双波长薄层色谱扫描法测定蒲公英总黄酮含量

【摘要】  目的：建立蒲公英中总黄酮的含量测定方法。方法：应用双波长薄层色谱扫描法，以芦丁为对照品，测定波长λs=278nm，参比波长λR=356nm，测定蒲公英中总黄酮的含量。结果：回归方程为 Y=873851X+80.593，r=0.999，RSD=2.6％，蒲公英总黄酮含量为4.236%。结论：用该方法测定蒲公英中总黄酮的含量，操作简便，结果可靠，重复性好。

【关键词】  双波长薄层色谱扫描法　总黄酮　芦丁

　　蒲公英属菊科类为植物蒲公英，是常用的中药类抗菌、抗真菌的药物，具有清热解毒、利胆保肝、医治乳痈疔疮等药理作用。主要成分含有蒲公英甾醇、绿原酸、总黄酮等成份，现已制成注射剂、片剂、糖浆等不同剂型，广泛应用于人与畜各科多种感染性炎症，均有良好疗效。这种中草药价廉物美，药源丰富，应当进一步开发，做到物尽其用。针对其总黄酮的含量，我们采用双波长薄层色谱扫描法对其进行测定，现报道如下。

　　1  仪器与试剂

　　1.1  仪器

    CS930型双波长飞点式薄层扫描仪（日本岛津）；高硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂生产）；旋转蒸发仪RE52A型（上海亚荣生化仪器厂）；5ul微量进样器（上海医用激光仪器厂）。

　　1.2  试剂

    芦丁对照品（中国药品生物制品检定所）；蒲公英（产地为内蒙，由内蒙古成大方圆有限公司饮片分装）；其它试剂均为分析纯。

　　2  薄层分析与鉴定

　　2.1  对照品溶液的配置［1］

    精密称取芦丁对照品25mg，置50ml容量瓶中，以85%乙醇溶解并加至刻度，精密吸取10ml置20ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度， 摇匀，备用。

　　2.2  供试品溶液的制备

    精密称取内蒙蒲公英（提前粉碎研磨成细粉）10g，用13倍量药材的85%乙醇加热回流2次，每次1小时［2］，回收蒸发乙醇至干（旋转蒸发仪），残渣加入50ml热水溶解，先用石油醚（50，50，30ml）萃取3次，要下层液（除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素），再用正丁醇（50，50，30ml）萃取3次，要上层液（除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质），合并正丁醇提取液用85%乙醇30ml溶解，过滤至50ml容量瓶中，再用85%乙醇洗涤滤纸至刻度，摇匀。精密量取10ml置20ml容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，备用。

　　2.3  分离与鉴定

    分别取供试品溶液和对照品溶液各6ul，点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯甲酸水（体积比8：1：1）为展开剂展开［3］，取出，晾干。

　　3  含量测定

　　3.1  扫描条件［4］

    反射锯齿扫描，测定波长为λs=278nm，参比波长λR=356nm，背景校正ON，灵敏度中，狭缝1.2mmⅹ1.2mm，SX=3。

3.2  标准曲线制备

    取芦丁对照品溶液，以不同点样量（2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ul）点于同一硅胶G板上，相同展开剂展开，取出，晾干后进行扫描，以峰面积积分值为纵坐标，点样量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=873851X+80.593，r=0.999。

　　3.3  样品测定

    取供试品溶液和对照品溶液各6ul点于同一硅胶G薄层板上，按相同薄层层析条件展开，扫描测定的结果，供试品溶液的峰面积积分值为2301.454，测得量为0.00254mg，按药材计算，总黄酮含量为0.4236%。

　　3.4  精密度测定

    精密吸取同一样品溶液6ul，同板点5个点，依照薄层层析的条件醋酸乙酯甲酸水（8：1：1）展开，扫描测得其峰面积积分值分别为2488.456、2602.963、2578.821、2644.531、2499.685 ，其平均值为2562.8912，RSD=2.6%。

　　3.5  回收率测定

    精密称取蒲公英用品1g，共15份，同2.2项下的操作一样，精密吸取供试品溶液1.5ml，5份为1组，共3组。按低、中、高分别加入芦丁对照品溶液0.8、1.6、2.4ml，各自混匀，加60%乙醇定容至5ml，取6点样，展开，晾干，扫描测定结果见表1。表1  回收率测定结果（略）

　　4  讨论

    我们探讨了蒲公英黄酮类物质含量的测定方法，并发现蒲公英中含有丰富的黄酮类物质。在预实验中曾做过用70%乙醇和用50%乙醇提取，提取3次，每次30分钟，结果其提取效率很低。在流动相的选择上我们用文献报道［3］的方法分离效果好，配制简单，所以没有尝试自拟的流动相。对于其药材的质量控制，本实验采用双波长薄层扫描法测定蒲公英中总黄酮含量，方法简便，准确快速。

【参考文献】
  　　1 金京玲，金南革，金永目，等.蒲公英总黄酮含量测定.延边大学医学学报，2001，24（2）：100～102.

　　2 马丽春, 魏凤玲.蒲公英提取工艺优选. 中国中药杂志, 2005 ，30（13）：995～997.

　　3 刘景东, 钱彦丛，等. 薄层扫描法测定槐叶总的芦丁含量. 黑龙江医药, 2003，16（1）：17～18.

　　4 常军民，高宏，王青，等. 双波长薄层扫描法测定天山大黄中大黄素的含量.新疆医科大学学报，2003，26（16）： 601.