HPLC法测定金青含片中绿原酸的含量

【摘要】  目的 建立HPLC法测定金青含片中绿原酸含量的方法。方法 流速：1ml/min，采用C18柱（250mm×4.6mm ,5μm），流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（10：90），检测波长：327mn。结果 绿原酸在0.08～0.8μg范围内线性关系良好，平均回收率为98.83%， RSD=0.21%（n=5）。结论 此法操作简便准确，重复性好，可作为金青含片质量控制方法之一。

【关键词】  金青含片；绿原酸；高效液相色谱法

【Abstract】  Objective  To establish a HPLC method for the determination of the contents of chlorogenic acid in Jinqing buccal tablet.Methods  A C18 column（4.6×250mm ,5μm） was used with the mobile phase of acetonitrile-0.4%phosphoric acid solution（10:90）. The flow rate was 1ml/min and the detection wavelength was set at 327nm.Results  The liner range of  chlorogenic acid was 0.08～0.8ug.The average recovery was 98.83% with RSD 0.21%（n=5）.Conclusions  This method is simple, accurate and reproducible, and can be used to control the quality of Jinqing buccal tablet.

    【Key words】  Jinqing buccal tablet; chlorogenic acid;HPLC

    金青含片由金银花、青果、甘草等中药经提取、精制而成，具有清热解毒、清咽润喉作用。药理研究表明，金银花具有抗病毒、解热、抗炎、止血等作用［1］，用于痈肿疔疮、喉痹等症，为方中之要药。而金银花中主要成分是绿原酸，具有解热抗炎作用［2］，因此本文采用HPLC法对方中金银花的有效成分绿原酸进行含量测定分析，来达到控制产品质量的目的。

    1  仪器与试药

    Agilent1100高效液相色谱仪，Agilent G1314A紫外检测器。乙腈、甲醇为色谱纯；磷酸为分析纯；水为二次重蒸水；绿原酸对照品（中国药品生物检定所，批号：110753-200412 ）；金青含片（国家中成药工程技术研究中心，批号：20080301，200870401，20080402，20080403，20080404，20080405）。

    2  色谱条件

    色谱柱：C18柱（250mm ×4.6mm ,5μm，北京迪马）；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（10：90）；检测波长选择：绿原酸对照品在200～400nm进行UV扫描，结果在327nm处有最大吸收，故选择检测波长为327nm；流速：1ml/min，柱温：40℃。检测波长和流速与文献［3］报道相吻合。

    3  方法与结果

    3．1  对照品溶液的制备［4］  精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥24h的绿原酸对照品10.01mg，置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，制成40μg/ml的对照品溶液。

    3．2  样品溶液的制备  取不同批号的金青含片样品各10片，研细，精密称定3.0g，置具塞锥形瓶中，准确加入50%甲醇50ml，密塞，称重，超声处理（功率250W,频率35kHz）30min，放冷，称重定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加入50%甲醇至刻度，摇匀，滤液即为样品溶液。其色谱图见图1。

    3．3  线性范围考察  分别精密吸取上述对照品溶液2、5、10、15、20μl进样， 测定相应色谱峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=4071.9X+46.259，r=0.9995，绿原酸在0.08～0.8μg范围内线性关系良好。

    图1  样品（A）和对照品（B）HPLC色谱图

    3．4  精密度试验     分别精密吸取同一批号样品溶液5份，各10μl进样，测定色谱峰面积，其RSD为1.25%（n=5）。

    3．5  重复性试验  取同批次（批号20080301 ）供试品溶液5份，照“样品含量测定”方法进样，测定色谱峰面积，其RSD为1.12%。

    3．6  回收率试验  取同批次金青含片样品5份（批号20080301 ，含量2.36mg/g，0.5g/片），每份各5片，研细，精密称定1.5g，精密加入绿原酸对照品 （ 1.4161mg/ml）2.5ml，照“样品含量测定”项下方法进样测定，结果见表1。表1  绿原酸收率试验测定结果  

    3．7  样品含量测定  分别精密吸取对照品溶液与各批次供试品溶液各10μl进样，按选定的色谱条件，测定经绿原酸的含量见表2。本品每片含金银花以绿原酸计，不得少于0.92mg。表2  样品测定结果 由于以上批次样品所采用的原料药材批次不同，造成了成品的含量相差甚远，因此建议在药材投料前，应严格控制药材质量。

    4  讨论

    金银花性味甘寒,具有清热解毒、凉散风热之功［4］,为金青含片中主药。绿原酸具有抗菌、抗病毒的生物活性,是本方主药金银花中的有效成分［5］,因此选择测定金银花中的绿原酸作为含量测定指标,可以反映和控制金青含片的内在质量。

    本制剂绿原酸含量测定流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液（10：90），与文献报道［6］一致。在此条件下，绿原酸峰形及分离度均好。

    本方法经方法学考察，证明简便易行，结果准确，重现性好，绿原酸的含量测定方法可作为金青含片的质量控制方法。

【参考文献】
  1 梁生旺，崔永霞，王淑美，等.金银花的HPLC药效指纹图谱研究.中草药，2006，37（10）：1489-1493.

2 刘恩荔，李青山.大孔吸附树脂分离纯化金银花中总有机酸的研究 .中草药，2006，37（12）：1972-1976.

3 陈晓颖，郭文婷，宋粉云.HPLC法测定菌毒清颗粒中绿原酸的含量.中药材, 2008,31（4）：613-614.

4 国家药典委员会.中国药典,2005年版一部.北京：化学工业出版社，2005.

5 程璐,徐宏峰,张耕.高效液相色谱法测定咽舒饮合剂中绿原酸的含量. 医药导报,2009,128（1）：105-107.

6 王海宁. HPLC测定感冒咳嗽颗粒中绿原酸的含量. 首都医药, 2008,8：49-50.

（编辑：汪 洋）

作者单位：1 117004 辽宁本溪,国家中成药工程技术研究中心 2 117004 辽宁本溪，辽宁本溪三药有限公司