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度冷丁(哌替啶)是临床上广泛使用的一种麻醉止痛药，一般用于术前镇静和术后镇痛作用。其分析方法多为GC法［1～4］，HPLC测定法国内外报道得很少。本文通过寻找适宜的色谱条件，建立了快速、灵敏、高选择性的HPLC法测定全血中度冷丁的含量并应用于临床病人的测定。病人手术中合用的其它药物不干扰测定，结果满意。
1 仪器
P230高效液相色谱仪，UV230检测器，EC2000工作站。
2 试药与试剂
度冷丁对照品(公安部第二研究所购得)；乙腈：色谱纯；水：二次重蒸水；甲醇：分析纯甲醇重蒸；正己烷：分析纯正己烷经浓硫酸处理后重蒸。其它试剂均为分析纯。
磷酸盐缓冲液的配制：称取磷酸氢二钾2.6 g于1 L水中，用0.9 mol.L-1的磷酸调至pH=7，并通过0.45 μm微孔滤膜过滤。
3 色谱条件
色谱柱：Spherisorb CN(10 μm,4.0 mm×250 mm)柱及CN预处理柱(4.0 mm×20 mm)，大连依利特公司；流动相：乙腈-15 m mol.L-1磷酸盐缓冲液-甲醇(62∶25∶13)；流速：1.0 mL.min-1；检测波长：205 nm。
4 样品处理
准确吸取血样1 mL于10 mL具塞离心试管中，肝素抗凝，加入无水乙醇0.5 mL，1 mol.L-1氢氧化钠(pH=11)100 μL，摇匀。正己烷6 mL萃取2次，每次涡旋振荡6 min，然后离心(3500 r.min-1)2 min，合并正己烷层于10 mL离心管中，70 ℃水浴蒸干。临近蒸干时，用正己烷洗涤管壁2次，每次0.5 mL，使待测物质集中于试管底部。残渣用50 μL流动相溶解，吸取20 μL进样测定。空白血样、加样血样及临床病人血样的提取色谱图见图1。
图1 度冷丁分离色谱图
A.空白血样 B.加样血样 C.临床病人血样
1.度冷丁(8.57 min) 2.杂峰
5 线性关系与检测限
精密称取度冷丁对照品适量，用1 m mol.L-1 磷酸配成1 mg.mL-1的度冷丁储备液，再稀释成0.04 mg.mL-1的工作液。精密吸取不同量的度冷丁工作液分别加到1 mL正常人血中配成系列标准溶液50、100、260、500、1000 ng.mL-1。按样品处理项下处理，进样20 μL测定，以峰高(A)对浓度(C)回归，求得线性回归方程：
C=0.06A+11.8 r=0.9998 n=5
当S/N=2时，检测限为25 ng.mL-1。线性范围为50～1000 ng.mL-1。
6 回收率及精密度
取正常人血1 mL分别加入适量的度冷丁工作液配成不同血药浓度的溶液数份，同法处理测定，连续测定7 d，每个浓度平行测定5次.
7 临床应用
用本法测定9例手术病人(静脉或肌肉注射50 mg度冷丁)血药浓度病人血样测定结果(n=3)
病例取样时间
/min注射方法血药浓度
/ng.mL-1RSD/%
15iv636.22.16
25iv667.23.37
310iv421 2.75
415iv398.73.11
520iv325.42.41
660iv242.52.91
710im114.13.26
815im149.13.53
930im200.7
8 讨论
8.1 用处理后的正己烷和甲醇可大大减少色谱图上的杂质峰，降低检测限。
8.2 临床病人血样的分离色谱图显示度冷丁色谱峰峰形对称，尖锐，分离完全。手术中常合用的其它药物如氯胺酮、芬太尼、琥珀胆碱、利多卡因、普鲁卡因等均、不干扰测定，说明方法灵敏度高，专属性强。