心痛宁胶囊中皂苷类成分TLC指纹图谱的研究

    关键词：心痛宁胶囊；指纹图谱；薄层扫描法
    摘要：目的：用薄层扫描法建立心痛宁胶囊中皂苷类成分的指纹图谱分析方法。方法：采用硅胶G薄层板，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)10℃以下放置过夜分层的F层溶液为展开剂．10％硫酸乙醇溶液喷雾显色：以人参皂苛Rg1为参照物。结果：共有5个共有斑点。结论：方法准确、可靠，可更好地控制心痛宁胶囊的内在质量。
    TLC fingerprint of Xintongning Capsules
    WANG Li—shu． HENG Dong—yan． LI Yang
    KEY WORDS：Xintongning Capsules；fingerprint；TLC
    ABSTRACT：AIM ：To set up a fingerprint analysis of Xintongning Capsules(Radix Notogenseng．．．．．．)by
TLC．METHODS： Silica gel G plate was adopted with developing underlayer of chlorofor-ethylacetate-methanol-water(15：40：22：10)under 10℃ resting overnight，10％solution of H2SO4 in ethanol sprayed with and ginsenosides Rb3 was used as standard substance．RESULTS：The result had 5 common spots．CONCLUSION：This method is accurate，reliable and provides a means for controlling the qualities of Xintongning Capsules．
    自国家药品监督管理局2000年颁布的《中药注射剂的指纹图谱的技术要求》以来，中药材及中药注射剂的指纹图谱的研究已经进入正轨。但国内现有的关于指纹图谱的研究几乎都采用HPLC及HPCE方法。心痛宁胶囊是我院新药中心开发研制的中药复方二类新药，三七总皂苷是其组分之一，我们以双波长薄层扫描法对心痛宁胶囊中皂苷类成分的指纹图谱进行了研究。
    1 仪器与试药
    CS-9310双波长薄层飞点扫描仪；硅胶G预制薄层板(青岛海洋化工厂生产)；心痛宁胶囊(自制)；人参皂苷Rg对照品购于中国药品生物制品检定所。所用试剂均为分析纯。
    2 方法与结果
    2．1 TLC色谱条件的确定
    2．1．1 展开剂、测定波长的选择
    以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)10℃以下放置过夜分层的下层溶液为展开剂，λs=530nm，λR=700nm。
    2．1．2 展开距离的选择
    曾采用lOcm×20cm薄层板，置于lOcm×20cm双槽层析缸中展开，但展开薄色色谱效果较用lOcm×lOcm薄层析差，故选用10cm×10em薄层板。
    2．1．3 显色方法的优选
    曾只以喷壶喷以10％硫酸乙醇溶液显色，由于可能导致不同Rf的斑点显色浓度不均，发现峰面积比值误差大，经采用以喷壶喷透薄层板效果较好(曾采用浸板显色，结果导致某些斑点显色后模糊)。
    2．2 供试品溶液的制备
    精密称取本品粉末150mg，加30mL水饱和正丁醇溶液超声提取5min，滤过，以5mL水饱和正丁醇洗涤滤瓶，合并滤液与洗液，以正丁醇饱和的1％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次25mL，弃去洗液。继以正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25mL，弃去洗液，分取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇定量转移于2mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
    2 3 参照物的选择及参照物溶液的制备
    心痛宁胶囊中的皂苷类成分中的单体皂苷以人参皂苷Rg1含量较高且薄层色谱分离效果较好。故选定为本指纹图
谱技术要求的参照物。
    精密称取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1mL含2.0mg的溶液，作为参照物溶液。
    2．4 测定法
    分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各4μL，距薄层板底边1.5cm处点于同一薄层板上，以展开剂展开，展距8.5cm，取出、晾干，同上法显色，记录从点样处至溶剂前沿的色谱扫描图，即得。以人参皂苷Rg1色谱峰(S峰)的展开位移(由薄层扫描仪检识并标出)和峰面积为1计算相对展开位移和相对峰面积比值。
    2．5 方法学考察
    2．5．1 精密度试验
    取批号为20010902的样品，按“供试品溶液制制备”项下方法制备供试品溶液，分别在同一薄层板及不同薄层板上重复点样，检测指纹图，结果表明各色谱峰的相对位移基本一致，单峰面积大于或等于10％总峰面积的色谱峰面积的比值基本一致，符合指纹图谱的要求。
    2．5．2 重复性实验
    取批号为20010902的样品，按“供试品溶液制备”项下方法制备5份供试品溶液，分别点样，检测指纹峰，结果表明各色谱峰的相对位移基本一致，单峰面积大于或等于10％总峰面积的色谱峰面积的比值基本一致，符合指纹图谱的要求，说明本方法重复性好。
    2．6 指纹图谱及技术参数
    2．6．1 共有指纹峰的标定
    根据10批样品的色谱图，发现其中有5个色谱峰是各批样品所共有的(峰3包括3’与3)，因此确定它们为共有指纹峰。10批样品中各共有指纹峰平均相对位移为0.72，0.86，1.18，1.42(峰3以主峰3标化相对位移)。
    2．6．2 共有指纹峰面积的比值
    根据10批样品的色谱图，结果确定需标定共有指纹峰面积的色谱峰为1、2、3(3+3’)、4，共10批样品中各共有峰与参照物峰的平均比值依次为0.58、0.47、0.85、0.88，依据[中药注射剂指纹图谱技术要求]中有关规定并根据本实验具体实际情况，限定各共有指纹峰与参照物峰面积的比值限度为(将各平均值上下浮动20％)1：2：S：3：4=(0.46～0.70)：(0.38～0.56)：1．00：(0.68～1.02)：(0.70～1.06)。