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【摘要】 目的 建立柿叶中芦丁含量的HPLC分析方法。方法 C18柱，流动相:乙腈－0.05M醋酸胺溶液（醋酸调pH=5）（20:80）。结果 芦丁线性测定范围为0.00492～0.0984mg/ml,在该线性条件下,测定良好；加样回收率为99%，精密度RSD <2%。结论 本方法简单、有效、可行，可用于柿叶的质量评价。
【关键词】 柿叶;芦丁
柿叶（Diospyros Kaki L.f），为柿树科柿树属植物新鲜或干燥叶，主含黄酮苷、鞣质、酚类、树脂、香豆精类化合物、还原糖、多糖、挥发油、有机酸（白桦脂酸、齐墩果酸、熊果酸）、叶绿素。柿叶味苦、性寒，具有下气平喘、生津止渴、清热解毒等作用［1］。现代药理学研究表明［2～3］，柿叶具有广泛的药理作用，包括血管扩张（软化血管）、降脂降压、抗氧化、止血、疗疮等多种功效。在研究柿叶对心血管系统的药理作用时发现，柿叶能增加离体兔心和在体蛙心冠状动脉血流量，增强小鼠心肌营养性血流量和麻醉狗冠脉血液循环，对大鼠急性心肌缺血具有保护作用。柿叶具有广泛的生理活性，其开发利用价值很大，而其质量控制比较零星散在，分析方法学研究并不成熟，因此，为进一步开发该药材，本文系统对其主要成分-芦丁进行了分析和测定,建立了该类成分的分析方法，从而控制其质量。
1 仪器与实验材料
1.1 试剂和药材 芦丁标准品（中国药品生物制品检定所,批号:0076-9705），实验用水为纯净水，乙腈为色谱分析乙腈（Fisher公司）。所有药材样品均由笔者本人收集不同产地及商品的药材。
1.2 仪器 高效液相色谱仪HP1100系列（美国惠谱公司），包括二元泵GB12A，Rheodyne7725i手动进样器，二极管阵列检测器（DAD），HPA.06.01化学工作站；HP-Hyspersil BDS-C18（250mm×54mm，5μm）色谱柱；HS3120型超声波提取器（淮阴汉邦科技有限公司），十万分之一天平（上海天平仪器厂）。
2 实验方法和结果
2.1 色谱条件的选择和优化 流动相为醋酸胺溶液（A）和乙腈（B）洗脱, 经反复优化,则为乙腈-0.05M醋酸胺溶液（醋酸调pH=5）（20:80）,流速为1.0ml/min,温度为25℃。
2.2 检测波长的选择 精密称取对照品即芦丁2mg,加甲醇定容至25ml的容量瓶中，摇匀，用甲醇做空白对照，在200～400nm进行扫描，结果见在257nm、364nm有最大吸收，故选择在257nm处作为测定波长。
2.3 样品前处理的考察 精密称取经粉碎后的干燥柿叶5g,加甲醇50ml,加热回流提取2次,每次2h，提取液合并,过滤，定容至100ml容量瓶中,待测定。
2.4 线性关系考察 精密称取柚皮苷对照品9.84mg，用适量甲醇溶解，定容至100ml，摇匀。精密量取上述对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、10ml,分别安置于10ml的容量瓶中,甲醇稀释至刻度,摇匀,进样,测定其峰面积,以对照品浓度（C）为横坐标，吸收度（A）为纵坐标进行回归计算。线性方程为C=0.034512X-0.000056（r=0.9998），线性范围为0.00492～0.0984mg/ml，在检测范围内显示了良好的线性关系。
2.5 最低检测限 以基线噪声的3倍作为最低检测限，经测定，芦丁为0.02μg。
2.6 精密度的考察 分别精密吸取对照品储备液，重复进样5次，RSD为1.12%。
2.7 稳定性试验 精密称取柿叶药材粉末，按“样品测定”项下制备供试液并分析，以外标法,计算各成分的含量，一天内分析8次,结果RSD为1.60%。说明其成分稳定。
2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品粉末2500mg，共5份，分别加入对照品的储备液适量，按“样品测定”项下制备供试液并分析，计算含量，结果黄酮的平均加样回收率为99%。
2.9 样品测定 精密称取经粉碎后的干燥柿叶5g,加甲醇50ml,加热回流提取2次,每次2h，提取液合并,过滤，定容至100ml容量瓶中,微孔滤膜过滤（孔径0.5μm），吸取20μl，注入高效液相色谱仪，按上述选定的色谱条件进行HPLC分析，记录峰面积，外标法计算含量。结果见表1。表1 柿叶中芦丁含量（ 略）
3 小结与讨论
首次建立了柿叶中芦丁的HPLC分析方法,应用建立的分析方法，对不同产地的商品6件产地样品或商品进行了分析，结果表明，所测样品的芦丁含量范围为0.17%～0.25% 之间。
【参考文献】
1 林娇芬，林河通，谢联辉，等.柿叶的化学成分、药理作用、临床应用及开发利用．食品与发酵工业，2005，31（7）：91.
2 韩克慧，韩道昌，张益民．柿树的药理和临床应用．中成药研究，1983，（7）：27-28.
3 梁催，符福民．柿叶对心血管系统的药理作用．药学通报，1985，20（4）：245.
作者单位：518106 广东深圳，深圳市光明新区公明医院药剂科