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【摘要】 目的 对止痒洗剂进行定性定量分析。方法 采用薄层色谱法对止痒洗剂中的蛇床子、黄柏、防风进行定性鉴别;以蛇床子素为指标成分,采用高效液相色谱法对蛇床子素进行了定量分析。结果 各薄层定性色谱中,在与对照药材相应的位置上显相同颜色的斑点,阴性对照未见干扰;蛇床子素在0.02～2.60 μg范围内呈良好的线性关系,r=0.999 9,平均加样回收率为98.81%。结论 定性定量方法结果准确,重复性好,可用于止痒洗剂的质量控制。
【关键词】 止痒洗剂;薄层色谱法;高效液相色谱法;蛇床子素
Qualitative and Quantitative Analysis of Zhiyang Lotion ZHU Yu-feng, XU Can (TCM Hospital of Jiangsu Province, Nanjing 210029, China)
Abstract：Objective To analysis the quality of Zhiyang Lotion. Methods Fructus Cnidii, Cortex Phellodendri Chinesis and Radix Saposhnikoviae in the preparation were identified by TLC, and the content of Osthole was determined by RH-HPLC. Results The method of TLC was simple, accurate and specific. The linear range of Osthole was 0.02~2.60 μg, r=0.999 9. The average recovery was 98.81%. Conclusion The methods were simple, reliable and accurate. It can be applied to the quality control of Zhiyang Lotion.
Key words：Zhiyang Lotion;TLC;HPLC;Osthole
止痒洗剂是本院临床经验方,主要由蛇床子、黄柏、防风、枯矾等组成,具有清热燥湿、杀虫止痒之功效,用于治疗湿疮、疥癣等瘙痒性皮肤病。为了对其制剂进行质量控制,我们采用薄层色谱法对止痒洗剂中的黄柏、蛇床子、防风进行了定性控制,并以蛇床子素为指标成分,应用高效液相色谱(HPLC)法进行定量分析,现报道如下。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(Waters 515泵,Waters2487紫外检测器,Empower色谱工作站,美国);Hypersil C18色谱柱(英国);BP-211D型十万分之一电子分析天平(德国Sartarius公司);939型全自动薄层制板器(重庆市南岸贝尔德仪器技术厂);WD-9413A凝胶成像分析仪(北京市六一仪器厂)。
止痒洗剂由本院制剂室提供(批号为090406、090519、090622);蛇床子、黄柏、防风对照药材(批号分别为200405、200602、200907)均购于中国药品生物制品检定所;蛇床子素对照品(批号11822-200305)购于中国药品生物制品检定所(供含量测定用)。薄层层析硅胶G(60型)、薄层层析硅胶H、薄层层析硅胶GF254均为青岛海洋化工有限公司产品。含量测定用甲醇为色谱纯(德国Merk公司);其他化学试剂均为分析纯。
2 薄层色谱鉴别
2.1 蛇床子的薄层色谱鉴别
取止痒洗剂20 mL,置分液漏斗中,用乙醚萃取3次,每次10 mL,合并乙醚液,水浴蒸干,残渣加丙酮1 mL使溶解,作为供试品溶液。同法制备蛇床子缺味阴性对照溶液。另取蛇床子对照药材1 g,加水适量提取,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB][1]试验,分别吸取上述3种溶液约5 μL,点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-正己烷(3∶3∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性无干扰。
2.2 黄柏的薄层色谱鉴别
取止痒洗剂30 mL,加浓氨试液2 mL使成碱性,用氯仿萃取3次,每次20 mL,合并氯仿液,水浴蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。同法制备黄柏缺味阴性对照溶液。另取黄柏对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB][1]试验,分别吸取上述3种溶液各约5 μL,点于同一硅胶G薄层板上,以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性无干扰。
2.3 防风的薄层色谱鉴别
取止痒洗剂20 mL,加乙酸乙酯萃取3次,合并萃取液,水浴蒸干,残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解,作为供试品溶液。同法制备防风缺味阴性对照溶液。另取防风对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB][1]试验,分别吸取上述3种溶液各约5 μL,点于同一硅胶GF254薄层板上,以三氯甲烷-甲醇(4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性无干扰。
3 含量测定
3.1 色谱条件
Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),甲醇-水(70∶30)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为322 nm,理论塔板数按蛇床子素计算不得低于3 000。
3.2 线性关系的考察
精密称取经五氧化二磷减压干燥12 h以上的蛇床子素对照品10.40 mg,置于10 mL容量瓶中,加入甲醇超声溶解并定容至刻度(每1 mL含蛇床子素1.04 mg)。取上述对照品溶液,加甲醇稀释,定容至刻度,依次制成130.00、65.00、32.50、16.25、8.13、4.06、2.03、1.02 μg/mL的溶液。分别精密吸取上述各对照品溶液20 μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,并以进样浓度为横坐标,吸收峰峰面积为纵坐标,进行线性回归,回归方程为：Y=92 851X+27 076,r=0.999 9,蛇床子素在0.02～2.60 μg范围内呈良好的线性关系。
3.3 供试品溶液的制备
止痒洗剂10 mL置于25 mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,密塞,称定重量,超声处理(功率300 W,频率50 kHz)10 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量。精密吸取上清液,用0.45 μm的微孔滤膜滤过,滤液作为供试品溶液。
3.4 可行性试验
按处方量制备蛇床子缺味阴性对照溶液。精密吸取对照品、供试品及阴性对照溶液各20 μL,分别注入液相色谱仪,测定。结果显示,在与对照品色谱峰相应的位置上,供试品溶液出现相同保留时间的色谱峰,蛇床子素和样品中其他组分色谱峰可达到基线分离,蛇床子素与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。阴性对照溶液在此保留时间和位置上无色谱峰,表明阴性对照无干扰。见图1。
3.5 精密度试验
精密吸取同一批号止痒洗剂10 mL,依法制备供试品溶液,精密吸取20 μL注入色谱仪,重复测定6次,RSD=0.72%(n=6)。
3.6 稳定性试验
取配制好的供试品溶液,按含量测定方法,分别在0、2、4、6、8、10、12 h进样测定,记录峰面积,结果显示在12 h内稳定,RSD=0.25%(n=7)。
3.7 重复性试验
精密吸取同一批号的止痒洗剂10 mL,共6份,依法制备供试品溶液,测定,计算,RSD=0.76%(n=6)。
3.8 加样回收率试验
精密吸取已知含量的止痒洗剂5 mL,共6份,稀释至10 mL,再精密吸取5 mL,分别加入蛇床子素对照品,按样品测定方法制备溶液,测定,计算回收率,结果蛇床子素平均回收率为98.81%。见表1。表1 加样回收率试验结果(n=6)
3.9 样品测定
精密吸取止痒洗剂,按“3.3”项下方法制备供试品溶液,进样,测定,计算。结果见表2。表2 蛇床子素含量测定结果(n=3)
4 讨论
本试验采用薄层色谱法对止痒洗剂中的蛇床子、黄柏、防风进行了定性鉴别,方法简便易行,重复性好。
在进行色谱条件摸索时,本试验对2种流动相系统即甲醇-水(70∶30)和乙腈-水(65∶35)[1]进行了比较,结果以甲醇-水(70∶30)为流动相,被测组分与其他组分有较好分离,且重复性好,精密度高,经济实用。
在供试品溶液(供含量测定用)的制备时,我们对两种提取方法即甲醇超声提取和乙酸乙酯萃取[2-3]进行了比较,测定结果比较接近,考虑到方法的简便易行,故选择甲醇超声提取。
【参考文献】
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