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利福喷丁(rifapentine)是一种新的长效利福霉素类抗生素，对结核杆菌具有良好的抗菌作用。与临床应用广泛的一线抗结核药利福平相比，其抗菌谱相似，但抗结核杆菌作用要高2—10倍，po不良反应更少，血浆中消除半衰期更长，且细胞色素P450诱导效应也稍小，但其肝毒性仍较大，尤其在肝脏损伤的结核患者中更存在明显的个体差异，用经验剂量较难反映出临床疗效，故有必要对利福喷丁的血药浓度进行监测。目前，国内外关于利福喷丁血药浓度检测的文献记载较少，并且方法繁琐，操作费时 ，本文建立了一种简便快速、可靠的RP．HPLC法，以检测血浆中利福喷丁的浓度。
1 仪器与试药
利福喷丁胶囊(四川I乐山三九长征药业股份有限公司生产，150 me,／粒，批号：20030407)；利福喷丁对照品由四川省抗菌素工业研究所药理室提供；内标：利福平(含量>99．6％ ，由四川省抗菌素工业研究所药理室提供)；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
Agilent 1100高效 液相色谱 仪(美国惠普公司)，威玛色谱数据工作站(威玛龙公司)；ZORBAX SB-C 色谱柱(4．6mm×250 mm，5μm，美国惠普公司)；LDZ4-0．8高速离心机(北京医用离心机厂)；SB3200超声仪(上海必信医疗器械厂)。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱：ZORBAX SB-ODS 柱(4．6 mm×250 mm．5μm)，柱温：40℃ ，流速：1．0 ml/min，进样量：20μl，流动相：甲醇 0.02 mol/L 磷酸缓冲液(67：33，V／V；pH 7．0)，检测波长340 nm：内标：利福平。
2．2 血浆样品处理：取血浆样品0．5 ml，精密加入0．2 mg/ml 利福平内标液20μl，混匀，6 ml二氯甲烷分2次加入，每次3 ml，每次漩涡混匀30 S，3 000 rpm离心5 min，分取二氯甲烷层，常温下氮气吹干，200 l流动相溶解残渣，过滤后进样20 l，色谱图见图1。利福平和利福喷丁的保留时间分别为3．1和4．1
2．3 标准曲线的绘制：精密量取空白血浆0．5 ml，分别加入不同体积的利福喷丁对照品液配制成0．54，1．08，2．16，4．32，8．64，l7．28 ml 系列浓度，再精密加入利福平内标液20 l，混匀，按“血浆样品处理”项下操作，以利福喷丁浓度(c)为横坐标，利福喷丁与利福平峰面积比为纵坐标(Y)作图，得利福喷丁的标准曲线方程：Y=0．08C+0．013(n=6，r=0．999 5)，最低检测限为0．54 μg/ml。
2．4 相对回收率及精密度试验：按照标准曲线制作方法，在l d内于不同时间或连续3d处理并测定利福喷丁浓度为0．54，4．32和l7．28 g/ml的血浆样品，按“血浆样品处理”项下操作，测定其日内变异、日间变异及回收率，结果见表l。
2．5 稳定性考察：取已知浓度的利福喷丁血浆样品数份，分别置室温(0，2，4，8，12 h)、冰融(0，4，8，l2，24 h)、冰冻(0，7，14，2l，28 d)条件下存放不同时间后，按“血浆样品处理”项下方法操作，测定利福喷丁含量，考察样品稳定性。结果表明利福平在室温条件下至少能稳定8 h，在冰融(4℃)条件下至少能稳定24 h，在冰冻(一24℃)条件下至少能稳定28 d。
2．6 患者利福喷丁血浆浓度测定：结核病患者6例，其中男性5例，女性l例，年龄22—48岁，体重48—72 kg，抽取空白血后，顿服利福喷丁600 mg。于服药后l，2，4，6，8，l2，l6，24，36，48，72 h分别抽取静脉血置肝素管中，离心，分离出血浆，置一24℃保存。按“2．2”项下方法测定利福喷丁浓度，受试者的平均药-时曲线见图2。
3 讨论
利福喷丁样品处理过程中，常温下尽可能完全除去二氯甲烷，因为二氯甲烷的存在会出现峰分裂现象：内标利福平遇光易分解，操作时尽可能避光、快速。在以上色谱条件下，主峰、内标峰及杂质峰均能得到完全分离，峰形良好，且主峰时间适宜。
6例结核病患者血药浓度测定结果表明：利福喷丁口服吸收安全，血药浓度较高，约8 h血药浓度达到峰值，C ：(15．01±2．02)/m1，48 h血药浓度尚有(4．82±1．86)g/ml，tl 2=(16．22±2．08)h，与文献报道结果基本一致。