HPLC法测定牙周康胶囊中各组分的含量

　　牙周康胶囊由甲硝唑(100 mg)和芬布芬(75 mg)组成，为抗厌氧菌药物。用于治疗溃疡性牙龈炎、牙周炎、齿龈脓肿以及梭状杆菌引起的急性牙感染等^［1］。质量标准^［1～3］用紫外分光光度法测定甲硝唑含量、中和法测定芬布芬含量，方法较为繁琐。该制剂的HPLC法测定国内未见文献报道。本文探索用HPLC法进行分离测定，以氢溴酸高乌甲素为内标，考察了样品中各组分的线性关系，并进行了回收率试验及样品含量测定。方法简便迅速。

1　仪器与试药
SP 8810输液泵、100型可见紫外检测器、4400电脑积分仪，7125定量进样阀。
甲硝唑对照品(中国药品生物制品检定所)，芬布芬(西北合成药厂，99.4%)，内标氢溴酸高乌甲素(兰州制药厂，99.6%)，样品(西北合成药厂)，甲醇、磷酸二氢钠均为分析纯。

2　色谱条件
色谱柱：Spherisorb C₁₈(5　μm，4.6 mm×250 mm，大连化物所)；流动相：甲醇-0.1 mol^.L^-1磷酸二氢钠溶液(7∶3)；流速：0.8 mL^.min^-1；检测波长：254 nm；衰减：128；进样量：10 μL。在本实验条件下，各组分与内标的分离度均大于3，柱塔板数均在4000以上。样品与内标的色谱图见图1。

3　方法与结果
3.1　对照品贮备液与内标溶液的制备　
精密称取甲硝唑、芬布芬对照品分别为25和20 mg，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，得对照品贮备液。另精密称取氢溴酸高乌甲素50 mg置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，得内标溶液。

图1　样品色谱图
1.甲硝唑　2.芬布芬　3.氢溴酸高乌甲素(内标)

3.2　线性关系　
精密量取对照品贮备液1，2，3，4，5 mL分置25 mL量瓶中，各精密加入内标溶液2 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀。照上述色谱条件，进样10 μL，记录色谱峰面积，以组分与内标峰面积比值为纵坐标，组分浓度(mg^.mL^-1)为横坐标，得回归方程分别为：

Y_甲=14.51X+17.19×10^-3　r=0.999 9
Y_芬=32.60X+4.74×10^-3　r=1.000

结果表明甲硝唑浓度在0.02～0.1 mg^.mL^-1、芬布芬浓度在0.016～0.081 mg^.mL^-1范围内线性关系良好。
3.3　精密度试验　
取“样品测定”项下配制的供试溶液在日内不同时间和日间进行HPLC分析，结果日内RSD_甲为0.66%，RSD_芬为0.71%，n=5；日间RSD_甲为0.88%，RSD_芬为0.97%，n=5。
3.4　回收率试验　
按处方量的60%，100%，140%，180%配制模拟片粉，按“含量测定”方法测定。结果平均回收率(n=5)依次为甲硝唑99.8%，100.4%，99.3%，99.9%，其RSD为0.97%，1.21%，1.31%，1.15%；芬布芬为99.4%，100.2%，99.5%，100.3%，其RSD为0.91%，0.88%，0.98%，1.00%。
3.5　样品测定　
取本品内容物(10粒)，精密称定，研细，称取适量(约1/4粒)，置50 mL量瓶中，加流动相适量，振摇使之溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，量取续滤液2 mL置25 mL量瓶中，加内标溶液2 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件进样10 μL进行测定。结果见表1。

4　讨论
实验中曾比较了2种不同牌号的C₁₈柱，对分离测定无影响。 比较了甲醇-水、 甲醇-磷酸二氢钠溶液(0.05，0.1，0.2 mol^.L^-1)不同配比的流动相，确定了本色谱条件。结果表明，测定结果良好，可用于该制剂的质量控制。

表1　样品测定结果(标示量%，n=4)

批号

甲硝唑

芬布芬

紫外法

本法

中和法

本法

951201

103.9

103.5

98.8

98.4

961201

107.4

106.7

102.0

102.1

961202

107.4

106.5

101.2

100.7

970506

105.1

103.8

99.3

99.0

970508

101.3

100.9

100.4

99.5

作者单位：甘肃省药品检验所 兰州730000

参考文献
1　黑龙江省药品标准.1993. 122
2　河北省药品标准.1991. 292
3　甘肃省药品标准.(91)864-7. 9

收稿日期:1998-09-16