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来源：中国色谱技术网
摘要：目的：建立注射用硫酸庆大霉素中3组分含量的快速测定方法。方法：采用薄层扫描法，以甲醇-氯仿-28％氨水(1：1：1)为展开剂，新配制的茚三酮的乙醇-冰醋酸溶液为显色剂，测定波长为500nm：结果：注射用硫酸庆大霉素中3组分的点样量均在2μg～12μg范围内线性关系良好(r1=0.9993、r2=0.9996、r3=0.9991)：结论：薄层扫描法可作为注射用硫酸庆大霉素中3组分含量的快速测定方法：
关键词：注射用硫酸庆大霉素；薄层扫描法；含量测定
庆大霉素对革兰阴性菌有较强的抑制作用，尤其对结核杆菌引起的感染性疾病等甚为有效国外曾有文献报道，采用纸层析法可从庆大霉素中分离出3种活性成分，分别确定为C1、C2和C1a。
此外，这3种活性成分也可由柱层析法和离子交换层析法分离得到。《中国药典>2000年版规定用高效液相色谱法测定各组分含量时，C1、C2、C1a含量分别应为25％～50％、20％～50％、15％～40％，但其操作程序相对复杂。本文中，笔者建立了一种快速的含量测定方法．即样品经薄层层析后以茚三酮显色，再用薄层扫描仪测量斑点密度，以求出各组分的含量。
1、仪器与试药
Vis-UV型薄层扫描仪(美国FarrandOptical公司)；定量点样毛细管(美国DrummondScientific公司)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；玻璃板(20cm×20cm，0.25mm)：庆大霉素对照品(兰州市药品检验所，批号：970623)；注射用硫酸庆大霉素(天津药业焦作有限公司，批号：031012—2、030613一l；上海通用药业股份有限公司第三公司，批号：021145、021250)；甲醇、氯仿、茚三酮均为分析纯。
2、方法与结果
2．1色谱和扫描条件
2．1．1色谱条件：薄层板采用硅胶G与0.1％羟甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液制备(使用前于135℃下活化lh)；展开剂为甲醇-氯仿-28％氨水(1：1：1，V／V／V)，使用前应按每15Oml溶剂加100g无水硫酸钠的比例干燥后过滤；展开槽在使用前应用展开剂饱和lh；点样量为样品溶液1μl，对照品溶液1、3μl。薄层板展开15cm时从展开槽中取出，在135℃下烘干20min后放冷至室温，均匀地喷洒10ml新配的茚三酮溶液(1g茚三酮溶于95％乙醇50ml和冰醋酸10ml的混合溶剂)，再于135℃下加热15min即可在白色的薄层板背景上显现清晰的鲜红斑点。
2．1．2扫描条件：扫描波长为500nm；分辩率为10nm；扫描速度为2.03cm／min；记录仪纸速为2.54cm／min。
2．2溶液的制备
2．2．1样品溶液：准确称取注射用硫酸庆大霉素适量，并溶于水巾，即得浓度为30mg／ml的样品溶液，并直接用于薄层板。
2，2．2对照品溶液：准确称取庆大霉素对照品150.Omg，用水定容至10ml容量瓶中，即得含C12.46mg／ml、C23.26mg／ml、C1a3.06mg／ml的对照品溶液。
2．3稳定性试验
取“2．2．2”项下溶液，按“2．1．1”项下色谱条件展开，并分别于0、1、2、3、4、5、6h时按“2．1．2“项下扫描条件测定斑点吸收度积分值。结果表明，斑点在6h内稳定．RSD=1.9%。
2．4精密度试验
取“2．2．2”项下溶液，于同一块薄层板上点8个等量(各1μ1)的点，按“2．1”项F条件进行薄层分卡斤，测定斑点吸收度积分值，结果RSD=1.0％。
2．5重现性试验
取同一批样品(批号：021145)，按“2．7”项下方法测定6次．结果C1、C2、C1a的相对标准差分别为2.4%、2.1％、2.2％。
2．6线性关系考察
分别精密吸取“2．2．2”项下溶液适量，配制成8种不同浓度的系列溶液，各点样1μl，按“2．1”顶下条件进行薄层分析，测定斑点吸收度积分值，以浓度(X)为横坐标，吸收度积分值(Y)为纵坐标进行线性回归，分别得C1、C2、C1a的回归方程：Y1=27.8X1+55.5(r1=0.9993)；Y2=23.1X2+66.1(r2=0.9996)；Y1a=36.8X1a+61.1(r1a=0.9991)，线性范围均为2μg～12μg。
2．7样品的含量测定
精密吸取“2．2．1”、“2．2．2”项F溶液，按“2．1”项下条件测定，并用外标法汁算样品中3组分标示量的百分含量。
2．8不同分析方法的比较
不同浓度庆大霉素的薄层扫描法与高效液相色谱法分析比较。可知，两种方法分析得到的结果十分接近，因此薄层扫描法也可用于注射用硫酸庆大霉索的含量测定。
3、讨论
通过对多种展开利的比较，笔者发现1：1：1比例的甲醇-氯仿-浓氨水(1：1：1)对庆大霉素各组分的分离效果最好。并且溶剂在使用前用无水硫酸钠干燥，更能得到最佳的分离效果。
庆大霉素用茚三酮显色早已有文献报道，但是只有在使用乙酸和乙醇的混合溶剂，并且使其处于最佳的酸碱度(即pH=5)时，才可观察到清晰的红色斑点，而且在6h内光密度不会改变，相对于高效液相色谱法而言，薄层扫描法提供了一种新的庆大霉素组分的含量测定方法，且操作相对简单。