HPLC法测血液中度冷丁的含量*

　　度冷丁(哌替啶)是临床上广泛使用的一种麻醉止痛药，一般用于术前镇静和术后镇痛作用。其分析方法多为GC法^［1～4］，HPLC测定法国内外报道得很少。本文通过寻找适宜的色谱条件，建立了快速、灵敏、高选择性的HPLC法测定全血中度冷丁的含量并应用于临床病人的测定。病人手术中合用的其它药物不干扰测定，结果满意。

1　仪器

　　日本岛津LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6AV检测器，C-R3A数据处理机。

2　试药与试剂

　　度冷丁对照品(公安部第二研究所购得)；乙腈：色谱纯；水：二次重蒸水；甲醇：分析纯甲醇重蒸；正己烷：分析纯正己烷经浓硫酸处理后重蒸。其它试剂均为分析纯。
磷酸盐缓冲液的配制：称取磷酸氢二钾2.6 g于1 L水中，用0.9 mol^.L^-1的磷酸调至pH=7，并通过0.45 μm微孔滤膜过滤。

3　色谱条件

　　色谱柱：Spherisorb CN(10 μm,4.0 mm×250 mm)柱及CN预处理柱(4.0 mm×20 mm)，大连依利特公司；流动相：乙腈-15 m mol^.L^-1磷酸盐缓冲液-甲醇(62∶25∶13)；流速：1.0 mL^.min^-1；检测波长：205 nm。

4　样品处理

　　准确吸取血样1 mL于10 mL具塞离心试管中，肝素抗凝，加入无水乙醇0.5 mL，1 mol^.L^-1氢氧化钠(pH=11)100 μL，摇匀。正己烷6 mL萃取2次，每次涡旋振荡6 min，然后离心(3500 r^.min^-1)2 min，合并正己烷层于10 mL离心管中，70 ℃水浴蒸干。临近蒸干时，用正己烷洗涤管壁2次，每次0.5 mL，使待测物质集中于试管底部。残渣用50 μL流动相溶解，吸取20 μL进样测定。空白血样、加样血样及临床病人血样的提取色谱图见图1。

图1　度冷丁分离色谱图
A.空白血样　B.加样血样　C.临床病人血样
1.度冷丁(8.57 min)　2.杂峰

5　线性关系与检测限

　　精密称取度冷丁对照品适量，用1 m mol^.L^-1 磷酸配成1 mg^.mL^-1的度冷丁储备液，再稀释成0.04 mg^.mL^-1的工作液。精密吸取不同量的度冷丁工作液分别加到1 mL正常人血中配成系列标准溶液50、100、260、500、1000 ng^.mL^-1。按样品处理项下处理，进样20 μL测定，以峰高(A)对浓度(C)回归，求得线性回归方程：
C=0.06A+11.8　r=0.9998　n=5
当S/N=2时，检测限为25 ng^.mL^-1。线性范围为50～1000 ng^.mL^-1。

6　回收率及精密度

　　取正常人血1 mL分别加入适量的度冷丁工作液配成不同血药浓度的溶液数份，同法处理测定，连续测定7 d，每个浓度平行测定5次，结果见表1。

表1　回收率及精密度(n=5)

血药浓度/
ng^.mL^-1

回收率
/%

RSD/%

日内

日间

80

94.5

3.2

5.6

200

96.8

4.7

4.2

300

92.8

4.7

7.0

400

102.2

3.6

6.7

7　临床应用

　　用本法测定9例手术病人(静脉或肌肉注射50 mg度冷丁)血药浓度，结果见表2。

表2　病人血样测定结果(n=3)

病例

取样时间
/min

注射方法

血药浓度
/ng^.mL^-1

RSD/%

1

5

iv

636.2

2.16

2

5

iv

667.2

3.37

3

10

iv

421　

2.75

4

15

iv

398.7

3.11

5

20

iv

325.4

2.41

6

60

iv

242.5

2.91

7

10

im

114.1

3.26

8

15

im

149.1

3.53

9

30

im

200.7

4.06

8　讨论

8.1　用处理后的正己烷和甲醇可大大减少色谱图上的杂质峰，降低检测限。
8.2　临床病人血样的分离色谱图显示度冷丁色谱峰峰形对称，尖锐，分离完全。手术中常合用的其它药物如氯胺酮、芬太尼、琥珀胆碱、利多卡因、普鲁卡因等均、不干扰测定，说明方法灵敏度高，专属性强。
致谢：贵阳医学院的高鸿同志对本文给予大力协助。

*　贵州大学科研基金支助课题
作者单位：贵州大学化学系　550025

参考文献

1　封世珍，李双庆，刘耀等.用气相色谱法分析血样中混合碱性药物.药物分析杂志，1990，10(1)：53
2　胡绪英，刘锋，罗毅.人尿中度冷丁及代谢产物的GC/FID及GC/MS分析.药学学报，1994，29(2)：116
3　邱丰和，刘力，罗毅等.固相萃取GC-FID和GC-MS分析血浆中碱性药物.药学学报，1996，31(4)：296
4　Chan K Lauow.Determination of pethidine and its major metabolites in human urine by gas chromatography. J Chromatogr,1991,565:247

(本文于1998年4月29日收到)