高效液相色谱法测定富马酸比索洛尔片的含量

摘要目的：报道反相高效液相色谱法测定富马酸比索洛尔片的含量。
方法：采用YWG－C₁₈柱，以对羟基苯甲酸丙酯为内标物，甲醇－0.1 mol^.L^-1醋酸钠缓冲液(pH 5) (6∶4)为流动相，检测波长270 nm。
结果：进样量在2～10 μg，内标物为0.5 μg时，与峰面积比值呈良好线性，r＝0.999 98（n＝6）。方法回收率99.67％，RSD为0.46％（n＝15）。
结论：方法简便、准确、专属。

HPLC Determination of Content of Bisoprolol Fumarate Tablets

Wang Weixian, Gao Lijun and 
(Institute of Pharmacology and Toxicology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing　100850)

AbstractObjective：To determine the content of bisoprolol fumarate tablets by HPLC.
Method:Using YWG-C₁₈ column, p-hydroxybenzoyl propylate as internal standard,methanol-0.1 mol^.L^-1 sodium acetate buffer (pH 5)(6∶4) as mobile phase and 270 nm as detection wavelength.
Results:The linearity of peak area ratio was good when the injected quantity of bisoprolol fumarate was 2～10μg and the internal standard was 0.5μg respectively (r=0.999 9,n=5). The recovery of this method was 99.67%, the RSD was 0.46%.
Conclusion:This method is convenient, accurate and specific.
Key words　bisoprolol fumarate tablets, HPLC, content determination

　　富马酸比索洛尔（Bisoprolol fumarate）化学名为1－{4-〔2-(1-甲基乙氧基乙氧基-甲基〕苯氧基}-3-〔(1-甲基乙基)胺基〕-2-丙醇富马酸盐,该药是一种强效、长效的β₁受体阻滞剂，可用于治疗高血压、心绞痛和心率失常等^［1］，其剂型有口服片剂。文献报道用HPLC法测定比索洛尔的血药浓度^［2，3］及用酸性色素比色法测定片剂的溶出度^［4］，用HPLC法测定其片剂的含量及稳定性研究尚未见文献报道。本文建立了反相HPLC法测定富马酸比索洛尔片的含量，该法以甲醇－0.1 mol^.L^-1醋酸盐缓冲液为流动相，选用对羟基苯甲酸丙酯为内标，C₁₈柱分离，方法操作简便，重现性良好，可用于该药的含量测定及质量控制。

1　材料与方法
1.1　仪器与试药　
　　日本日立655型高效液相色谱仪；683紫外检测器；655�60微处理机；日本岛津UV�160A紫外分光光度计；富马酸比索洛尔原料药及片剂（本所研制，北京四环制药厂生产）；对羟基苯甲酸丙酯为Sigma公司出品；甲醇为色谱纯；其它试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。
1.2　色谱条件　
　　色谱柱：YWG－C₁₈柱，10 μm，4.6 mm×150 mm；流动相：甲醇-0.1 mol^.L^-1醋酸钠缓冲液(pH　5)(6∶4)；流速：1.0　mL^.min^-1；纸速：2.5　mm^.min^-1；检测波长：270　nm；进样量：20　μL。
1.3　内标溶液的配制　
　　取对羟基苯甲酸丙酯25 mg，精密称定，置于1 000 mL量瓶中，加甲醇700 mL，振摇使完全溶解后，加 0.05 mol^.L^-1盐酸至刻度，摇匀，制成每1mL中含0.025mg的溶液, 即得。
1.4　校正因子及样品的测定
1.4.1　校正因子的测定　
　　取富马酸比索洛尔对照品约50 mg，精密称定，置于100 mL量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，制成每1 mL中含0.5 mg的溶液, 色谱进样20 μL，计算校正因子。
1.4.2　供试品溶液的制备与测定　
　　取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于富马酸比索洛尔5 mg)，置具塞试管中， 精密加内标溶液10 mL，超声振荡10 min，使主药溶解，用<1 μm微孔滤膜滤过，取续滤液为供试品溶液，取20 μL注入液相色谱仪，测定，计算即得。富马酸比索洛尔在HPLC图上显示2个色谱峰,即富马酸、比索洛尔，该药与杂质、内标分离良好,见图1。

2　结果与讨论
2.1　紫外吸收光谱　
　　取富马酸比索洛尔对照品溶液(0.1 mg^.mL^-1)，在200～300 nm波长范围内扫描，绘制吸收光谱，在(270±1)nm处有最大吸收，本文选定270 nm为测定波长。

图1　色谱图
1.富马酸　2.杂质　3.比索洛尔　4. 对羟基苯甲酸丙酯(内标)

2.2　线性范围　
　　精密称取富马酸比索洛尔对照品125 mg，置于50 mL量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，从中精密吸取0.4，0.8，1.2，1.6，2.0，2.4 mL，分别置于10 mL量瓶中，加内标溶液至刻度，摇匀，分别取20 μL注入液相色谱仪，计算比索洛尔峰面积与内标峰面积之比，并与对照品浓度作图，富马酸比索洛尔进样量在2～12 μg，内标物在0.5 μg时，其峰面积比值呈良好线性。经统计处理得回归方程（n=6）：

Y=0.000 634 3+0.085 32X　r=0.999 98

2.3　重现性试验　
　　按实验方法配制同一批富马酸比索洛尔片供试品溶液5份, 依法测定, 结果证明重现性良好, 日内、日间RSD分别为0.63%及0.68%。
2.4　精密度试验　取富马酸比索洛尔0.1，0.3，0.6 mg^.mL^-1 3种浓度, 按含量测定方法测定, 分别进样5次, 结果证明方法精密度良好, RSD为0.62％。
2.5　回收率试验　
　　依法配制富马酸比索洛尔0.1，0.3，0.6 mg^.mL^-1 3种浓度的对照品溶液若干份，按每片的处方量加入辅料，超声振荡10 min，以下依法测定, 结果表明, 辅料对测定无干扰, 富马酸比索洛尔平均回收率为99.67%, RSD为0.46%(n=15)。
2.6　含量均匀度测定结果　
　　随机取3批富马酸比索洛尔片，每批10片，分别置10 mL量瓶中，以下按含量测定方法测定，结果符合中国药典1995年版附录ⅩE含量均匀度项下有关规定，见表1。

表1　富马酸比索洛尔片含量均匀度测定结果 (n=10)

批号

含量/%

A+1.8S

1

100.1

3.19

2

99.97

2.82

3

100.6

3.33

2.7　样品测定　
　　应用此法测定了3批富马酸比索洛尔片原始含量及室温贮存3年的含量，结果均符合标示量，见表2。

表2　富马酸比索洛尔片含量测定结果 (%，n=3)

批号

原始

室温贮存三年

1

100.2

99.5

2

99.7

100.6

3

101.5

100.3

作者单位：军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

参考文献
1　Lancaster SG, Sorkin EM.Bisoprolol. A preliminary review of its pharmacodynamic and pharmacokinetic properties, and therapeutic efficacy in hypertension and angina pectoris. Drugs，1988, 36：256
2　Buhring ku, Garbe A.Determination of the new beta-blocker bisoprolol and of metoprolol, atenolol and propranolol in plasma and urine by high-performance liquid chromatography. J Chromatogr，1986, 382：215
3　Eastwood RJ, Jerman JC, Bhamra RK.High performance liquid chromatographic measurement of bisoprolol in plasma.Biomed Chromatogr，1990,4(4)：178
4　高立军, 王维贤, 石庭森. 富马酸比索洛尔片的酸性色素比色法及溶出度测定. 中国药学杂志，1996, 31(11):678

收谢日期:1998-07-20