荧光MGB探针在Leber遗传性视神经病变mtDNA G11778A基因突变检测中的应用

2006年11月01日 中华眼科杂志 2006 Vol.42 No.8 P.728-732 6 （杭州）为了建立一套快速、准确、简便筛查Leber遗传性视神经病变(LHON)mtDNA G11778A基因突变的新方法，并初步判断其异质性个体中野生和突变比例。研究者 采用荧光MGB探针实时聚合酶链反应(PCR)技术，在同一个反应体系中引入野生和突变型两种探针，应用多荧光通道PCR仪分别检测LHON家系中20例患者血样和17例正常人血样，将检测结果与核酸序列测定结果比较。结果 正常人血样检测结果：荧光PCR技术检测VIC通道均为阳性，FAM通道均为阴性，判断为LHON mtDNA野生型，与测序结果完全吻合；临床LHON患者及家系成员测序结果：LHON mtDNA变异型患者12例，荧光PCR技术检测均为LHON mtDNA变异阳性，其中为LHON mtDNA变异株和野生株混合的5例，混合型中变异株与野生株Ct值均大于25%；测序结果显示LHON mtDNA野生型8例，荧光PCR技术检测LHON mtDNA野生型为5例，LHON mtDNA变异株和野生株混合型3例，其中变异株与野生株Ct值均小于25%；荧光定量PCR技术检测LHON mtDNA G11778A基因突变耗时仅为80 min，远短于测序时间。可见 荧光MGB探针实时PCR技术能简便、快速、准确地检测LHONmtDNA G11778A基因突变，判断个体异质性中野生和突变比例，对进一步探讨LHON患者是否存在mtDNA基因突变阈值有重要价值。