HPLC 法同时测定头孢拉定和精氨酸的含量

　　摘要　目的：以HPLC外标法同时测定注射用头孢拉定(含精氨酸)中头孢拉定、精氨酸和杂质头孢氨苄的含量。
方法：采用Spherisorb C₁₈柱，乙腈-醋酸盐缓冲液(12∶88)为流动相，检测波长200 nm。
结果：该法能较好地分离被测组分和有关杂质，被测组分的线性关系良好，回收率满意。
结论：该法专属性好，快速、准确。
　

Determination of Cephradine and Arginine by HPLC

Zeng Hui and Liu Xuebin

(Guangzhou Baiyunshan Chemical Pharmaceutical Factory,Guangzhou 510515)

Abstract　Objective：The establishment of a quantitative HPLC determination method for cephradine and arginine was reported.Method:The Spherisorb C₁₈ column was used.The mobile phase consisted of acetonitrile-acetate buffer solution(12∶88).Detection was at 200 nm.Result:7-ADCA,cyclohexa-1,4-dienylglycine and cephalexin had no influence on the assay of the components.Conclusion:Cephradine and arginine could be assayed accurately.
Key words　cephradine,arginine,HPLC

　　注射用头孢拉定为β－内酰胺类抗生素，系头孢拉定与精氨酸或碳酸钠按一定比例组成，中国药典1995 年版二部^［1］采用HPLC法只测定头孢拉定和杂质头孢氨苄的含量，USP^［2］ 采用分光法仅测头孢拉定的含量。本文建立了HPLC外标法，对注射用头孢拉定（含精氨酸）可同时测定头孢拉定、精氨酸和杂质头孢氨苄的含量，被测组分能较好地分离，线性关系良好，回收率满意。该法专属性好、快速、准确，适用于原料合成及制剂分装前生产过程的质量监控。

1　仪器、药品及试剂
SP液相色谱仪，SP8815单元泵，SC100紫外可见光检测器，JS3030色谱工作站。
注射用头孢拉定（含精氨酸）（批号为9709101、9709111、9709121）由广州白云山制药股份有限公司提供；头孢拉定对照品（批号0427—9703）、7—ADCA对照品均由中国药品生物制品检定所提供；精氨酸工作对照品（含量为98.44％）、双氢苯甘氨酸均为进口样品精制；乙腈，色谱纯；其余试剂均为分析纯。

2　色谱条件
色谱柱：Spherisorb C₁₈（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈－醋酸盐缓冲液(称取醋酸钠0.7 g和冰醋酸0.15 g加水稀释到1000 mL )（12∶88）；流速：1.0 mL^.min^-1；检测波长：200 nm；AUFS：0.5；室温。

3　方法与结果
3.1　系统适用性实验　在本实验流动相系统下，精密称取头孢拉定、精氨酸、头孢氨苄、双氢苯甘氨酸、7-ADCA及乙酰苯胺适量，用流动相溶解，取其溶液 20 μL，进样，色谱图见图1 。可见混合溶液中被测组分与合成原料杂质良好分离。色谱系统适用性试验结果见表1。

图1　各组分色谱图
1. 7－ADCA　2. 双氢苯甘氨酸　3. 精氨酸
4. 头孢氨苄　5. 头孢拉定　6.乙酰苯胺

表1　系统适用性实验结果

名　　称

保留时间/min

理论塔板数

分离度

7-ADCA

1.661

3130

双氢苯甘氨酸

2.039

3530

2.760

精氨酸

2.737

1940

2.797

头孢氨苄

3.674

4730

3.596

头孢拉定

4.499

4880

3.166

乙酰苯胺

11.585

6810

15.522

3.2　线性实验　精密称取头孢拉定对照品（含头孢氨苄）和精氨酸工作对照品适量，用流动相分别制成含头孢拉定 111.8、139.7、167.7和195.6 μg^.mL^-1，含头孢氨苄2.6、3.3、4.0、4.6 μg^.mL^-1，含精氨酸 67.2、83.9、100.7、117.5 μg^.mL^-1的混合溶液，精密量取上述各混合溶液20 μL，进样，以各样品浓度对峰面积回归，得头孢拉定、头孢氨苄和精氨酸回归方程分别为：
A＝1.964×10⁴C－1.312×10⁴　r＝0.9996
A＝3.152×10⁴C＋1.429×10³　r＝0.9994
A＝1.045×10⁴C＋2.341×10⁴　r＝0.9996
结果表明头孢拉定、头孢氨苄、精氨酸分别在110～195 μg^.mL^-1、2.5～4.5μg^.mL^-1和 67～117μg^.mL^-1范围内线性关系良好。
3.3　稳定性实验　在本实验条件下，样品溶液室温放置5 h，测得头孢拉定、精氨酸及头孢氨苄的含量基本不变。
3.4　加样回收试验　精密称取注射用头孢拉定(含精氨酸)约20 mg，依次加入头孢拉定对照品和精氨酸工作对照品适量，用流动相配制成含头孢拉定120 μg^.mL^-1，含精氨酸 100 μg^.mL^-1, 含头孢氨苄2.5 μg^.mL^-1的混合溶液，按样品测定法测定，计算加样回收率及RSD（见表2 ）。

表2　头孢拉定、精氨酸及头孢氨苄回收率(n＝3)

名　　称

平均回收率/％

RSD/％

头孢拉定

100.5

0.18

精氨酸

99.2

0.97

头孢氨苄

100.7

0.56

3.5　样品测定　精密称取头孢拉定对照品约40 mg，精氨酸工作对照品25 mg, 用流动相稀释至50 mL,摇匀，精密量取该溶液5 mL，再用流动相稀释至25 mL，摇匀，作为对照品溶液。另精密称取注射用头孢拉定(含精氨酸)样品约60 mg，用流动相稀释至 50 mL，摇匀，精密量取该溶液5 mL，再用流动相稀释至25 mL，摇匀，作为样品溶液。分别取对照品溶液和样品溶液各20 μL进样，可见样品中头孢拉定、精氨酸及头孢氨苄能良好分离（见图2），以外标法分别计算三者的含量，结果见表3。

图2　注射用头孢拉定(含精氨酸)色谱图
1.精氨酸　2.头孢氨苄　3.头孢拉定

表3　样品测定结果(%，n=3)

样品

本　　　法

药　典　法

头孢拉定
标示量%

精氨酸
含量

头孢氨苄
含量

头孢拉定
标示量%

头孢氨苄
含量

1

101.0

32.46

2.35

102.6

2.17

2

99.8

34.15

2.35

101.4

2.16

3

100.3

32.52

2.35

101.8

2.22

4　讨论

4.1　注射用头孢拉定（含精氨酸）中助溶剂精氨酸的比例较大，有必要测定其含量，便于原料合成及分装生产过程的监控。头孢拉定和头孢氨苄分别在195和262 nm附近有吸收，同时精氨酸在195 nm附近有最大吸收（见图3），故实验波长选择 200 nm。

图3　头孢拉定、头孢氨苄及精氨酸的紫外光谱图
1. 精氨酸　2.头孢拉定　3.头孢氨苄

4.2　流动相采用极性较大的乙腈，本文试验了不同配比的乙腈－醋酸盐缓冲液组成的流动相分离效果，当乙腈－醋酸盐缓冲液配比为12∶88时，各组分间分离度均大于1.5，头孢拉定与合成头孢拉定的原料7－ADCA及双氢苯甘氨酸、助溶剂精氨酸、杂质头孢氨苄等能较好地分离（见表1）。
4.3　由于乙酰苯胺可与头孢拉定等各组分完全分离，故也可用乙酰苯胺作为内标，采用内标法同时测定头孢拉定、精氨酸和头孢氨苄的含量。由于外标法简单、快速，已被中国药典 1995 年版采用，故本文选用外标法。

作者单位：广州白云山制药股份有限公司广州白云山化学制药厂　广州　510515

参考文献

　[1]　中国药典.1995.二部：171
　[2]　USP.ⅩⅩⅢ.327

本文于1997年10月27日收到