党参中党参炔苷HPLC分析

                          党参中党参炔苷HPLC分析
 [发布时间： 2005年12月19日 作者：贺庆，朱恩圆，王峥涛，徐珞珊，胡之璧 浏览次数： 433] 
摘要：目的:分析不同种与不同产地的党参中党参炔苷的含量，为党参的质量标准建立提供参考。方法:采用高效液相色谱分析，MetaChem RP-18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，以乙腈-水(22：78)为流动相，检测波长267nm。结果:测定了11批不同种与不同产地的党参中党参炔苷的含量，含量范围为0.035～1.314mg/g．结论:本方法简便、快捷、可靠，可用于党参的质量评价.
关键词：党参炔苷；高效液相色谱法；党参
    党参为常用中药，味甘性平，具有补中益气，健脾益肺之功能，用于治疗脾肺虚弱，气短心悸，食少便溏，虚喘咳嗽，内热消渴等症，并常作为人参的替代品：中罔药典2000版一部收载有党参Codonopsis pilosula(Franch．) Nannf．、素花党参Codonopsis．pilosula Nannf．var．modesta(Nannf．)L．T．Shen或川党参Codon,opsis tangshen Olive 3种。根据文献报道，党参中主要有三萜、甾类、聚乙炔醇、酚酸、木脂素、倍半萜、黄酮等多种化学成分。以往对党参的质量控制研究报道很多，但至今尚无统一规范的质量控制方法，中国药典中也没有关于党参的理化鉴别和含量测定的指标 为了确保党参合理有效地应用，使党参的质量标准评价有具体的量化指标，我们在党参化学成分系统研究的基础上，以党参炔苷(1obetyolin)作为指标性成分对党参进行定性鉴别和含量测定。
    1 仪器与材料
    1．1 供试药材
    党参药材均由王峥涛教授鉴定。
    1．2 仪器
    美国Agilent 1100色谱系统；SB2200超声清洗机(SHANGHAI BRANSON)；超纯水制备仪(Pall公司)；电子分析天平(METFIER AE200)。
    1．3 试剂
    党参炔苷(1obetyolin)对照品(自制，经高效液相色谱分析，纯度≥98％)，乙腈为色谱纯(Siena公司)；甲醇为分析纯：
    2 色谱条件
    色谱柱：MetaChem RP-18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-水(22：78)；流速：lmL/min；检测波长：267 nm；进样量：l0μL。
    3 实验方法
    3．1 提取条件确定
    以甲醇为溶剂，分别考察了超声、水浴回流提取、索式提取、冷浸过夜等多种提取方法，结果表明，以甲醇水浴回流提取最完全；且提取30与60min并无著差异，因此选择水浴回流提取30min：
    3．2 检测波长选择
    党参炔苷在241，253，267，283nm处均有最大吸收，经实验比较，选择267nm为检测波长，经检测党参炔苷在此波长处有良好的吸收值。
    3．3 供试品溶液的制备
    取本品粉末lg(过三号筛)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，水浴回流提取30min，放冷。称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液。精密量取续滤液25mL，减压回收溶剂至干，以甲醇溶解并定量转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液．即得。
    3．4 方法学考察
    3．4．1 线性关系和线性范围实验 取党参炔苷对照品25mg，精密称定，以甲醇稀释至25mL量瓶中，摇匀，精密吸取该溶液适量，分别制成1．6，8，40，200，l000μg/ml的溶液。将上述对照品溶液进样，进样量l0μL，以对照品的进样量对峰面积积分值进行回归，得回归方程为Y=16.482X一3.5537，r=1.000 0，党参炔苷在0.016～10μg范围内呈良好的线性关系。
    3．4．2 精密度实验 取浓度为200μg/mL的对照品溶液，进样量l0μL，连续进样6次，计算党参炔苷峰面积的RSD小于3％。
    3．4．3 稳定性实验 取l号党参粉末lg，精密称定，按“3．3”项下的方法制备，得供试品溶液，室温放置，分别在0，2，4，8，l2，24h进样测定，计算。党参炔苷峰面积RSD小于3％。结果表明，样品中的党参炔苷在24 h内基本稳定。
    3．4．4 重复性实验 取l号党参粉末6份，各lg，精密称定，按“3．3”项下的方法制备，得供试品溶液，进行测定，按峰面积与取样量的比值计算，RSD小于3％。
    3．4．5 加样回收实验 取l号党参粉末5份，各lg，精密称定，分别精密加入一定量的党参炔苷对照品，按“3．3”项下的方法制备，得供试品溶液，进行测定，平均回收率为99.4l％，RSD为2.6％：
    4 结 果
    按所建立的方法，对l1批次商品党参药材进行测定，结果表明，党参中党参炔苷的含量在0.035～1.314mg/g。
    5 讨论
    5．1 以往评价党参质量主要以其含糖量来衡量，“味甜者佳”，也有用比色法测定党参类药材中单糖和多糖含量的，但该方法重现性不佳，亦缺乏专属性；另外，也有研究报道以薄层扫描法测定党参中甾类或三萜类成分的方法，有关于党参中的党参苷I的含量研究，目前还主要集中于山西所产的党参。我们通过薄层色谱实验，在与党参常用配伍的中药(黄芪，白术，茯苓，甘草，麦冬，五味子)中均未检视到党参炔苷。根据HPLC实验结果，在中国药典收载的三种党参中均检视到党参炔苷，因此，以党参炔苷作为评估党参药材质量的成分具有很好的专属性和特征性。
    5．2 文献报道党参提取物具有抗溃疡活性，我们初步的药理学研究证明，党参炔苷对乙醇造成的胃黏膜损伤有很好的保护作用，与党参的补中益气的传统功效相符，为党参胃黏膜保护作用的活性成分(另文发表)，可作为活性成分对党参进行质量控制。
    5．3 我们在分析含量测定结果时发现，党参中党参炔苷的含量高于素花党参和川党参这两个品种；另外，在对比不同产地党参药材中党参炔苷含量时发现，山西产党参中党参炔苷含晕远高于其它产地产党参，这传统认为山西为党参道地产区，质量佳的看法相一致。因此，党参炔苷可作为研究党参道地性、制定GAP规范等研究的一个重要参考指标。
参考文献
[1] Wang，Xu GJ，Hattori M，et al Constituents of the root of Codono1)sis pilosula[J]．生药学杂志(日)，1998，42(4)：339．
[2] 朱恩圆，甥庆．王峥涛，等．党参化学成分研究[J]．中国药科大学学报，2001，32(2)：94
[3] He Q，Zhu EY，Wang ZT.et a1．Flavones isolated from Codonopsis xnndianensis[J]．J Chin Pharm Sci ，2004：13(3)：212．