气相色谱法同时测定蔬菜及水果中多种农药残留量

　　【摘要】  建立了蔬菜中乙草胺、甲草胺、苯氧菊酯、多效唑、环氟菌胺、氟虫腈、咪唑菌酮、氯菊酯、氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、高效氰戊菊酯、丙炔氟草胺、茚虫威残留量气相色谱同时分析方法。采用分散固相萃取技术，在提取液中加入C18、石墨炭黑、PSA等吸附剂粉末进行净化，根据检测器选择溶剂置换，采用DB1701毛细管柱分离，μECD检测。13种农药的浓度范围在0.002～0.05 mg/kg时，回收率在80%～100%之间、RSD为1%～6%。各农药的检出限为：氟虫腈、环氟菌胺0.002 mg/kg；苯氧菊酯、甲草胺、乙草胺0.004 mg/kg；多效唑、咪唑菌酮、氯菊酯、氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、高效氰戊菊酯、丙炔氟草胺、茚虫威0.01 mg/kg。该方法步骤简单，净化效果好，具有良好的灵敏度、回收率和重现性。

　　【关键词】  分散固相萃取 气相色谱法 蔬菜 农药残留

　　Determination of Different Kinds of Pesticide Residues in　Vegetable by GasＣhromatography

　　ZHU LiPing, ZHU  Tao ,  PAN YuXiang, SUN Jun, DONG Jing

　　1(Weifang Import & Export Inspoction and Ｅntry and Ｅxit Ｉnspetion and Ｑuaratine Ｂureau, Weifang 261041)

　　2(Jining Import & Export Inspoction and Ｑuaratine Ｂureau, Jining 272025)

　　Abstract  A method was developed to analyze alachlor, acetochlor, fipronil, paclobutrazol, fenamidone, cyflufenamid, kresoximmethyl, flumioxazin, indoxacarb, permethrin, betacypermethrin, cyfluthrin and esfenvalerate in vegetable by GC. In the purified process C18, graphite carbon black, primary secondary amine (PSA) and solvent transformation were used. In the range of 0.002－0.05 mg/kg, recoveries (n=6) of the pesticides were 80%－100%，with RSD of 1%－6%. The limits of detection for fipronil and cyflufenamid were 0.002 mg/kg, for kresoximmethyl, alachlo, acetochlor were 0.004 mg/kg，  paclobutrazol, fenamidone, permethrin, cyfluthrin, betacypermethrin, esfenvalerate, flumioxazin and indoxacarb were 0.01 mg/kg.The method has the advantage of simplicity, repeatability, and sensitivity.

　　Keywords  Dispersivesolid phase extraction, gas chromatography, vegetable, pesticide residues

　　1  引  言

　　农药残留和食品安全问题在国际社会受到广泛关注，食品农产品的农药残留检测项目日益增多、限量要求日益严格。在分析仪器高度发展的今天，样品的处理技术在农药残留分析中占据越来越重要的位置。现在的前处理技术多采用自制填充柱、SPE小柱或基质固相分散技术[1,2]。采用填充柱净化法和基质固相分散技术费时并消耗大量的有机试剂；采用SPE小柱净化，经常多种结合使用，导致成本较高。2003年美国农业部提出了分散型固相萃取技术[3]，关于此净化方法，现有文献[ 4～6]中大部分只采用PSA净化，PSA吸附剂具有弱的阴离子交换能力，有利于吸附样品基质中的有机酸、糖以及色素，但对于基质复杂的蔬菜净化效果并不太理想。本方法在实验的基础上创新性的增加了C18、石墨炭黑等吸附剂粉末同时净化，根据气相色谱μECD检测器进行溶剂转溶，实现了对基质复杂的蔬菜中乙草胺、甲草胺、苯氧菊酯、多效唑、环氟菌胺、氟虫腈、咪唑菌酮、氯菊酯、氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、高效氰戊菊酯、丙炔氟草胺及茚虫威等多种农药残留的快速检测。

　　2  实验部分

　　2.1  仪器和试剂

　　Agilent6890N气相色谱仪，配μECD检测器、自动进样器；涡流混匀器（IKA公司）；研磨机（德国GM公司）；离心机（中国安亭公司）；电子天平（梅特勒公司）；均质器（IKA公司）。乙草胺、甲草胺、苯氧菊酯、多效唑、环氟菌胺、氟虫腈、咪唑菌酮、氯菊酯、氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、高效氰戊菊酯、丙炔氟草胺、茚虫威等农药标准品（Dr.公司的有证标准物质）；正己烷、丙酮、乙腈均为色谱纯；冰醋酸：优级纯；无水乙酸钠：分析纯；无水硫酸镁：分析纯（500 ℃马弗炉内烘5 h，冷却取出装瓶备用）； PSA粉； C18粉；氨基粉（NH2）；石墨碳黑粉；0.1%冰醋酸/乙腈溶液（移取1 mＬ冰醋酸加入1000 mL乙腈混匀）。

　　2.2  实验方法

　　2.2.1  标准工作液的配制

　　称取乙草胺、甲草胺、苯氧菊酯、多效唑、环氟菌胺、氟虫腈、咪唑菌酮、氯菊酯、氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、高效氰戊菊酯、丙炔氟草胺、茚虫威标准品各10.0 mg, 用丙酮溶解后，置于13个100 mL棕色容量瓶中，并用丙酮定容至刻度，混匀，浓度分别为100 mg/L，分别移取以上标准液氟虫腈、环氟菌胺 (A组)各1.0 mL,甲草胺、乙草胺、苯氧菊酯（B组）各2.0 mL, 多效唑、咪唑菌酮、氯菊酯、氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、高效氰戊菊酯、丙炔氟草胺、茚虫威（C组）各5.0 mL置于100 mL棕色容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，A组、Ｂ组和Ｃ组标准溶液浓度分别为1．０、２．０和５．０ mg/L。

　　2.2.2  样品制备及提取、净化

　　称取样品适量，置于100 mL塑料离心管中，加入0.1%醋酸/乙腈溶液10 mL，正己烷5 mL，无水硫酸镁5.0 g,无水乙酸钠2.0 g，用玻璃棒充分搅拌均匀，于均质机上高速均质2 min， 5000 r/min高速离心8 min，移取全部上清液于15 mL塑料离心管中，氮气吹干，准确加入0.1%醋酸/乙腈+正己烷溶液（1+1）2 mL溶解残渣,1400 r/min涡漩混合2 min，溶解液转移入盛有适量PSA、C18粉、石墨碳黑粉的离心管中。以1400 r/min涡漩混合2 min 离心。取上清液1 mL，置于离心管中氮吹至近干，用正己烷溶解，定容至1 mL，过0.22 μm滤膜，供GC测定。若样品为含硫醚类化合物蔬菜[7,8] 如葱、蒜苔等，根据样品情况切块或切段，采用格兰仕微波炉中火加热30 s，样品再打碎称取适量进行提取及净化。

　　2.2.3  色谱条件

　　DB1701毛细管柱 (30 m×0.32 mm， 0.25 μm)；载气：高纯氮，纯度＞99.999%；柱温：60 ℃（1.25 min）20 ℃/min180 ℃(7 min)（10 ℃/min）230 ℃（7 min）（10 ℃/min）270 ℃（15 min）；柱流速：1.4 mL/min，恒流；进样口温度：250 ℃;检测器： μECD；检测器温度：300 ℃；进样量： 1 μL。

　　3   结果与讨论

　　3.1  吸附剂粉末的优化选择

　　在相同混标溶液中分别加入PSA、石墨碳黑、C18、氨基粉等不同的吸附剂粉末处理，每组6个平行样，所得的回收率数据见表1，石墨炭黑粉等去除色素等杂质的效果好，但是对茚虫威吸附较强、用量要适量，氨基粉与PSA净化效果相同，但氨基粉对多种农药的吸附性均较强，C18和PSA对上述13种农药回收率影响较小。所以本实验选择PSA、石墨碳黑、C18为吸附剂加强净化效果。表1  13种农药的混合标准品分别经4种吸附剂处理后的回收率（略）

　　3.2  13种农药在不同基质中的回收率

　　吸附剂粉末的用量也是影响前处理效果的重要因素，应根据样品情况和目标物性质通过实验选择合适的吸附剂用量。对于蔬菜样品吸附剂粉末用量范围一般为：PSA粉100～200 mg、C18粉100～200 mg、石墨碳黑50 mg。方法中样品为菠菜、黄桃、胡萝卜，样品色素重，如果仅采用PSA，色素及干扰物去除效果不理想，净化液颜色较深、干扰峰多、基线高，结果难判断及定量（图1a）。所以实验采用150 mg PSA、 150 mg C18、石墨碳黑粉50 mg，净化效果较好，净化液呈浅色或无色，目标峰附近无大干扰峰（图1b），添加回收率见表2（浓度为0.01 mg/kg）。表2  13种农药（浓度均为0.01 mg/kg）在胡萝卜、黄桃、菠菜样品中的回收率（略）

　　3.3  13种农药的保留时间、线性范围、相关系数及检出限

　　取系列浓度的混合标准工作液，依次进样，以色谱峰面积对浓度作标准曲线，得13种农药的线性方程及相关系数，在0.05～10 mg/L之间线性关系良好（见表3）。表3  13种农药保留时间、线性范围、相关系数和检出限（略）

　　3.4  方法回收率、精密度

　　在已知不含农药残留的菠菜样品中分别加入不同浓度的混合标准工作液(A、B、C ３组的混标溶液)，按本方法进行提取、净化和检测，以峰面积计算各种农药在0.002 ～0.05 mg/kg 添加水平的回收率（同一水平样品组n=6），计算各农药的平均回收率及相对标准偏差(见表4)，标准品谱图见图2（0.1 mg/L）、添加回收谱图见图4（0.01 mg/kg）, 氟氯氰菊酯 、高效氯氰菊酯在本实验中所采用的DB1701的色谱柱上不能完全分离，但在DB5色谱柱上可完全分离。方法检出限为：氟虫腈、环氟菌胺均为0.002 mg/kg;苯氧菊酯、甲草胺、乙草胺均为0.004 mg/kg；多效唑、咪唑菌酮、氯菊酯、氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、高效氰戊菊酯、丙炔氟草胺、茚虫威均为0.01 mg/kg，完全满足蔬菜中农药残留量的检测要求。表4  13种农药的回收率实验结果（略）

　　3.5  小结

　　本方法用分散型固相萃取气相色谱法对蔬菜中的乙草胺、甲草胺、苯氧菊酯等13种残留进行检测。根据蔬菜样品情况及目标物性质选择多种吸附剂粉搭配使用，并对其用量进行实验确定。此净化方法减少了杂质干扰，色谱峰分离度好，具有良好的精密度及较低的方法检测低限。通过对100批样品的检测和协作实验室验证了本方法的实用性。

　　【参考文献】

　　1 Shen ZhongLan(申中兰), Cai JiBao(蔡继宝), Gao Yun(高 云), Zhu XiaoLan(朱晓兰), Su QingDe(苏庆德). Chinese J. Anal. Chem.(分析化学)， 2005, 33(9): 1318～1320

　　2 Zhu XueLiang(朱学良), Qi XiangYang(戚向阳), Yue JingNian(岳晶念), Lei WenJun(雷文俊). Chinese J. Anal. Chem.(分析化学)， 2007, 35(2): 259～262

　　3 Lehotay S J， Matovská K， Yun S J. J. AOAC Inter., 2005, 88: 630

　　4 Hu XiZhou (胡西洲), Cheng YunBin(程运斌), Hu DingJin(胡定金). China Measurement Technology(中国测试技术)， 2006, 5,32(3): 132～133

　　5 Chen ShuShu (陈舒舒)， Xu Kai(许 凯), Xu YanJun(徐彦军), Pan ChanPing(潘灿平). Journal of Safety and Environment(安全与环境学报), 2006, 4, 2(6)： 92～95

　　6 Hu XiZhou (胡西洲), Cheng YunBin(程运斌), Hu DingJin(胡定金). Modern Agrochemicals(现代农药)， 2006, 8,5(4): 24～29

　　7 Wang JianHua(王建华), Zhang YiBing(张艺兵), Tang ZhiXu(汤志旭), Liu XinTong(刘心同). Journal of Instrumental Analysis(分析测试学报)， 2005， 24（1）： 100

　　8 Jiang Jun(姜 俊), Li An(李 安), Li HaiＹan(李海燕), Tong KeXing(佟克兴), Zhou LiLi(周立立), Zhou HuiMin(周慧敏), Zhao Tong(赵 彤). Chinese Journal of Chromatography(色谱), 2007， 25（3）： 395～398