HPLC法测定脑灵素胶囊中淫羊藿苷的含量

【摘要】  目的 建立HPLC法测定脑灵素胶囊中淫羊藿苷的含量。方法 用Diamonsil C18 （4.6mm×200mm，5μm）色谱柱，流动相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，检测波长：270nm。结果 淫羊藿苷在0.0404～0.504μg范围内与峰面积线性关系好，ｒ=0.99998，平均回收率为98.8%，RSD为1.3%（n=6）。结论 本法测定简便，结果准确，重复性和分离度好，可用于脑灵素胶囊的质量控制。

【关键词】  HPLC

   【Abstract】  Objective  To establish a HPLC method for the determination of icariin in Naolingsu capsules.Method  A Diamonsil C18 column （200mm ×4.6mm, 5μm） was used with a mobile phase of acetonitrile-water（26:74）.The flow rate was 1.0ml/min and the detection wavelength was 270nm. Results  The linear range of icariin was 0.0404～0.504μg（r=0.99998）. The average recovery was 98.8% with RSD1.3%（n=6）.Conclusion  The determination method is simple , accurate and  can be used for the quality control of  Naolingsu capsules.

    【Key words】  HPLC; icariin; Naolingsu capsule ; determination

    脑灵素胶囊为《卫生部药品标准中药成方制剂第八册》收载的品种［1］，由黄精、淫羊藿、五味子等十五味中药组成，具有补气血、健脑安神等功效。用于治疗神经衰弱，健忘失眠，头晕心悸，身倦无力，体虚自汗，阳痿遗精等症。原标准中无含量测定方法，方中淫羊藿为主要药味,其有效成分为淫羊藿苷。为能有效地控制药品质量，本研究用HPLC测定淫羊藿苷，建立质量控制标准。

    1  仪器与试药

    Shimadzu HPLC色谱仪（LC-20A Liquid Chromatograph, SIL-20A Auto Sampler,  SPD-M20A Diode Array Detector, CTO-10AS VP Column Oven）LC Solution 色谱工作站。水为Ⅰ级纯化水，乙腈为色谱纯，其他为分析纯。淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：110737-200312）;脑灵素胶囊：吉林百姓堂药业有限公司（批号：20050702，M平=0.3513g；批号：20060803，M平=0.3622g；批号：20061102，M平=0.3557g；规格：0.35g/粒）.

    2  试验方法与结果

    2.1  色谱条件  色谱柱：Diamonsil C18 柱（4.6mm×200mm，5μm），柱温：35℃，流动相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，检测波长：270nm。

    2.2  溶液的制备

    2.2.1  对照品溶液的制备  精密称取淫羊藿苷对照品10.09mg，加50%甲醇制成每1ml含淫羊藿苷20.18μg的溶液，备用。

    2.2.2  供试品溶液的制备  取本品10粒，混匀，取2g，精密称定，置锥形瓶中，加50%甲醇50.00ml，称重，超声处理（功率250W，频率33kHz）40min，放冷，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液。

    2.2.3  阴性对照溶液的制备  取缺淫羊藿的处方，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

    2.3  系统适用性试验  分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液进样10μl，色谱图见图1。淫羊藿苷峰保留时间为21.333min，阴性对照色谱图在淫羊藿苷峰位置无干扰峰，与其他组分分离完全，分离度为1.7，理论板数以淫羊藿苷峰计算为6239。

    图1  HPLC色谱图

    2.4  线性关系考察  精密吸取对照品溶液2、5、10、20、25μl，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，进行线性回归，得方程：

    Y=-4.95×103+2.23×106X，ｒ=0.99998，线性范围为0.0404～0.504μg。

    2.5  精密度试验  取对照品溶液连续进样7次，每次10μl，峰面积积分值RSD=0.3%

    2.6  重复性试验  取同一批号（20050702）样品6份，按供试品液制备方法制备，依法测定，结果淫羊藿苷含量RSD=1.2%，表明本法重复性好。

    2.7  稳定性试验  取同一样品溶液（20050702）在0、6、12、24h分别进样10μl，依法测定，淫羊藿苷峰面积RSD=1.3%，表明样品溶液在24h内稳定。

    2.8  加样回收试验  取已知含量的样品（20050702），精密加入淫羊藿苷对照品适量，按样品测定方法测定含量，计算回收率，结果见表1。表1  回收率试验结果

    2.9  样品测定  取3批样品，按2.2.2项下方法制备样品溶液，依法测定淫羊藿苷的含量，结果见表2。表2  3批样品含量测定结果

    3  讨论

    3.1  考察流动相中乙腈对淫羊藿苷保留时间和分离度的影响。曾采用抗骨增生胶囊中测定淫羊藿苷的流动相乙腈-水（30：70）［2］，乙腈-水（28：72）、乙腈-水（27：73），结果表明乙腈量增大，保留时间提前，但分离效果差，与杂质峰无法分离，以乙腈-水（26：74）较合适。

    3.2  在提取方法中，利用黄酮类化合物与聚酰胺柱有亲和力，先水洗洗去杂质，再醇洗得淫羊藿苷类的方法，可除去大部分杂质峰，但某些保留时间与淫羊藿苷接近、影响分离度的关键峰不能除去；同样，碱水提取后酸化，用正丁醇萃取，还是不能解决这个问题。而且操作步骤增加，影响含量的精确性［3］。

    3.3  在实验过程中，曾采用稀乙醇［2］、70%乙醇、50%甲醇、甲醇为提取溶剂，超声处理（功率250W，频率33kHz）30min、40min、50min、60min［4］，滤过，取滤液，结果表明超声40min、50min、60min含量几乎无变化，且用50%甲醇测得含量最高，故选用50%甲醇超声40min。

【参考文献】
  1 卫生部药品标准.中药成方制剂第八册.144.

2 国家药典委员会.中国药典一部.北京：化学工业出版社，2005，470.

3 洪行球,黄燕芬.HPLC测定乳腺康颗粒剂中淫羊藿苷的含量.中成药,2004,26（2）:165-167.

4 刘莲英，郭耀武.HPLC法测定益肾灵胶囊中淫羊藿苷的含量.中国药品标准,2004,5（1）:42-43.

作者单位：417000 湖南娄底,娄底市药检所