂量相关性。
表1 灵芝精粉和孢子粉混合物对荷瘤小鼠瘤重的影响 (略)
注：与对照组相比，*P＜0.05
2.2 灵芝精粉和孢子粉混合物对荷瘤小鼠血清IL-2含量（pg/ml）的影响 见图1。低剂量组血清IL-2含量为90±30.0，对照组为55±22.5，组间差异具有显著性（P＜0.05）；中、高剂量组的IL-2含量分别为65±25.5、60±34.0，与对照组相比，其差异无显著性（P＞0.05）。
图1 灵芝精粉和孢子粉混合物对荷瘤小鼠血清IL-2水平的影响
2.3 灵芝精粉和孢子粉混合物对荷瘤小鼠血清TNF-α含量的影响 见表2，低剂量与高剂量的灵芝精粉和孢子粉混合物均可提高荷瘤鼠血清TNF-α含量（P＜0.025），而中等剂量组TNF-α含量与对照组相比差异无显著性（P＞0.05）。
表2 灵芝精粉和孢子粉混合物对荷瘤鼠血清TNF-α含量的影响
注：与对照组相比，*P＜0.025
3 讨论
1985年，美国国家癌症研究委员会正式将癌症生物治疗确立为即外科、放疗和化疗之后的第四种疗法，从而为实现癌症的免疫疗法迈出了重要的一步，同时也为从免疫学角度评估抗肿瘤中药的疗效、阐明其抗肿瘤机制提供了重要依据。
灵芝在《神农本草经》中被列为上品，具有较广泛的药理作用。对灵芝精粉和孢子粉混合物的研究发现，在剂量为0.5～2g/kg体重范围内，对S180荷瘤小鼠有一定程度的抑瘤作用，并发现在小剂量组，IL-2及TNF-α水平明显高于对照组，表明小剂量的灵芝精粉和孢子粉混合物对荷瘤鼠IL-2及TNF-α均有一定的诱生作用。鉴于IL-2及TNF-α是宿主BRM（biological response modifiers，BRM）系统中具有抗肿瘤作用的细胞因子，具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用［1，2］，因此这一结果提示，小剂量的灵芝精粉和孢子粉混合物可能通过影响宿主BRM系统，从而发挥其抑制肿瘤的作用。
笔者在实验中还发现，高剂量的灵芝精粉和孢子粉混合物对荷瘤鼠IL-2水平无明显影响，但可使TNF-α值升高，而中剂量的灵芝精粉和孢子粉混合物对IL-2及TNF-α水平均无影响。本次实验尚不能对这种现象予以合理的解释，但有资料表明， TNF-α通过增强IL-2的受体表达而实现其免疫调节功能［3］，此外，在肿瘤的过继免疫治疗中，IL-2等细胞因子还可减少TNF的毒副作用［4］,从这一角度考虑，在肿瘤的防治研究中，采用低剂量的灵芝精粉和孢子粉混合物似乎更为合理。
【参考文献】
1 Kimura K, Bowen C, Spiegel S,et al. Tumor necrosis factor-alpha sensitizes prostate cancer cells to gamma-irradiation-induced apoptosis. Cancer Res,1999,59(7):1606-1614.
2 Capelli,E Barni S, Vaccarone R, et al. Cell activation and death(apoptosis) induced by IL-2:ultrastructural evidence. Anticancer Res，1996，16(4):1775-1780.
3 Owen-Schavb L B. Synergy of tumor necrosis factor and interleukin 2 in the activation of human cytotocic lymphocytes: Effect of tumor necrosis factor α and interleukin 2 in the generation of human lymphokine-activated killer cell cytotoxicity. Cancer Res,1988，48:788.
4 Agah R.Successful therapy of natural killer resistant pulmonary metastases by the synergism of γ interferon with tumor necrosis factor and interleukin 2 in mice. Cancer Res,1988，48:2245.
(编辑：汪 洋)
作者单位： 200433 上海，上海复旦大学中西医结合研究所