高效液相色谱法测定蝎宝胶囊中阿魏酸的含量

　　【摘要】  目的建立测定蝎宝胶囊中阿魏酸含量的高效液相色谱法。方法采用VP-ODS（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱，以乙腈-1%冰醋酸溶液 (25∶75) 为流动相，流速为1 ml/min，检测波长：313 nm。结果阿魏酸在2.5～25 μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度线性关系良好，相关系数r=0.999 8，加样平均回收率为99.43%，RSD=2.15％(n=6)。结论该法简便，准确，可用于蝎宝胶囊中阿魏酸的含量测定。

　　【关键词】  蝎宝胶囊；阿魏酸；高效液相色谱法

　　Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of Ferulic acid content in Xiebao capsule.MethodsSamples were determined by RP-HPLC on a VP-ODS column(250 mm×4.6 mm,5 μm) with a mixture of acetonitrile-1% acetic acid (25:75) as mobile phase at the flow velocity of 1 ml/min and UV detection at 320nm. ResultsThe calibration curves of Ferulic acid was linear from 2.5 to 25μg/ml (r=0.999 8, n=6), the average recovery and RSD were 99.43% and 2.15% (n=6) respectively. ConclusionThe method is simple and accurate. It can be used for determination of Ferulic acid content in Xiebao capsule.

　　Key words：Xiebao capsule;  Ferulic acid;  HPLC

　　蝎宝胶囊是我院研制的胶囊剂，由全蝎、当归、没药等组成，具有增强免疫, 延长荷瘤小鼠生存期的作用，临床拟用于各种肿瘤的辅助治疗。本实验采用高效液相色谱法对其中的活性成分阿魏酸进行含量测定，以控制其质量。现报道如下。

　　1 仪器与试药

　　LC-10ATvp 高效液相色谱仪，CLASS-VP Ver 6.12 SP1工作站（日本岛津公司）；电子PHS-3F酸度计（上海电子光学技术研究所）；BP211D电子天平（德国赛多利斯公司）。阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，编号0773－9910,含量测定用）；蝎宝胶囊（自制）；乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱为VP-ODS 柱（250 mm×4.6 mm,5 μm），流动相为乙腈-1%冰醋酸溶液 (25∶75)，流速1 ml/min,柱温40℃，检测波长313 nm，进样量20 μl。各样品色谱图如图1。

　　2.2 线性关系考察

　　精密称取阿魏酸对照品2.5 mg，置50 ml的容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取储备液0.5，1，2，3，4，5 ml，分别置于10 ml的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得含阿魏酸2.5，5，10，15，20，25 μg/ml的对照品溶液，分别取20 μl进样，测定峰面积，以阿魏酸浓度对峰面积进行线性回归，得回归方程：Y＝5.230×107X＋5.107×105，r＝0.999 8，线性范围为2.5～25 μg/ml。
　　2.3  精密度实验在上述色谱条件下，取10 μg/ml的对照品溶液，重复进样6次，峰面积得RSD（日内）为0.44%，RSD（日间）为0.70%，精密度良好。

　　2.4 重复性实验

　　取样6份，按“样品测定”项下方法测定含量，结果测得平均含量为23.18 μg/粒，RSD为1.74％。

　　2.5 回收率实验

　　精密称取已知含量(74.17 μg/g)的蝎宝胶囊内容物6份，分别加入阿魏酸对照品溶液200，250，300 μg，混匀，照样品测定方法操作，计算回收率。结果见表1。表1  加样回收率实验结果（略）

　　2.6 样品测定

　　2.6.1  对照品溶液的制备

　　取阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含10 μg的溶液，即得。

　　2.6.2 供试品溶液的制备

　　取本品内容物3.2 g，精密称定，加0.5%碳酸钠溶液20 ml，超声处理30 min，提取液置离心管中，离心10 min(3 000 r/min)，分取上清液，沉淀用0.5%碳酸钠溶液洗涤3次，10 ml/次，合并上清液和洗涤液至分液漏斗中，用2%氯化钠溶液饱和的乙醚洗涤3次，20 ml/次，弃去乙醚液，水溶液用盐酸调pH至1～2，再用2%氯化钠溶液饱和的乙醚振摇提取4次(25，25，20，20 ml)。合并乙醚液，低温挥干，残渣用甲醇溶解并转移至25 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

　　2.6.3 测定法

　　分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

　　结果3批样品含量分别为17.05，28.23，20.40 μg/粒。

　　3 讨论

　　由于本制剂中成分复杂，提取时采用调溶液pH值萃取尽可能除去水溶性杂质；而且采用超声波提取，提取效率最高，回收率好，并且操作简单。

　　阿魏酸是当归的活性成分，其性质不稳定，遇光受热或在溶液中久贮均易分解。阿魏酸的性质虽然不稳定，但严格控制测定条件，特别是注意避光，可以保证测定结果的准确性。