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以V氯仿∶V甲醇∶V二氯甲烷∶V正己烷=2.6∶1.2∶1∶5为展开剂， 建立了薄层色谱扫描法测定痕量药物尼莫地平的新方法。 其Rf值为0.48。 扫描波长为365 nm， 该法的最低检出限为0.005 μg，相对标准偏差为2.94％， 工作曲线的线性范围为0.005～1 μg。 用该法测定了加有尼莫地平的血清和尿样， 尼莫地平的平均回收率为96.7％～103％。
关键词 尼莫地平， 紫外薄层色谱法
尼莫地平(nimodipine)为一钙离子拮抗剂， 能有效地调节细胞内钙的水平， 具有抗缺血和抗血管收缩作用[1]， 是近年来治疗高血压和脑血管疾病的一种新药， 其结构式如右所示。 有关该药的测定方法， 曾报道过的有高效液相色谱法[2]、 分光光度法[3]， 但用紫外薄层色谱扫描法测定尼莫地平至今未见文献报道。 本文首次采用紫外薄层色谱法， 以氯仿－甲醇－二氯甲烷－正己烷为展开剂， 对尼莫地平的测定进行了研究。 该法具有简单、 快速、 灵敏、 准确的特点， 我们成功地做了血清和尿样中不同浓度的加标回收实验， 结果令人满意。 该法可用于临床作为测定尼莫地平血药及尿药浓度的一种简单、 有效的新方法。
1 实验部分
1.1 仪器与材料
CS－9000双波长薄层色谱扫描仪(日本岛津)； 毛细管定量点样器(美国Drummond)； UV－1型紫外分析仪(上海顾村电光分析仪器厂)； 硅胶GF254 板(青岛海洋化工厂)； 尼莫地平(山东新华制药厂提供)。
其它试剂均为分析纯以上规格。
1.2 实验方法
用1 μL定量毛细管点样， 标样与试样点于同一板上; 待溶剂挥发后， 放入盛有展开剂的层析缸中， 用蒸汽预吸附3～5 min， 然后用展开剂展开, 展开剂为V氯仿∶V甲醇∶V二氯甲烷∶V正己烷=2.6∶1.2∶1∶5, 展开到距板上端1 cm处， 展距9 cm; 取出板， 待溶剂挥发干净， 置于紫外分析仪， 在254 nm波长下可观察到样品暗红色斑点， 尼莫地平的Rf值为0.48 ; 然后用薄层色谱扫描仪扫描， 以外标两点法定量。
紫外薄层扫描条件： 以尼莫地平光谱λmax=365 nm为测定波长，锯齿扫描， 数据累加4， 数据平滑11，高灵敏度。
2 结果与讨论
2.1 展开剂的选择
我们根据Glajch三角形最优化法[4]及参照Snyder溶剂参数法[4]对展开剂的组成及配比进行了选择,确定了以氯仿－甲醇－二氯甲烷－正己烷作为四元混和展开剂，其配比为V氯仿∶V甲醇∶V二氯甲烷∶V正己烷=2.6∶1.2∶1∶5 。
2.2 工作曲线和检出限
配制尼莫地平的系列标准溶液， 分别平行点于4块板上， 展开后测定斑点面积，作斑点面积－含量曲线， 所得工作曲线通过原点。 实验结果见表1。
表1 工作曲线参数
Table1 Calibration curve parameters
|
Analyzed cipmound |
Linear range |
Regression equation |
Correlation coefficient |
RSD |
|
Nimodipine(尼莫地平) |
0.005~1 |
y=4.4×104x-256.3 |
0.991 |
0.119 |
按实验方法测定尼莫地平， 其最小检出限为0.005 μg(S/N=2)。
2.3 精密度
为了考察本实验方法的精密度及薄层板、 环境、仪器等多种因素对测量结果的影响，将同一含量的尼莫地平标准溶液分别平行点于6块板上， 每块板上各点5个点， 展开后进行测定， 结果列于表2中。
由表2可以看出，同一板上的相对标准偏差为2.94％， 不同板上为6.56％。 异板相对标准偏差(sr)大于同板， 这可能主要由于不同硅胶板其厚度不均匀及硅胶颗粒大小不一致所造成。 为了减小测量误差以提高测定精密度及准确度， 本文采用了同板随行标准法进行测定。
表2 精密度实验结果
Table2 Results of precision experiment
|
|
sr/% |
Times |
|
Intra-plate(同板) |
2.94 |
5 |
|
Inter-plate(异板) |
6.56 |
6 |
2.4 标准回收实验
标准溶液： 0.100 g/L， 0.300 g/L， 0.500 g/L的尼莫地平溶液。
回收溶液： 取3名健康志愿者各2 mL新鲜血液及尿液， 血液加4倍量的无水乙醇， 用超速离心机离心分离， 上清液为除去蛋白的实验用血清。 尿液离心分离后取上清液为试验用尿样。
取1.00 g/L的尼莫地平标准溶液各1 mL、 3 mL、5 mL， 分别置于3个10 mL容量瓶中， 用血清定容至刻度， 得含量为0.100 g/L、 0.300 g/L、 0.500 g/L的回收溶液。
取1.00 g/L的尼莫地平标准溶液各1 mL、 3 mL、5 mL， 分别置于3个10 mL容量瓶中， 用尿液定容至刻度， 得含量为0.100 g/L、 0.300 g/L、 0.500 g/L的回收溶液。
将上述配制的标准溶液、 回收溶液及空白各取1 μL点于同一薄层板上， 平行点4块板， 展开后测定，测定结果见表3。
对血样和尿样进行加标回收实验， 回收率在96.7％～103％之间，表明该法有较好的准确度，结果令人满意。
*山西省自然科学基金资助项目（951012）
周梅素，女，33岁，理学硕士，讲师
作者单位：周梅素 王培兰 陈 亮(山西大学分析测试中心 太原 030006)