HPLC测定心宁胶囊中葛根素含量

摘要　目的：采用HPLC测定心宁胶囊中葛根素含量，以控制该制剂的质量。方法：用十八烷基键合硅胶柱分离葛根素，以甲醇-水-磷酸(280∶720∶0.15)为流动相，检测波长250nm。结果：葛根素峰与其它组分峰的分离度大于1，理论塔板数以葛根素峰计算为8310；线性范围0.2～2μg(r=0.9999)；平均回收率99.4%，RSD=2.47%(n=5)。

结论：本法简便、快速，适用于该产品质量分析检验。

Determination of puerarin in Xinning capsule by HPLC assay

Wang Yonglin (Wang YL),Tao Ling (Tao L),Zhou Baozhu (Zhou BZ) (Department of pharmacy,Guiyang Medical College,Guiyang,550004)

ABSTRACT　OBJECTIVE:To domminate the quality of Xinning capsule,the contents of Puerarin in Xinning capsule was determined by HPLC.METHOD:Puerarin was separated on Spherisorb C₁₈ column and detected at 250nm,by using methanol-water-phosphoric acid (280∶720∶0.15)as mobile phase.RESULTS:The resolution was greater than 1. The number of theoretical plates calculaled for Puerarin peak was 8310;The standard curve was linear over the range of 0.2～2μg with the correllation coefficient 0.9999.The average recovery was 99.4% with RSD=2.47%(n=7).CONCLUSION:The method is simple and fast,and can be used for quantitative analysis of Xinning capsule.
KEY WORDS　Xinning capsule,puerarin,HPLC

　　心宁胶囊系由葛根、丹参等中药经提取加工制成的胶囊剂，具有补气活血、通脉镇痛的功能。临床用于治疗冠心病、心绞痛。药理试验研究及文献资料^［1～2］表明，葛根素是心宁胶囊中的主要有效成分。本实验采用HPLC对心宁胶囊中葛根素的含量测定方法进行了研究，结果表明，该法操作简便、快速、重现性好，可用于心宁胶囊的质量控制。

1　仪器与试药

　　LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外-可见分光光度检测器，C-R6A色谱数据处理机(日本岛津)。甲醇(色谱纯)、磷酸(分析纯)、葛根素对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用)。

2　方法与结果

2.1　对照品溶液的制备

　　精密称取葛根素对照品25mg，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；精密吸取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.2　供试品溶液的制备

　　取本品10粒的内容物，混匀，取约0.1g,精密称定，置25ml量瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理1h，放冷，称量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液离心作为供试品溶液。同法制备不含葛根的阴性样品溶液。

2.3　色谱条件

　　岛津Shim-Pack CLC-ODS色谱柱(0.15×6.0 Φ)；流动相：甲醇-水-磷酸(280∶720∶0.15)；流速：1ml/min;柱温：室温；检测波长：250nm(葛根素的最大吸收波长^［1～3］)。

2.4系统适用性试验

　　分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试液注入色谱仪，记录色谱(图1)，从图中可见葛根素峰保留时间约为12min，阴性样品图谱在葛根素峰位置处无假阳性峰，即本试液条件下葛根素峰与其它组分分离完全。理论塔板数以葛根素峰计算为8310，葛根素峰与其它组分峰的分离度大于1。

图1　心宁胶囊中葛根素HPLC图
A—对照品；B—供试品；C—阴性样品；1—葛根素峰

2.5　线性关系考察

　　精密吸取葛根素对照品溶液(0.1008mg/ml)2，4，6，8，10μl进样，记录色谱，以峰面积
(μv.s)对重量(μg)进行线性回归，回归方程为：c(μg)=4.986×10^-6A-9.35×10^-4(r=0.9999)拟合成过原点的方程为：c(μg)=4.9799×10^-6A，将一供试品溶液进样分析所得峰面积分别代入两方程计算，结果的相对偏差为0.005%， 由此可看出截距近似为零，故采用外标一点法计算含量。线性范围0.2～2μg。

2.6　精密度试验

　　取一供试品按供试品溶液的制备方法制备供试液，重复进样5次，RSD为0.8%。

2.7　重现性试验

　　取一供试品按供试品溶液的制备方法制备5份供试液，分别进样，RSD为0.85%。

2.8　回收率试验

　　采用加样回收，精密称取已测定含量的同一样品7份，分别精密加入葛根素对照品，按供试品溶液的制备方法制备供试液，进样，记录色谱，计算回收率。平均回收率为99.4%，RSD为2.47%。

2.9　样品测定

　　按供试品溶液的制备方法制备供试液，对照品溶液，分别进样，记录色谱，测定峰面积。测定了5批样品中葛根素含量，测定结果见表1。

表1　5批样品含量测定结果.n=3

批号

含量/g

RSD/%

970312

1.23

0.47

970419

1.35

0.82

970423

1.46

0.33

970508

1.41

0.51

970516

1.27

0.53

3　讨　论

3.1　葛根主要含黄酮类化合物(大豆苷、大豆苷元、葛根素等)、尿囊素、β-谷甾醇、胡萝卜苷、香豆素等成分^［4］，其中葛根素含量较高，文献报道^［5～6］不同产地、生长季节及品种含量差异较大，鉴于大生产中的原料受产地、来源、品种等因素的影响，使测定结果产生较大的差异，故对葛根药材中葛根素的含量作了限度规定，葛根素含量以(C₂₁H₂₀O₉)计，不得少于2.20%。

3.2　经稳定性试验考察，样品溶液在室温下(25℃)放置，每隔2h测定1次，5次测定的结果RSD为1.87%。说明样品液中葛根素含量在10h内稳定。

3.3　提取条件试验表明，选择不同浓度的乙醇、甲醇，在超声波浴中超声(功率125W)处理，结果基本相同(1.17±0.03)%。但乙醇作溶剂的供试液在色谱分离中柱效不如甲醇提取液好，由于流动相是甲醇体系，葛根素在柱中分离过程中乙醇有一定的展宽影响，甲醇则无此现象。故采用甲醇作溶剂超声处理提取分离样品中葛根素，具有操作简便、提取率高、杂质少等优点。含量测定方法的回收率、精密度高，重现性好。

作者单位：王永林　陶玲　周宝珠 (贵阳550004贵阳医学院药学系)

参考文献

　[1]　阴健，郭力弓.中药现代研究与临床应用(1).北京：北京学苑出版社，1993：626.
　[2]　王晓青，傅静.葛根的药理作用研究进展.北京中医药大学学报，1994，17(3)：39.
　[3]　中国药典一部.1995：630.
　[4]　江苏新医学院编.中药大辞典.上海：上海科学技术出版社，1994：2307.
　[5]　王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994：611.
　[6]　仲英，丁杏苞，左春旭，等.高效液相色谱法测定葛根不同季节葛根素的含量与质量.中草药，1992，23(6)：294.

(收稿：1997-12-05)