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摘要 目的:为进行舒林酸人体相对生物利用度等研究,建立该药的人血清中舒林酸HPLC微量测定方法。方法:样品加甲醇混旋后,置 -20
℃以进一步使血清蛋白凝聚,离心后取上清液直接进样; HPLC柱长度为100 mm,填料为粒径3 μm的
C18,流动相为醋酸盐缓冲液-乙腈-甲醇(59∶12∶29),紫外检测波长为328 nm。结果:在0.05~12.0
μg.mL-1范围内线性关系良好,最低检测限为0.04
μg.mL-1,平均回收率为96.5% ~
101.3%(n=15)。HPLC分离过程需时12
min,舒林酸与其主要代谢物分离良好。用本方法测定了8位志愿者口服200 mg舒林酸胶囊后的血药浓度,得到了合理的血药浓度经时曲线。结论:方法简便、快速、准确,专属性强。 Rapid Analysis of Sulindac in Human Serum by HPLC Jiang
Lixia Abstract Objective:An
improved high performance liquid chromatographic method was developed for
the quantitative analysis of sulindac in human serum in order to examine
the relative in vivo bioavailability.Methods:Following vortex-mixing with
methanol, the sample was kept at -20 ℃ overnight for further
deproteinization, and centrifuged. A portion (20 μL) of the supernatant
was analyzed by HPLC on a column (10 cm ×5 mm) of Hypersil C18
(3 μm) with methanol-acetonitrile-acetate buffer (59∶12∶29) as mobile
phase , and detection at 328 nm.Results:Good separation of sulindac and
its major metabolite was achieved. Complete analysis took 12 min.
Calibration graphs were rectilinear in the range of 0.05~12.0
μg.mL-1, the detection limit was
0.04 μg.mL-1 and the recoveries
were 96.5%~101.3% (n=15). The method was applied to the determination of
sulindac in human serum. Conclusion:This method is rapid, simple and
accurate. 舒林酸(sulindac)为非甾体抗炎药物,主要用于风湿性关节炎、骨关节炎及僵直性脊椎炎等,与同类药相比,疗效好、副作用低,我国已有片剂新药上市,其它新剂型正在研究开发中。舒林酸的血药浓度测定方法有质谱法、同位素放免法、HPLC-紫外法[1~4]及HPLC-电化学法[5]。已报道的HPLC法常需梯度洗脱,样品提取过程繁复冗长,不仅耗资较多,且易导致结果不准确,需时亦长。本文研究了简便、准确的样品提取方法,并选用分离效率高、出峰快的HPLC短柱,配以三元流动相体系,经分析方法学验证,该法简便、快速、可靠,此外,用血量少、费用低廉。 1 仪器与试药 Waters
高效液相色谱仪,包括510泵,U6K进样器,484紫外检测器;岛津
C-R2AX色谱处理机。 2 色谱条件 色谱柱:100 mm×5.0 mm 不锈钢柱,填料为Hypersil C18,3 μm,(自填);流动相 :0.08 mol.L-1醋酸钠(用50%醋酸调pH为 6.0)-甲醇-乙腈 (59∶12∶29);流速:0.8 mL.min-1; 检测波长:UV 328 nm; 衰减:0.01 AUFS; 柱温:30 ℃。 3 样品处理 取血清0.2 mL于1.5 mL具塞离心管内,加入甲醇0.5 mL,密塞,涡旋30 s后,置-20 ℃过夜,离心(3 000 r.min-1)10 min,取上清液20 μL进样。 4 方法的验证 4.1 标准曲线绘制 取空白人血清,加入舒林酸对照品使浓度分别为0.05,0.15, 0.6,
1.5, 3.0, 6.0, 12.0 μg
.mL-1的标准系列溶液,按样品处理方法处理。以浓度C(μg
.mL-1)对峰面积A进行回归,得回归方程:(n=7) 表1 血清中舒林酸日内、日间测定的精密度分析(n=5) |
浓度/μg .mL-1 | 日内RSD/% | 日间RSD/% |
0.50 | 4.3 | 3.1 |
2.00 | 3.5 | 3.8 |
8.00 | 2.1 | 3.2 |
4.5 特异性 在所用的HPLC条件下,空白血清中内源性物质及舒林酸主要代谢产物对舒林酸的检测均无干扰,见图1。 |
图1 空白血清(A)、含药血清(B)及服药后4
h的 5 样品测定 8位健康志愿者空腹口服舒林酸胶囊200 mg,于服药前及服药后的0.5~12 h定时静脉取血,于1 h内避光分离出血清,并置-20 ℃储存。测定时按样品处理项下操作,每批测定前取精密度项下3种浓度的血清溶液作质控(QC)样品,并绘制标准曲线。测得的药时曲线见图2。 |
图2 8位受试者口服舒林酸200
mg后的 6 讨论 6.1 色谱柱类型 采用填料粒径为3
μm的短柱,分离效率高,出峰时间短。整个色谱过程需时12 min,而采用常规分析柱(5 μm,25 cm × 0.46
cm),欲达相同的分离度则需时20
min左右。 姜丽霞(浙江省医学科学院药物研究所 杭州 310013) 参考文献 1,Swanson Brian
N,Boppana Venkata D. Measurement of sulindac and its metabolites in human
plasma and urine by HPLC. J Chromatogr, 1981, 225 : 123 (本文于1999年2月11日收到) |