HPLC法对不同产地两头尖中皂苷D的定量分析

HPLC法对不同产地两头尖中皂苷D的定量分析

李勇　张惠　刘大有

摘　要　以两头尖皂苷D(raddeanoside D)为含量测定指标，采用HPLC法测定了产于黑龙江、吉林、辽宁、山东共10个药材中皂苷D的含量，分别为0.355 0%、0.321 3%、0.280 7%、0.219 6%，本法快速、简便、重现性好，为两头尖质量控制和评价提供了可靠的依据。
关键词　两头尖　皂苷D　HPLC　定量分析
　　中药两头尖为毛茛科银莲花属植物多被银莲花Anemone raddeana Regel的干燥根茎，首载于明代刘文泰所著《本草品汇精要》中，临床上具有“祛风湿、消痈肿”的作用，用于风寒温痹、四肢拘挛、骨节疼痛、疮痈溃烂［1］等症。两头尖皂苷D(raddeanosede D)为其主要活性成分［2］。药理研究表明皂苷D具有抗肿瘤、抗炎、镇痛、镇静、抑菌、溶血作用［3，4］。我们选用两头尖皂苷D为含量测定指标，对我国东北及山东四省产两头尖中皂苷D进行了HPLC法定量分析，为两头尖内在质量控制提供了科学依据。

1　仪器与试药

　　LC-6A高效液相色谱仪(日本)：包括LC-6A高压溶剂输送泵，SPD-6A紫外-可见检测器、CR-4A色谱数据处理机；两头尖皂苷D对照品由长春中医学院明兴药物研究室自制，经光谱鉴定，并经HPLC分析为单一峰，纯度为98.5471%；10个两头尖的产地和采集时间见表1，经长春中医学院邓明鲁教授鉴定为多被银莲花Anemon raddeana Regel的根茎。

2　方法与结果

2.1　色谱条件：色谱柱为Shimpack C18柱(4.6 mm×200 mm,5 μm)；流动相为甲醇-水(7∶3)；流速为1 mL/min；检测波长为207 nm；纸速为1.0 mm/min;灵敏度为0.30 AUFS。
2.2　标准曲线的制作：精密称取干燥至恒重的两头尖皂苷D对照品2 mg，加流动相溶解并定容至1 mL，作为对照品溶液。分别以2，4，6，8，10 μL进样测定，以皂苷D的峰面积积分值为纵坐标，皂苷D对照品的量为横坐标，绘制标准曲线，得一不通过原点的直线，其回归方程为：Y=38 747.9X-654.9，r=0.999 8。皂苷D标准品在4.0～20.0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.3　样品的测定：取两头尖于60 ℃烘干24 h，粉碎过60目筛。精密称取10种不同产地采集的两头尖样品各1.5 g，分别置于索氏提取器中，加甲醇回流提取4 h，提取液浓缩至干，残渣加少量水溶解，用乙醚萃取4次，乙醚层用水洗3次，合并水层，再用水饱和的正丁醇萃取5次，合并正丁醇层，减压浓缩至干。残渣用甲醇溶解，定容于10 mL容量瓶中，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，吸取5 μL进样测定，结果见表1和图1(略)。

2.4　加样回收率试验：精密称取已知皂苷D含量的吉林省桦甸产两头尖样品粉末1.5 g 3份，分别精密加入皂苷D对照品5 mg，按照样品测定项下方法进行处理，残渣用甲醇定容于5 mL容量瓶中，用0.45 μm微孔滤膜过滤后，测定，计算回收率，结果平均回收率：100.41%，RSD=0.83%。
2.5　精密度试验：在上述色谱条件下，对同一浓度的对照品溶液连续5次进样，得峰面积X为6 462，RSD为2.06%。
2.6　重现性试验：按照样品测定方法，对桦甸产两头尖样品进行5次平行试验，皂苷D的含量RSD为1.68%。
2.7　稳定性试验：在室温条件下，将样品溶液在1，2，3，4，12，24 h进样测定，含量不变，说明样品溶液在24 h内稳定。

3　讨论

3.1　我们曾对两头尖药材进行冷浸、渗漉、加热回流等提取方法的比较试验研究，结果以索氏提取器加热回流提取测得的两头尖皂苷D含量最高。
3.2　中药两头尖产于吉林、黑龙江、辽宁和山东四省，对我国四省产两头尖中皂苷D含量测定的结果表明，上述四省分布的两头尖有从南向北依次增高的趋势，这一结果是否与气候、土壤等因素的影响有关，有待进一步深入研究。■

国家“九．五”攻关项目“中药材质量标准规范化研究”资助项目
李勇：Address:Li Yong, Department of Chinese Materia Medica, Changchun College of 

Traditional Chinese Medicine, Changchun
李勇（长春中医学院中药系 130021）
张惠（长春中医学院中药系 130021）
刘大有（长春中医学院中药系 130021）

参考文献

1，中华人民共和国药典(一部).广州：广东科技出版社，1995：143
2，刘大有，等.中草药，1984，15(4)：34
3，刘大有，等.长春中医学院学报，1987，2(3)：58
4，Wang Benxiang, at al. J Traditional Chinese Medicine，1985,5(1):61