薄层扫描测定金虎保肝颗粒中大黄素的含量

     摘要：目的：测定金虎保肝颗粒中大黄素的含量：方法：采用薄层扫描法进行测定。结果：3批样品中大黄素的含量范围为4.34～4.50mg/袋，平均回收率为98.7％，RSD=1.15％。结论：本法简便、准确、灵敏、重现性好，可用于该制剂的质量控制。
     关键词：金虎保肝颗粒；虎杖；大黄素；含量测定；薄层扫描法
     金虎保肝颗粒是正在研制的新药，具有清热保肝之功效：本品由虎杖、茵陈等l0味中药组成；虎杖是本方剂的君药，其所含大黄素及其苷类是清热保肝的主要有效成分 ，为制定本制剂的质控标准，参照有关文献。 ，建立了本品中大黄素的含量测定方法，现报道如下。
     1 仪器与试剂
     CS-9301型薄层扫描仪(日本岛津公司)，定量毛细管(美国Drummond公司)，薄层铺板仪(重庆新力试验电器厂)，硅胶G(青岛海洋化工厂)，石油醚、盐酸、冰醋酸、氯仿等所用试剂均为分析纯；大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号756—9204)。金虎保肝颗粒样品(批号20010305、20010317、20010326，均由本课题组研制)，虎杖及制剂所用药材均购于济南市建联药材供应站，经鉴定虎杖为蓼料植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb．et Zuce．)的干燥根茎和根，适当粉碎后备用。
     2 方法与结果
     2．1 水解时间的确定
     称取本品粉末约1g，精密称定，共称取3份。加蒸馏水50ml，滴加盐酸5ml，混匀，加入氯仿50ml，分别水浴水解1，2，3h，按供试品溶液的制备方法，制备各不同水解时间的样品液，定容至l0ml，吸取相同体积的各样品液点样测定，结果发现水解1h样品中大黄素的测定值偏低，而水解2h和3h样品的测定值基本相同，表明样品水解2h即可水解完全，故水解时间确定为2h。
     2．2 供试品溶液的制备
     取本品适量，研细，取1g，共3份，精密称定，加蒸馏水50ml，滴加盐酸5ml，加入氯仿50ml，水浴回流水解2h，吸出氯仿液，再加入氯仿(50，30m1)同上回流2次，每次0.5h，吸出氯仿液，合并3次氯仿液，以50ml水洗涤，弃去水液，回收氯仿，残渣以无水乙醇定容至l0ml量瓶中，备用。
     2．3 虎杖药材液的制备
     取虎杖药材粉末0.5g，精密称定，按供试品液的制备方法制成虎杖药材溶液l0ml，备用。
     2．4 大黄素对照液的制备
     取大黄素对照品适量，用甲醇制成每1ml含大黄素0.2mg的溶液，作为对照品溶液。
     2．5 缺虎杖空白液的制备
     按处方比例，准确称取除虎杖外的其它药材，模拟样品的制备和供试品液的制备方法制成缺虎杖空白液l0ml。
     2．5 薄层色谱条件的选择
     层析板：0.3％CMC硅胶G板(20cm×20cm×0.4mm)，105℃活化30min置干燥器内备用。展开剂：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(15：1.5：1，V／V)，依法点样展开，结果样品、虎杖、大黄及对照品在相应位置上，有黄色斑点，阴性对照液无干扰。
     2．6 样品含量测定
     2．6．1 测定波长的选择 对供试品及大黄素经层析后于370～600nm下进行扫描确定，画出吸收曲线图，测得最大吸收波长=445nm，参比波长=600nm。
     2．6．2 测定条件采用双波长锯齿扫描，测定波长=5nm，参比波长=600nm，狭缝0.4mm×0.4mm，线性化参数S=3，外标两点法测定。
     2．6 3 空白干扰试验分别取供试液2μl，大黄素对照品溶液3μl，缺虎杖空白溶液2μl，点于同一薄层板上，依法展开，取出，描绘吸收曲线，结果供试品和大黄素在445nm处均有最大吸收峰，而缺虎杖空白溶液在与对照品相应的位置上无吸收峰出现。
     2．6．4 线性关系考察 精密吸取大黄素对照液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0μ1分别点于同一薄层板上，按选定的色谱条件展开后进行扫描测定，以点样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明大黄素在0.2～1.6μg范围内与峰面积呈良好线性关系，回归方程为：Y=2938.9X+563.8，r=0.9990。
     2．6．5 精密度试验
     2．6．5．1 同板精密度试验 准确吸取同一批拱试品液2μl，对照品溶液3μl，于同一薄层板上各点5个相同量的点，依法测定，结果RSD分别为1.0％和1.59％
     2．6．5．2 异板精密度试验 准确吸取同一批供试品液2μl，对照品溶液3μl，分别点于5块薄层板上，依法测定，结果RSD分别为1.28％和2.16％ 。
     2．6．6 斑点稳定性试验 将层析后的供试品及对照品每隔20min测定1次，连续测定6次。结果表明，大黄素在2h内斑点颜色较稳定，峰面积基本不变。
     2．6．7 重复性试验 取同一批样品约1.0 g，精密称定，共称取6份，依法制备各供试品溶液，结果6次测得样品的平均含量为4.64mg/g。RSD：1.51％。
     2．6．8 回收率试验 称取已知含量的金虎保肝颗粒粉末约0.5g，精密称定，共5份，各加人大黄素对照品2.260 mg，按“供试品液的制备”项下制备依法测定各试验液中大黄素的含量。
     2．6．9 样品的测定 分别准确吸取3批供试品液各2μl和虎杖药材液1μ1，点于同一块薄层板上，依法测定各批金虎保肝颗粒中大黄素的含量。
     3 讨论
     试验中发现点样量、薄层板厚度、层析温度对样品中大黄素的分离都有较大影响。通过对上述3种条件的筛选发现，点样量大于1.6μg，层析板厚度小于0.4mm，温度高于30℃时都易产生不同程度的拖尾。
     本试验采用氯仿提取液回收后直接点样测定，方法简便，灵敏度高，重现性好，是控制本品质量的较理想方法。
参考文献
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2 王浴生，邓文龙．中药药理与应用[M]．北京：人民卫生出版社．1983，672
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