HPLC法测定肾康注射液中原儿茶醛含量*

　　中药肾康注射液由黄芪、丹参等4味中药制成，是用于治疗慢性肾衰的一种新药，给药方式为静脉滴注，制剂稳定，无毒副作用，疗效显著安全。有文献报道用TLC法^［1，2］或HPLC^［3～5］法测定丹参中原儿茶醛含量。本文采用TLC法作为样品前处理的纯化手段，以HPLC法测定丹参制剂肾康注射液中原儿茶醛含量，本法准确、灵敏、重现性好。
1　药品与试剂
原儿茶醛对照品由中国药品生物制品检定所提供；肾康注射液由成都市中医药研究所制剂研究室研制，批号：910314 、920815、931014，规格：每瓶100 mL；实验用水为双重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。
2　仪器与色谱条件
HP－1050型色谱仪，VWD紫外可编程可变波长检测器，HP－3394色谱数据处理机。分析柱：Shimpack ODS柱 ( 5 μm, 6 mm×150 mm )；预柱：YWG－C₁₈柱(7 μm , 4.6 mm×150 mm )；流动相：甲醇－水－冰醋酸 (24∶75∶1)；流速：1.0 mL^.min^-1；柱温：30 ℃；检测波长：328 nm。
3　直线回归方程的测定
取原儿茶醛对照品，加甲醇溶解并稀释成1 mg*mL^-1的对照品贮备液，放冰箱4 ℃保存备用；精密量取该贮备液适量，用甲醇配成含原儿茶醛分别为20、40、60、70、80及120 μg^.mL^-1的对照品溶液，各进样10 μL,按色谱条件测定。以原儿茶醛峰面积( Y )对对照品溶液浓度( X )回归得直线方程：
Y=177029+70651X　r=0.9996
结果表明：原儿茶醛检测限为0.9 μg^.mL^-1 (S/N = 3∶1)，线性范围为20～120 μg^.mL^-1 。
4　测定方法
4.1　供试品溶液的制备　精密量取样品20 mL，置于用水湿润过的60 mL分液漏斗中，加饱和氯化钠溶液5 mL，用乙醚提取3次，每次20 mL，振摇1 min，合并提取液，水浴(60～65 ℃)蒸干，用无水乙醇溶解残渣，定量转移至1 mL容量瓶中，并稀释至刻度，作为薄层色谱分离的供试品溶液。
4.2　TLC分离和HPLC测定　精密量取上述供试品溶液200 μL，点于含0.5 % CMC硅胶G薄层板上(10 cm×20 cm，层厚0.5 mm，105 ℃活化30 min，点成5 cm条状)，另点1 mg^.mL^-1原儿茶醛对照品无水乙醇溶液2 μL于另一侧作对照，用展开剂氯仿－苯－乙酸乙酯－甲酸(15∶10∶8∶1.8)展开，取出挥干溶剂，晾干30 min，于360 nm紫外光灯下(见图1)，以原儿茶醛对照品前后亮黄色荧光条斑为界划痕，刮取划痕内硅胶粉，置具塞离心管中，加入无水乙醇10 mL，用力振摇1 min，离心(3000 r^.min^-1，5 min)，倾出上清液。如此反复洗脱3次，合并洗脱液，蒸干，残渣用适量甲醇分数次溶解并转至1 mL容量瓶中，挥去溶剂，精密加甲醇1 mL，振荡使溶解，吸取10 μL进行测定(见图2－A)，用二点内插法计算原儿茶醛含量，即得。

4.3　空白检查　取不含丹参的空白样品(940624)20 mL，按项“4.1”、“4.2”操作，吸取10μL注入液相色谱仪(见图2－B)，可见空白样品在原儿茶醛出峰处无干扰峰。

5　加样回收率测定
准确量取已测知含量的样品，定量加入不同浓度水平原儿茶醛对照品溶液，按上述测定方法测定，结果见表1。

表1　回收试验结果(n = 3)

样品含量/
μg^.mL^-1

加入对照品量/
μg^.mL^-1

回收率/
%

RSD/
%

40.57

20.00

97.91

1.3

40.96

40.00

98.68

1.2

40.04

80.00

99.72

1.1

6　重复性测定
取40 μg^.mL^-1对照品溶液10 μL进样，连续6次，测得峰面积的RSD 为 0.11 %。
7　样品测定
取样品20 mL，按项“4.1”、“4.2” 方法处理，进样10 μL，测定910314、920815、931014批号样品含量分别为3.191、3.063、3.108 μg^.mL^-1 (n=3)，RSD分别为0.22 %、0.31 %、0.19 %。
8　讨论
8.1　采用不同溶剂提取样品后直接溶解进样，分离效果不理想，图谱杂乱。用柱层析和薄层法进行预处理结果比较，以薄层法简单易行，甩掉部分杂质干扰，HPLC图谱清晰。
8.2　在360 nm紫外线下，原儿茶醛斑无荧光，故以原儿茶醛对照品斑前后亮黄色荧光条斑为界刮下洗脱，保证样品中原儿茶醛全部被刮下。
8.3　在样品预处理时曾采用氯仿、甲酸乙酯、苯及乙醚进行萃取，结果以乙醚提取为佳，3次提取回收率为99 %。加入饱和氯化钠以防止提取时乳化物产生。

*　四川省中医药科学技术基金资助项目
作者单位：汪世英　曹成顺　成都市中医药研究所　610016
本文于1998年3月9日收到

参考文献
1　朱亚琦，于如嘏．薄层扫描法测定原儿茶醛和原儿茶酸含量．药物分析杂志，1983，3 （5）：265
2　倪坤仪，张雨梅，于如嘏．薄层扫描测定丹参注射剂中水溶性成分．南京药学院学报，1986，17 ( 4 )：265
3　李元智，黄英，刘三康等．HPLC测定复方丹参片中原儿茶醛和丹参酮IIA．华西药学杂志，1996，11（4）：213
4　戴忠，钱忠直．HPLC法测定丹参粉针中丹参素及原儿茶醛含量．中成药，1996，18 (6) :10
5　王剑波，康云鹰，谢艳华等．HPLC法测定妇健冲剂中原儿茶醛含量．西北药学杂志，1997，12（1）：3