HPLC测定紫草中紫草素含量

　　紫草为紫草科植物新疆紫草［Arnebia euchroma (Royle) Johnst］、紫草(Lithospe rmum erythrorhizon Sieb.et Zucc)或内蒙紫草(Arnebia guttata Bunge)的干燥根，具有止血、抗炎、抗菌、抗病毒及抗癌作用。其主要有效成分为紫草素(shikonin)及其衍生物。有文献报道用紫外分光光度法及薄层扫描法测定紫草中的紫草素^［1］，本实验采用高效液相色谱法测定紫草中紫草素的含量，为紫草的质量评价提供准确的定量方法。

1　仪器和材料

　　Shimadezu液相色谱仪，包括：SPD-M10 υp型检测器，LC-10A υp型溶剂输送泵(日本岛津)。
左旋紫草素对照品(中国药品生物制品检定所)，紫草药材(市售)，甲醇为色谱纯，水为三重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2　实验方法和结果

2.1　色谱条件　色谱柱：Lichrosorb C₁₈柱(150 mm×4. 6 mm;5μm)；流动相：甲醇-水(75∶25)；流速：1.0 ml^.min^-1；检测波长：516 n m；柱温：室温。
2.2　线性关系　精密称取左旋紫草素对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.468 mg的溶液，作为对照品贮备液。分别精密吸取对照品贮备液0.2，0.4，0.6 ，0.8，1.0，1.2，1.6 ml置10 ml量瓶中，加甲醇定容，得浓度分别为0.0094，0.0187，0.0281，0.0374，0.0468，0.0562，0.0749 mg^.ml^-1的对照品溶液。在上述色谱条件下分别进样10 μl，记录峰面积。以对照品浓度c对峰面积A进行线性回归，得回归方程为：A=7896634.8c+7607.42,r=0.9997。结果表明，左旋紫草素在浓度0.009～ 0.075 mg^.ml^-1之间有良好的线性关系。
2.3　精密度试验　精密吸取紫草素对照品溶液(0.0468 mg^.ml^-1)10 μl连续进样6次，计算得方法的精密度RSD%为4.69%。
2.4　样品测定　精密称取紫草药材粉末(50目)约0.5 g，置250 ml锥形瓶中，加甲醇100 ml，振荡提取4 h，过滤，滤渣用甲醇淋洗3次，合并甲醇液，置水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10 ml，即得供试品溶液。用0.45 μm微孔滤膜过滤后，精密吸取10 μl进样分析，同时测定3批样品，结果每1g紫草药材中含紫草素分别为：0.122 4，0.2096和0.1670 mg。
2.5　回收率实验　精密称取已知含量的紫草粉末5 g，加入对照品溶液10 ml，挥干溶剂后，依“样品测定”项下操作。以加样回收率方法计算，结果见表1。

表1　回收率试验结果

　　紫草素及其衍生物属于萘醌色素类化合物，紫外法测得是紫草中总的色素含量，薄层色谱方法操作程序过多，影响因素不易消除。由方法学考察和实际样品测定结果可见，用HPLC测定紫草素的含量，方法简便、快速、准确、完全可以用于紫草药材的质量控制。■

作者单位：马瑛西安　西安医科大学第一临床医学院药剂科710061)
黄猛(西安　西安医科大学第一临床医学院药剂科710061)
王嗣岑(西安医科大学药学院)

参考文献：

［1］陈发奎主编.常用中草药有效成份含量测定.北京：人民卫生出版社，1998：732.

收稿：1999-05-11