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【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定石榴健胃胶囊中胡椒碱的含量。方法 反高效液相色谱法，甲醇-水（76：24）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为343nm，用外标法定量。结果 胡椒碱在0.62～3.72μg/ml 范围内呈良好的线性关系，回归方程为C=0.024467496+0.00002868684948A ，r=0.9998；平均加样回收率为99.40 %（N=5，RSD=0.584%）。结论 方法可行，重现性好，能准确监控该制剂的质量。
【关键词】 HPLC; 石榴健胃胶囊; 胡椒碱
【Abstract】 Objective Establishment the HPLC method for the determination of piperine in Shilioujianwen jiaonang.Methods Using C18 column （4.6mm×150mm，5μm）. The mobile phase consisted of methanol-water（76：24）.The flow rate was 1.0 ml/min with U-V detection at 343nm. Results The liner range for the content of piperine was 0.62～3.72μg/ml（r=0.9998，n=6）.The recoveries of piperine were 99.40%（n=5，RSD=0.584%）.Conclusion Th method is sample ,rapid ,accurate and is suitable for the determination of piperine in ShiLiouJianWen Jiaonang.
【Key words】 shilioujianwen jiaonang;piperine;HPLC
石榴健胃胶囊为《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药》第一册收载的品种，由石榴子﹑肉桂﹑荜茇﹑豆蔻和红花组成，确定以本品中荜茇的主要成分胡椒碱作为检测指标；采用高效液相色谱法测定石榴健胃胶囊中胡椒碱的含量。通过试验，确定了比较理想的色谱条件。并经过方法学考察及阴性对照实验，表明该方法操作简单，重现性好，专属性强，方中其他组分对胡椒碱的测定无干扰。
1 仪器与试药
岛津LC-10AT泵，岛津SPD-10A检测器；岛津 UV2201 型紫外-可见分光光度计；胡椒碱对照品（供含量测定用）：购自中国药品生物制品检定所；甲醇（色谱纯），水为高纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 检测波长选择 精密称取胡椒碱对照品适量，用无水乙醇制成每1ml含10μg的溶液，在190～400nm波长范围扫描，结果在343.1nm波长处有最大吸收。
2.2 色谱条件 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（76：24）为流动相；检测波长为343nm。
2.3 专属性考察
2.3.1 胡椒碱对照品的HPLC图的测定 精密称取对照品适量，用无水乙醇制成1ml含2.5μg的溶液，取10μl注入色谱仪测定。
2.3.2 石榴健胃胶囊的HPLC图的测定 取石榴健胃胶囊内容物，研匀，精密称取1.5g，置100ml棕色量瓶中，加无水乙醇80ml，超声处理30min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μl注入色谱仪测定。
2.3.3 阴性对照液的HPLC图的测定 按处方配比取石榴子0.830g,肉桂0.140g,红花0.400g,豆蔻0.066g，置100ml棕色量瓶中，加无水乙醇80ml，超声处理30min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μl注入色谱仪测定。
2.3.4 荜茇药材溶液的HPLC图谱的测定 取荜茇药材粉末0.3g，置150ml棕色量瓶中，加无水乙醇100ml，超声处理30min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密取续滤液3ml，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μl注入色谱仪测定。
2.4 线性关系考察 精密称取胡椒碱对照品15mg，置50ml棕色量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置50ml棕色量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0和6.0ml，分别置10ml棕色量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取10μl注入色谱仪，测定。以峰面积对浓度进行回归分析，结果：胡椒碱在0.62～3.72μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系，回归方程为：C=0.024467496+0.00002868684948A，相关系数：γ=0.9998。
2.5 精密度试验 取石榴健胃胶囊内容物，研匀，精密称取1.5g，置100ml棕色量瓶中，加无水乙醇80ml，超声处理30min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μl注入色谱仪测定。重复进样6次。结果：RSD为0.91%。
2.6 稳定性试验 取石榴健胃胶囊内容物，研匀，精密称取3份，各约1.5g，分别置100ml棕色量瓶中，加无水乙醇80ml，超声处理30min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μl注入色谱仪测定。分别在0、4、8h测定，结果：样品溶液放置8h后RSD分别为1.73%、0.51%、1.65%。
2.7 重复性试验 取石榴健胃胶囊内容物，研匀，精密称取9份，每份约1.5g，分别置100ml棕色量瓶中，加无水乙醇80ml，超声处理30min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μl注入色谱仪测定。另精密称取胡椒碱对照品适量，用无水乙醇制成每1ml含胡椒碱2.5μg的溶液，取10μl注入色谱仪测定，按外标法计算。结果：胡椒碱的平均含量为1.30mg/g（RSD=2.83%，N=9）。
2.8 加样回收率试验 精密称取内容物8.0g、胡椒碱对照品6mg，置250ml棕色量瓶中，加无水乙醇80ml，超声处理30min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密取续滤液1ml，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10μl注入色谱仪测定。另精密称取胡椒碱对照品适量，用无水乙醇制成每1ml含胡椒碱2.5μg的溶液，取10μl注入色谱仪测定，按外标法计算加样回收率，结果见表1。表1 加样回收试验结果
2.9 样品的含量测定 取装量差异项下的内容物，研匀，精密称取1.5g，置100ml棕色量瓶中，加无水乙醇80ml，超声处理30min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取胡椒碱对照品适量，用甲醇制成每1ml约含胡椒碱2.5μg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入色谱仪，测定，按外标法计算含量。结果见表2。
3 讨论
在以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（76：24）为流动相进行流动相，检测波长为343nm的色谱条件下，石榴健胃胶囊中的其他组分不干扰胡椒碱的测定。胡椒碱的检测峰与前后峰的分离度分别为1.75和1.51。色谱柱的理论板数为1794.9。表2 三批样品含量测定结果。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中华人民共和国药典，2000年版（一部）.北京：化学工业出版社，2000，188.
2 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·藏药，第一册.1995，302.
(编辑：齐 永)
作者单位：1 014030 内蒙古包头，包头市第四医院 ；2 014030 内蒙古包头，包头市药检所