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摘要 目的:建立人血浆中奥美拉唑(OME)浓度的HPLC测定方法。方法:以格列哔嗪为内标,乙腈∶磷酸盐缓冲液(0.02
mol.L-1磷酸二氢钾,pH3.5)(30:70)为流动相,检测波长302
nm。结果:OME与内标分离良好,血浆中平均回收率为106.17%,日内、日间RSD小于10%,浓度在20~4000
ng.ml-1范围内线性关系良好。结论:本法灵敏度高,专一性强,血样提取简便,适于临床血药浓度监测的要求。
关键词 奥美拉唑;HPLC法
中图分类号:R917 文献标识码:B
文章编号:1006-0103(2000)03-0209-02
奥美拉唑(omeprazole,OME)是一种高效抑制胃酸分泌药物。现建立了反相HPLC法测定人血浆中的OME浓度的方法。
1 材料与方法
1.1 仪器、药品与试剂
美国Waters公司HPLC系统,包括510泵,484紫外检测器,TC9300色谱数据工作站,U6K进样阀;高速离心机(北京医疗设备厂);液体快速混合器(江西医疗器械厂)。OME对照品(扬州制药厂);格列哔嗪对照品(GB,北京四环制药厂);市售奥美拉唑注射剂(瑞典Astra公司,商品名洛赛克,批号199805,每支40
mg)。乙腈(色谱纯,Fisher
Chemicals);磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、甲醇、二乙胺、叔丁基甲醚等均为分析纯;正常人空白血浆(307医院血站)。
1.2 实验方法
1.2.1
色谱条件 色谱柱为美国Waters μ Bondapak ODS柱(10 μm,3.9 mm×150
mm)。流动相为乙腈∶磷酸盐缓冲液(0.02mol.L-1磷酸二氢钾,pH3.5)(30∶70)。流速为1.0
ml.min-1,灵敏度为AUFS0.01,检测波长302
nm,柱温25℃。
1.2.2 对照溶液及内标液的配制 分别精取OME和GB标准品各5 mg,用甲醇溶解,使成浓度为1
mg.ml-1的标准贮备液,置-20℃冰箱冷冻备用。另取GB标准贮备液(1
mg.ml-1)用水稀释成40 μg.ml-1作为内标液,置4℃冰箱冷藏备用。
1.2.3 血浆样品的提取与测定 精取血样1 ml于10
ml试管中,加内标液100 μl,摇匀后加磷酸二氢钠缓冲液(pH=7)600 μl,摇匀,加提取液叔丁基甲醚3 ml,旋涡混合1 min,离心10
min(3 000r.min-1),取有机相于尖底刻度试管中,于37℃水浴中氮气流吹干。加入50~200
μl流动相富集,进样2~10 μl。测得OME与内标峰高之比,根据标准曲线方程计算血浆中OME浓度。色谱图见图1。
图1 空白血浆(A)与样本血浆(B)色谱图
奥美拉唑tR=4.333min,内标tR=6.909min
2 结果
2.1 标准曲线的制备
精取OME标准贮备液(1
mg.ml-1),分别加水稀释至浓度为1000 ng.ml-1和100
μg.ml-1的对照溶液A和B。另取10 ml试管,分别加入A液20、60、100、200、400
μl,B液6、10、15、20、40 μl及空白血浆1
ml,使其终浓度分别为20、60、100、200、400、600、1000、1500、2000、4000
ng.ml-1,按血浆样品相同方法提取与进样分析。求出OME与内标峰高比(R)对OME浓度(C)的回归方程。结果表明,OME血浆浓度在20~4000
ng.ml-1范围内线性关系良好,标准曲线方程为
C=203R+7.88,r=0.9987(n=10)。 2.2 回收率和精密度 表1 OME回收率试验(n=5) |
加入量 ng.ml-1 |
测得量/ng.ml-1 | 回收率/% (±s) |
RSD/% |
2000 | 2346.44 | 117.32±7.66 | 6.53 |
600 | 641.24 | 106.87±9.19 | 8.60 |
60 | 56.60 | 94.33±12.50 | 13.25 |
2.2.2 精密度 按上法配制浓度为60、600、2000ng.ml-1的血浆样品,于1日内不同时间及连续5日内测定,求得日内、日间回收率、RSD(%),结果见表2。
表2 OME日内、日间精密度结果(n=5) |
加标量 ng.ml |
日 内 | 日 间 | ||||
测定量 | 平均回收率/% | RSD/% | 测定量 | 平均回收率/% | RSD/% | |
2000 | 2135.88 | 106.79 | 3.74 | 2128.70 | 106.44 | 8.91 |
600 | 649.28 | 108.21 | 8.90 | 641.24 | 106.87 | 5.60 |
60 | 54.87 | 91.45 | 9.07 | 55.60 | 92.67 | 9.75 |
3 讨论
3.1 现建立了HPLC法测定OME血浆药物浓度,方法简便、灵敏度高,最低检测浓度可达20
ng.ml-1,每次测定需血样0.5~1
ml,适用于药代动力学及血药浓度监测的需要。 作者简介:刘丽萍(1963-),女,副主任药师,从事医院药学、临床药学工作。 参考文献 1,邓子煜,李雪宁,陈秋潮.HPLC测定奥美拉唑血药浓度[J],中国药学杂志,1996,31(10)∶608 收稿日期:1999-08 |