HPLC法测定素清丸中黄芩苷的含量

【摘要】  建立HPLC法测定素清丸中黄芩苷的含量。方法 采用Phenomenex C18 Gemini（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，柱温为室温，以甲醇-0.5%磷酸溶液（50：50）为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长：280nm。结果 黄芩苷进样量0.501～2.506μg范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.9999）,平均回收率为99.10%,RSD=0.50%（n=5）。结论 该方法简便,结果准确,可作为本品质量控制的有效方法。

【关键词】  HPLC 素清丸 黄芩苷

    【Abstract】  Objective  To establish a HPLC method for the quantitative determination of Baicalin in Suqing pills.Methods  The determination was performed on Phenomenex C18 column（250mm×4.6mm,5μm）with the mobile phase consisted of methanol-0.5%phosphoric acid solution （50:50） and the column temperature was ambient. The flow rate was 1.0ml/min.The detection wavelength was set at 248nm.Results  The method showed a good linear relationship within the range of 0.501～2.506μg of Baicalin （r=0.9999,n=5）. The average recovery rate was 99.10% with RSD=0.50%（n =5）.Conclusion  The method is simple and accurate and can be used for the quality control of Suqing pills.

    【Key words】  HPLC; Suqing pill;baicalin

    素清浓缩丸是由茯苓、黄芩、黄连、生苡仁等九味药组方而成，为连云港中医院制剂室制剂，用于清热化湿，主治湿热内蕴，口苦口干，口中粘腻，不思饮食，精神倦怠，大便不爽，舌苔黄厚，临床用于清热泻火、消炎利便，效果显著。为了确保制剂质量，笔者根据方中成分,选择其主药之一黄芩苷作为含量控制的指标,现参照相关文献资料［1～4］，建立用高效液相色谱法测定素清丸中黄芩苷含量的方法，方法简便，重现性好，可用于该制剂的质量控制和评价。

    1  仪器与试药

    Waters-2695型液相色谱仪, Waters-2996型紫外检测器，Empower色谱工作站；色谱柱：Phenomenex C18 柱Gemini（250mm×4.6mm，5μm）；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检验所，批号1110715-200514）；甲醇为色谱纯，磷酸为优级纯。素清丸为连云港中医院制剂室提供（批号：20060521、20060612、20060803）。

    2  方法与结果

    2．1  色谱条件  流动相为甲醇：0.5%磷酸溶液（50：50），流速：1.0ml/min，检测波长：280nm。柱温：室温；理论板数按黄芩苷计7500。

    2．2  对照品溶液的制备  精密称取黄芩苷对照品50.12mg，置50ml量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液5ml置50ml量瓶中,用流动相稀释到刻度，作为对照品溶液。

    2．3  样品溶液的制备  样品研细，精密称取的样品细粉3.12g用流动相50ml,加热回流3h，然后转移置100ml容量瓶中，超声30min使溶解，并用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm水溶性滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

    2．4  线形关系的考察  取对照品溶液，分别进样5、10、15、20、25μl，即得含相当于黄芩苷0.5012、1.0024、1.5036、2.0048、2.506μg的对照品溶液，测定峰面积，以黄芩苷质量为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得出回归方程以及线性范围，Y=1.78×107X－6521，r=0.9999，黄芩苷进样量在0.501～2.506μg范围内峰面积与进样量呈良好线性。

    2．5  进样精密度试验  在上述色谱条件下，取黄芩苷对照品溶液重复进样6次20μl,记录峰面积，RSD为0.6%。

    2．6  重复性试验  精密称取同一批号的样品（批号：20060521），按照样品测定的方法操作重复操作6次，测得黄芩苷平均含量和RSD,结果表明：重复性试验RSD为1.6%，表明本法重现性较好。

    2.7  加样回收试验  精密称取已知含量的样品5份，每份加入精密称定的对照品混匀，照样品含量方法操作，计算回收率见表1。表1  加样回收试验                       

    2.8  稳定性试验  取样品（批号：20060521）新配的供试品溶液分别在0，1，3，5，8h进样10μl,测定其中黄芩苷的峰面积，结果RSD为1.2%，表明供试品溶液在8h内稳定。

    2.9  样品的含量测定  取3批样品，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，分别进样10μl，记录色谱图，按外标法计算，结果见表2，图1。  表2  样品含量测定结果

    3  讨论

    参考《中国药典》有关黄芩苷含量测定方法［1］, 分别选用甲醇-0.5%磷酸溶液（50：50）；甲醇-0.1%磷酸溶液（50：50）和乙腈 -0.5%磷酸溶液（28：72）三种流动相实验，黄芩苷的峰型没有太大差异，分离效果不太理想，但是采用甲醇-0.5%磷酸溶液（50：50）作为流动相，与样品周围的杂质峰能够完全分开，分离效果较为理性。

    用纯甲醇和流动相两种溶剂分别对样品进行超声提取,结果显示,仅仅用甲醇超声提取,样品提取不是很完全，选用流动相先加热回流3h，提取率高,再测定黄芩苷的含量，为了避免其他成分的干扰，每针样品进样分析时间不得少于35min。

【参考文献】
  1 国家药典委员会.中国药典（一部）.北京:化学工业出版社,2005，211.

2 徐群英，应佳.高效液相色谱法测定气管炎片中黄芩苷含量.中国药业，2008，7（3）：23.

3 赵向阳,沈静,刘峰,等.HPLC法测定复方半枝莲胶囊中野黄芩苷含量.安徽医药, 2005,9（5）:348.

4 左宏笛，鲍家科，茅向军.HPLC法测定功劳去火胶囊中黄芩苷的含量.贵阳中医学院学报，2008，30（1）：79.

作者单位：222006 江苏连云港，连云港药品检验所