RP-HPLC法同时测定复方氟康唑霜中氟康唑、甲硝唑、氯霉素3种组分含量

摘　要：目的：建立同时测定复方氟康唑霜中氟康唑、甲硝唑、氯霉素3组分含量的简便方法。方法：反相高效液相色谱法，采用外标法，Ultrasphere-ODS柱，流动相为甲醇-水(50∶50)，检测波长261 nm。结果：线性范围分别是：氟康唑 40.1～200.6 μg^.mL^-1，r=0.999　4；甲硝唑　20.0～100.0 μg^.mL^-1，r=0.999　8；氯霉素　39.9～199.6 μg^.mL^-1，r=0.999 8。平均回收率：氟康唑98.31%；甲硝唑100.4%，氯霉素98.17%。结论：本法分离度好，快速，简便。适用于该制剂中3种成分的同时测定。
关键词：反相高效液相色谱法　氟康唑　甲硝唑　氯霉素

Determination of Fluconazole, Metronidazole, Chloramphenicol
in Compound Fluconazole Cream by RP-HPLC

Xia Xiaoping
（The Affiliated Hospital for Gynecology and Obstetrics, Zhejiang Medical University, Hangzhou　310006）
Zhou Yuehong
（Zhejiang Jiaxing No.1 Hospital, Jiaxing　314000）

Abstract：Objective：To establish a method for determination of the three constituents in compound Fluconazole cream: Fluconazole, Metronidazole, Chloramphenicol.Method:RP-HPLC was applied to quantitative analysis. Ultrasphere-ODS column was used. The mobile phase was composed of methanol-water(50∶50). The UV detection wave length was 261 nm. Results:The linear response range from 40.1～200.6μg^.mL^-1 of Fluconazole(r=0.999 4).20.0～100.0μg^.mL^-1 of Metronidazole(r=0.999 8).39.9～199.6μg^.mL^-1 of Chloramphenicol(r=0.999 8). The mean recoveries of Fluconazole, Metronidazole, Chloramphenicol were 98.31%, 100.4%, 98.17%. Conclusion:The method is simple, sensitive and suitable for the determination of the three constituents in compound cream.
Key words：RP-HPLC, fluconazole, metronidazole, chloramphenicol▲

　　复方氟康唑霜由氟康唑、甲硝唑、氯霉素、乳膏基质等组成，为医院新制剂。对念珠菌性、细菌性混合阴道感染有较好疗效^［1］。关于氟康唑、甲硝唑等单方的含量测定，已有文献报道^［2，3］。本实验采用反相高效液相色谱法，同时测定此复方制剂中氟康唑、甲硝唑、氯霉素的含量，方法准确、简便，为制剂质量的控制，提供了科学依据。

1　仪器与试药

　　338型高效液相色谱仪(美国Beckman)，125双泵，166紫外检测器，406控制器。
氟康唑对照品(香港志达公司，含量100.9%)。
甲硝唑对照品(武汉制药股份有限公司，含量99.0%)。
氯霉素对照品(中国进出口上海公司，含量98.7%)。

2　实验方法与结果

2.1　色谱条件　色谱柱：Ultrasphere-ODS柱(4.6 mm×25 cm，5 μm)；流动相为甲醇-水(50∶50)；流速0.8 mL^.min^-1；柱温为室温；检测波长261 nm；检测灵敏度0.05 AUFS；进样量20 μL。
2.2　系统适用性实验　在该色谱条件下对照品及样品的色谱图见图1。可见样品中各被测组分间良好分离。色谱系统适用性实验结果见表1。

图1　对照品(A)及样品(B)色谱图
1.甲硝唑　2.氟康唑　3.氯霉素

表1　系统适用性实验结果

名称

保留时间/min

理论塔板数

分离度

甲硝唑

4.38

2657

氟康唑

6.08

2275

6.80

氯霉素

7.80

2751

4.59

2.3　干扰性实验　按处方量取空白基质适量，参照样品分析方法处理，结果基质不干扰样品中3种组分的测定。
2.4　线性关系　精密称取干燥至恒重的对照品氟康唑0.1 g，氯霉素0.1 g，甲硝唑0.05 g。置250 mL量瓶中，以流动相定容，为储备液。精密吸取储备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度。各进样20 μL。以峰面积(A)对浓度(C)作线性回归。结果见表2。表明3种成分峰面积与浓度呈良好的线性关系。

表2　3种成分的线性关系

成分

线性方程

r

线性范围/μg^.mL^-1

甲硝唑

C=3.4097A-1.1795

0.9998

20.0～100.0

氟康唑

C=29.9244A+2.6866

0.9994

40.1～200.6

氯霉素

C=2.6554A-0.9087

0.9998

39.9～199.6

2.5　回收率实验　根据处方比例精确配制样品霜剂。精密称取样品适量，在线性范围内，配制高、中、低3挡浓度。按样品测定项下操作。得平均回收率，结果(n=6)甲硝唑为100.4%，RSD为1.67%；氟康唑为98.31%，RSD为1.35%；氯霉素为98.17%，RSD为1.50%。
2.6　重现性实验　取回收率项下的1份溶液分别在日内(每隔1 h进样，进样6次)、日间(1，2，3 d)进样。记录峰面积。结果见表3。表明方法的重现性较好。

表3　日内及日间精密度(%)

成分

日内RSD(n=6)

日间RSD(n=3)

甲硝唑

0.34

1.23

氟康唑

1.02

1.66

氯霉素

1.06

2.00

2.7　样品含量测定　取3个批号样品，精密称取适量(约0.5 g)，置100 mL量瓶中，加50%甲醇约60 mL，在50～60 ℃水浴中振摇使溶解。再置冰水浴中冷却2 h，放至室温，加50%甲醇至刻度。摇匀，过滤，弃初滤液，取续滤液，进样20 μL。记录峰面积，外标法计算3种成分含量，测定结果见表4。

表4　样品含量测定结果(百分标示量，n=3)

样品

甲硝唑

氟康唑

氯霉素

1

97.3

102.4

99.4

2

103.1

98.1

98.0

3

98.4

96.3

98.7