高效液相色谱法测定阿魏酸哌嗪片的含量

摘要： 采用高效液相色谱法测定阿魏酸哌嗪片的含量。Shim-VP ODS为色谱柱，水-甲醇(60：40)为流动相，检测波长310nm。线性范围1.5～12.0μg/ml，r=0.9992，平均回收率99.28％ ，RSD=1.30％(n=9)。方法简便，结果准确可靠。
关键词： 阿魏酸哌嗪；高效液相色谱法；含量测定
阿魏酸哌嗪片为海南林恒药业有限公司生产的抗凝血药，原名保肾康。其含量测定方法原为紫外分光光度法，本文采用高效液相色谱法测定阿魏酸哌嗪片的含量，方法简便，重现性好，专属性强，结果准确可靠。
1 仪器与试药
Waters515高效液相色谱仪，2996二极管阵列检测器，Waters Empoer工作站。
阿魏酸哌嗪对照品(海南林恒药业有限公司，含量为99.2％)；阿魏酸哌嗪片(规格50mg，海南林恒药业有限公司)；辅料为药用辅料； 甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱：Shim—VP ODS(150mm×4.6mm，5μm)，流动相：水-甲醇(60：40 )，检测波长：310nm，流速：lml/min，进样量：20μl，柱温：室温。
2．2 供试品、对照品溶液的制备
取本品10片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于阿魏酸哌嗪30mg)，置1Oml量瓶中，加水适量，超声使溶解，用水稀释至刻度，
摇匀。过滤，精密量取续滤液2ml，置另一1Oml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取阿魏酸哌嗪对照品约30mg，置1Oml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2ml，置另一100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2．3 专属性试验
2．3．1 辅料干扰试验
取对照品溶液、阿魏酸哌嗪片溶液及按处方量称取的各辅料适量，照上述色谱条件测定，记录色谱图。结果表明，处方中各辅料对测定无干扰。
2．3．2 氧化破坏试验
称取本品细粉适量(约相当于阿魏酸哌嗪lOmg)，置20ml量瓶中，加人3％过氧化氢溶液10ml，室温放置6小时后，加水至刻度，摇匀，过滤，进样20μl，照上述色谱条件检测，记录色谱图。结果表明，主成分可与生成的分解产物完全分离。
2．3．3 强光照射破坏试验
取置强光下照射16小时的细粉约20mg，置20ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，进样20μl，照上述色谱条件检测，记录色谱图。结果表明，主成分可与生成的分解产物完全分离。
2．4 线性关系考察
精密称取阿魏酸哌嗪对照品约30mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml，分别置于5个100ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。分别进样20μl，以阿魏酸哌嗪的浓度(μg/ml )为横坐标(X)，以阿魏酸哌嗪的峰面积为纵坐标(Y)，求得回归方程为：Y=5.31×1000X+1.86×1000，r=0.9992。结果表明，当进样量为20μl，阿魏酸哌嗪、在1.5～12.0μg/ml 浓度范围内线性关系良好。
2．5 精密度试验
取对照品溶液，在同一色谱条件下，连续进样6次，结果阿魏酸哌嗪峰面积的RSD为0.36％，表明精密度良好。
2．6 回收率试验
按处方量称取各辅料适量，分别加入处方量80％、100％、120％的阿魏酸哌嗪对照品，用水溶解并稀释成线性范围内高、中、低三种浓度的供试液，各三份，按含量测定方法测定，并计算回收率。
2．7 重复性试验
称取同一批(批号2003O902)样品的细粉适量，共取6份，每份约相当于阿魏酸哌嗪30mg，按含量测定方法测定含量，测得平均含量为99．8％ ，
RSD为0．9％。
2．8 溶液稳定性考察
取供试品溶液，室温放置0、2、4、6、8小时，在上述色谱条件下分别进样20 ，结果阿魏酸哌嗪峰面积的RSD为0.53％ ，表明供试品溶液在8小时内稳定。
2．9 样品测定结果
对6批阿魏酸哌嗪片分别进行含量测定。
3 讨论
阿魏酸哌嗪水溶液在310nm波长处有最大吸收，阿魏酸哌嗪片原质量标准WS-10001-(HD-0004)-2002采用紫外分光光度法，在310nm波长测定吸收度进行含量测定，故本法选用310nm作为测定波长，水-甲醇(60：40)为流动相，可较好地分离阿魏酸哌嗪与杂质。实验结果表明，对本品进行氧化、强光照射破坏后，所产生的分解产物在测定的波长下有吸收，影响UV法测定含量的结果。采用HPLC法，可将分解产物完全分离，方法专属性强，结果准确。所以，应该用HPLC法替代UV法测定阿魏酸哌嗪片
的含量。
参考文献：
[1] 国家药品标准(国家药品监督管理局)[S]．WS-10001-(HD-0O03)-2002