HPLC法测定风湿液中蛇床子素的含量

　　摘要　目的：用高效液相色谱法测定风湿液中蛇床子素的含量。方法：固定相为ODS柱，流动相为甲醇-0.1 mol^.L^-1硫酸铵水溶液(65∶37),用硫酸溶液(1→5)调节pH为2.50；检测波长为322 nm。结果：回收率为101.1%，RSD为3.0%。结论：该法能使干扰峰与蛇床子素峰完全分离。
　　关键词　蛇床子素；高效液相色谱法；风湿液
　　中图分类号：R927.2　　文献标识码：A　　
文章编号：1006-0103（2000）03-0203-02

DETERMINATION OF OSTHOL IN FENGSHI ORAL LIQUID BY HPLC

LI Li
（Fuyang Pharmaceutical Factory of Anhui Province， Fuyang 236018 China）
DING Gang
（Fuyang Pharmaceutical Factory of Anhui Province， Fuyang 236018 China）
WU Ju-hui
（Fuyang Pharmaceutical Factory of Anhui Province， Fuyang 236018 China）
QIAN Guang-sheng
　（School of Pharmacy, West China University of Medical Sciences， Chengdu 610041 China）
LIU San-kang

（School of Pharmacy, West China University of Medical Sciences， Chengdu 610041 China）

　　Abstract OBJECTIVE：HPLC was used to determinate osthol in Fengshi Oral Liquid. METHODS：ODS column as stationary phase, CH₃OH-0.1mol*L^-1（NH₄）₂SO₄ （65∶37），adjust pH to 2.50 by sulphuric acid solution (1→5) as mobile phase,322 nm as detective wavelength. RESULTS： The recovery of osthol was 101.10%, and RSD was 3.0%. CONCLUSION： The peaks of osthol and interference were separated completely.
　　Key words　Osthol; HPLC; Fengshi oral liquid

　　风湿液是由独活、鹿角胶、鳖甲胶、红花等中药经提取而成的中药口服液，君药为独活。独活的主要成份为独活内酯、香柠檬内酯、蛇床子素等^［1］，对于独活的测定，一般采用气相色谱法或HPLC法测定其中蛇床子素等含量^［2,3］。由于风湿液系口服液，处方复杂，文献报道的HPLC法的流动相，在成份分离时有杂质峰与蛇床子素峰形成难分离对。本文建立的高效液相色谱条件，则使干扰峰与蛇床子素峰完全分离，方法简便、准确、重现性较好。

1　实验部分

1.1　仪器与试药　日本岛津LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外检测器，C-R4A数据处理机。水为双重蒸馏水；其它试剂皆为分析纯。蛇床子素对照品（中国药品生物制品检定所），风湿液（市售品）。
1.2　色谱条件　色谱柱为Shimpack CLC-ODS（150 mm×6 mm id，5μm）；保护柱为国产YWGC₁₈（10 mm×4.6 mm id，10μm）；流动相为甲醇-0.1 mol^．ml^-1硫酸铵水溶液(65∶37),用硫酸溶液(1→5)调节pH为2.50；柱温为35℃，检测波长322 nm，理论板数以蛇床子素计算不低于9000。
1.3　对照品溶液的制备　取蛇床子素对照品适量，精密称定，加乙醇使溶解并制成每1 ml含0.025 mg蛇床子素的溶液，作为对照品溶液。
1.4　供试品溶液的制备　精取风湿液25.00 ml，置分液漏斗中，加乙醇2 ml，乙醚20 ml，振摇提取，静置，待分层后，分出乙醚层，连续提取三次，合并乙醚提取液，置60℃水浴上挥去乙醚，残留物加乙醇溶解，定容成10.00 ml，离心，上清液作为供试液。
1.5　供试品测定　精取对照品溶液及供试品溶液各10 μl，注入色谱仪，按外标法计算，五批结果分别为：0.996% 、1.142% 、1.024% 、0.902% 、0.856%。

2　方法评价

2.1　对照品线性的考察　精取蛇床子素对照品适量，用乙醇溶解并稀释，分别配制成0.0096、0.0192、0.0288、0.0384、0.0480 mg^．ml^-1，精取上述溶液各10 μl，注入色谱仪，每种浓度溶液进样三次，取其峰面积平均值（Y）与其进样量（μg）进行直线回归，回归方程为Y=-8540+1.27136×10⁶X，r=0.9998，当进样量在0.096～0.48 μg范围时线性关系良好。
2.2　精密度试验　同一供试品于同一日反复测定5次，其峰面积的RSD为0.54%。同一供试品在5个不同日期分别测定3次，其平均含量的RSD为1.89%。
2.3　回收率试验　精取已知量的供试品，准确加入蛇床子素对照品适量，按“1.4”项下的方法操作，测定其含量，求出加样回收率(表1)。

表1　蛇床子素加样回收率测定结果
Table 1　The recovery test of osthol