HPLC法测定泛昔洛韦含量

摘要　目的：用高效液相色谱法测定泛昔洛韦。方法：在ODS柱上，以磷酸盐缓冲液(0.02 mol^．L^-1磷酸二氢钾1 000 mL，加三乙胺3 mL，用85%磷酸调节至pH 2.5)-甲醇(65∶35)为流动相，于220 nm波长处检测，流速为1.0 mL^．min^-1；利巴韦林为内标，泛昔洛韦与内标的保留时间分别为4.90 min和2.77 min。结果：浓度线性范围为0.01～0.08 mg^．mL^-1，重复性试验RSD=1.0%(n=5)。结论：本法含量测定结果满意。
关键词　泛昔洛韦　HPLC法

Determination of Famiciclovir by HPLC

Chen Jue
(Zhe jiang Institute for Drug Control,Hangzhou　310004)

Abstract　Objective：To esteblish the determination of the content of Famciclovir by HPLC.Method:The chromatographic condition were:ultrashere C₁₈ 5 μm(4.6 mm×250 mm);phosphate buffer(0.02 mol^．L^-1 potassium.dihydrogen phosphate solution 1000 mL add triethylamin 3 mL,adjusted with 85% phosphoric acid to pH 2.5)—methanol(65∶35)as mobile phase;ribavirin as internal sandardl;flow rate was 1.0 mL^．min^-1,wavelength of the detector was 220 nm.Results:The retention time of Famciclovir and internal standard were 4.90 min and 2.77 min respectively.The linear range of calibration curve was 0.01～0.08 mg^．mL^-1(r=1.0000).Conclusion:This method is suitable to determine Famciclovir.
Key words　HPLC　Famciclovir

　　泛昔洛韦(Famcilovir)是一种新的嘌呤类抗病毒药，临床上用于单纯性疱疹的治疗。国外最新研究表明，其口服吸收迅速，生物利用度为77%^［1］。在我国，该药已被研制成功，其含量测定方法尚未见报道。本文探索用HPLC法进行含量测定，在ODS柱上以利巴韦林为内标，考察了色谱条件和定量的线性范围，对样品进行了含量测定，结果表明，本法简便、快速，结果准确。

1　仪器及药品

　　Beckman 125高效液相色谱仪，166紫外检测器，System Gold软件。
　　泛昔洛韦对照品(含量99.8%)、原料由浙江海正药业公司提供，利巴韦林对照品由浙北制药厂提供。
　　甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾、三乙胺均为分析纯，水为重蒸馏水。

2　色谱条件

　　色谱柱Ultrashere ODS柱(5 μm,4.6 mm×250 mm)，Beckman公司；流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(0.02 mol*L^-1磷酸二氢钾1 000 mL，加三乙胺3 mL,用85%磷酸调节至pH 2.5)(35∶65)；流速1.0 mL*min^-1；检测波长220 nm；进样量：20 μL。
　　在上述色谱条件下，泛昔洛韦及内标的色谱图见图1。

3　溶液的配制

3.1　内标溶液　称取利巴韦林适量，加流动相制成0.2 mg*mL^-1的溶液。
3.2　对照品溶液　精密称取60 ℃减压干燥至恒重的泛昔洛韦对照品20 mg，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度。

4　测定结果

4.1　线性关系　精密量取对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，分别置20 mL量瓶中，精密加入内标溶液2.0 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，进样测定。结果表明：泛昔洛韦在0.01～0.08 mg*mL^-1范围内，以泛昔洛韦对照品与内标的峰面积比为纵坐标，浓度(mg*mL^-1)为横坐标，泛昔洛韦线性方程为：
Y=6.472 6X+0.009 8　r=1.000 0
线性关系良好。

图1　泛昔洛韦及内标色谱图
1.利巴韦林(内标)　2.泛昔洛韦　3.杂质

4.2　精密度试验　精密量取对照品溶液4.0 mL与内标溶液2.0 mL，加流动相稀释至20 mL，重复进样5次，对照品和内标峰面积比的RSD为1.0%(n=5)。
4.3　最低检测浓度　信噪比为3∶1时，最低检测浓度为0.07 μg*mL^-1。
4.4　样品测定
　　按“2.1”项的色谱条件，理论板数按泛昔洛韦峰计算应不低于1 500，泛昔洛韦与内标峰的分离度应符合要求。
　　精密称取原料药适量，制成0.2 mg*mL^-1的溶液，精密量取4.0 mL，加内标溶液2.0 mL，加流动相稀释至20 mL，以“4.2”项下溶液为对照品溶液，按内标法计算，即得。结果测定样品3批，含量分别为99.85%，100.2%，100.1%，(n=3)。

5　讨论

5.1　缓冲液对色谱的影响　随着缓冲液pH增大，泛昔洛韦保留时间延长，故选用pH 2.5。由于本品极性较大，易被色谱柱中的活性硅醇基强吸附，致使色谱峰拖尾，故加入扫尾剂三乙胺以改善峰形。
5.2　甲醇对色谱保留值的影响　随着流动相中甲醇量增大，泛昔洛韦的保留时间减小，但利巴韦林峰的保留时间变化不大，故选择甲醇量35%，2者有较好的分离度。
5.3　稳定性试验　样品溶液稳定性试验表明，24 h内测定，峰面积比的RSD未超过1.0%。随着样品溶液放置天数增加，t_R 3.5 min的杂质峰略增大，这是由于本品结构中含双酯结构，样品溶液久置后样品水解，杂质峰增大。

陈珏（浙江省药品检验所　杭州　310004）

参考文献

1，Martindale.The Extra Pharmacopoeia.31 ed.London Royal Pharmaceutical Society,1996.648

(本文于1999年4月9日收到)