摘 要 本文运用水提法提取了银杏叶中的黄酮,提取物经酸水解后,用HPLC-UV法进行定量分析,测得黄酮用本法提取的产量为1.78%(W/W)。
关键词 银杏叶;黄酮;水提法;HPLC
银杏(Ginkgo biloba L.)原产中国,本世纪60年代以来,关于银杏叶中有效成分及疗效的研究日益增多,已开发出药品、
保健品、
化妆品等多达100余种,形成国际市场上销售额20多亿美元的新兴产业［1］。黄酮类化合物是银杏叶的主要有效成分之一,含量占干叶的0.8%～3.5%,随品种、地理分布和季节变化而异［1～3］。银杏黄酮有强烈的清除细胞内自由基的作用,能降低细胞的氧化代谢,对脑和四肢动脉血流失调引起的一系列心脑血管疾病有明显和独特的疗效［4～8］。目前,银杏黄酮的提取方法有有机溶剂提取法、有机溶剂提取-树脂净化法和超临界CO２提取法等,这几种提取方法不是耗用大量的有机试剂、操作复杂,就是设备昂贵,不利于推广。
本文提出直接用水提取银杏叶中的黄酮,用HPLC-UV对黄酮的含量进行了定量,并把水提法的结果与经典的丙酮提取法的结果作了比较。水提法具有成本低廉、提取工艺简单的特点,对工业化生产具有重要的实际
意义。
1 试剂及仪器
银杏叶取自福建省长汀县,槲皮素(生化试剂,上海试剂二厂),丙酮、乙醇、HCl、磷酸(均
为分析纯,上海试剂公司),甲醇(色谱纯,上海试剂公司)。
Waters-510型高效液相色谱仪,带Waters 484型紫外可见分光检测器,检测波长360nm;Wate
rs300mm×4.6mm C18μBONDPAKTMPHENYL反相色谱柱;流动相为甲醇-水-磷酸
48.0∶51.5∶0.5(V/V)溶液,流速0.8 ml/min。
2 实验方法
2.1 槲皮素标准溶液的配制
准确称量槲皮素标准品10 mg,置于10 ml容量瓶中,以甲醇溶解并定容,是为储备液。以甲
醇稀释得0.004、0.012、0.020、0.028、0.036mg/ml系列工作溶液。
2.2 工作曲线的绘制
取槲皮素的系列标准溶液,用液相色谱-UV分析,以信号峰面积对浓度作工作曲线,得A=27
.363 C+0.0884,R2为0.9991。表明槲皮素在0.004～0.036mg/ml
范围内吸光度与浓度呈良好的线形关系。结果示于图1。
图1 槲皮素的标准工作曲线
2.3 银杏叶中总黄酮的提取与分析
2.3.1 水提法
取粉碎后的干银杏叶60 g,置于500 ml烧杯中,加入300 ml蒸馏水,煮沸4h,过滤,滤渣再
同法提取2次,合并3次滤液。加热浓缩至250ml,加入乙醇500ml,充分搅拌,离心分离。取
10ml上清液进行水解、定量,加入3 ml 25%(V/V)盐酸,90℃下加热回流30min以水解所提取
的黄酮。将该水解液定容至50ml,取5μl进HPLC,采用标准样品外标法定性和定量。
2.3.2 丙酮提取法
取粉碎后银杏叶8 g,置于烧杯中,加入含有60%(V/V)丙酮、3%(W/V)的(NH４)2SO4水
溶液160 ml,搅拌30 min,经3500r/min离心机离心20 min,收集上清液。取上清液水解并
定性定量(同水提法)。
图2 银杏黄酮水解产物的HPLC色谱图
1.槲皮素,2.山奈素,3.异鼠李素
2.4 总黄酮的计算
由于银杏的黄酮甙成分十分复杂,对照品不易得到,故一般不能直接测定其含量。黄酮甙的
甙元主要为槲皮素、山萘酚、异鼠李素。测银杏黄酮时,测的是其经酸水解的产物,即上述
3种甙元。本实验用槲皮素为对照品,以y=Σ(Q+K+I)×2.50换算成总黄酮甙量［9～10
］(其中Q、K、I分别代表槲皮素、山奈酚、异鼠李素),此计算结果略有偏差,但在山萘
酚和异鼠李素对照品极难得到的情况下,这仍是目前国内许多单位常采用的方法。
3 结果与讨论
3.1 银杏叶提取液中的黄酮
福建长汀的银杏叶经水提法提取后,提取液用酸水解,其中黄酮水解后3个主要甙元槲皮素、山奈酚、异鼠李素的HPLC色谱图见图2。槲皮素、山奈酚、异鼠李素3者在谱图中的保留时
间参照文献［11］进行确定。
另用经典的丙酮提取法提取同一样品,提取液酸解后的试样色谱图类同图2。
3.2 黄酮含量的计算和比较
根据图2中槲皮素、山奈酚、异鼠李素的峰面积,先把它们都当成槲皮素处理,分别从槲皮
素的标准工作曲线上求得各自的含量Q,K,I,再从黄酮甙-甙元计算公式y=2.50×(Q+K+I),计算黄酮含量。银杏叶含黄酮的百分含量,水提法和丙酮提取法的结果分别为1.78%(W/W)
、1.53%(W/W)。从实验结果可以看出,水提法与丙酮提取法相比,提取效率相当,甚至略高。
3.3 结语
水提法提取银杏叶中的黄酮,成本低廉,可避免使用有机试剂,操作简单,尤其可推广至乡
村企业。
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Extraction of flavonoid in Ginkgo biloba L.with water and its analy
sis with HPLC
Deng Yongzhi,Lin Qingmei,Li Quanlong,Yuan Dongxing
(College of Oceangraphy and Environmental Science,Xiamen University,Xiamen,Fuj
ian,361005,China)
Abstract
A method of extraction of flavonoid in Ginkgo biloba L. with water is intro
duced.The extracted flavonoid was hydrolyzed with HCl,and analyzed by HPLC
UV.The production of flavonoid in Ginkgo biloba L. was 1.78%(W/W).
Key words Ginkgo biloba.L;Flavonoid;Water extraction;HPLC
作者简介：邓永智(1969-),男,研究实习员,研究方向：海洋环境
厦门市夕阳红基金资助项目。
邓永智,林庆梅,李权龙,袁东星
(厦门大学海洋与环境学院,福建 厦门 361005)
作者：
邓永智，林庆梅,李权龙,袁东星 2007-5-18