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【摘要】 目的建立以高效液相色谱法测定双参龙胶囊中人参皂苷 Re含量的方法，改进原含量测定方法。方法色谱柱为supelcosiltmlC18，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液进行梯度洗脱，检测波长为203 nm ，流速为1.0 ml/min ，柱温为室温，进样量为10 μl 。结果人参皂苷Re进样量在0.45～4.5 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好（r＝0.999 1），平均回收率为96.81 %(RSD =1.08%) 。结论 该方法简便、快捷、专属性强、重现性好，克服了原薄层扫描法背景干扰较大、重复性较差等缺陷，可用于双参龙胶囊的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法 双参龙胶囊 人参皂苷 Re
Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of gingsenoside Re in Shuangshenlong capsule, improve the original method of TLCS. MethodsHPLC was performed on supelcosiltmlC18 column at room temperature，the mobile phase consisted of acetonitrile - 0.1% phosphoric acid solution with gradient elution，the detection wavelength was 203 nm with flow rate 1.0 ml / min and sample size 10 μl. ResultsGinsenoside Re was linear with the peak area in the range of 0.45～4.5 μg(r2＝0.999 1)，the average recovery was 96.81 %(RSD =1.08%).ConclusionThe established method is simple，reliable， reproducible, and it improves the shortcomings of the strong background interference and the bad repetibility ect. It can be used for the quality control of Shuangshenlong capsule.
Key words：HPLC ； Shuangshenlong capsule； Gingsenoside Re
双参龙胶囊是国家药品监督管理局颁布的国家药品标准品种，其标准［标准编号：WS-10218（ZD-0218）-2002］对方中西洋参的人参皂苷 Re（C48H82O18）进行了含量测定，但其采用的是薄层扫描（TLCS）法，背景干扰较大，重复性较差。而2005版《中国药典》［1］西洋参中人参皂苷 Re采用的是高效液相色谱（HPLC）法，为此我们对其进行了改进，拟采用HPLC法测定其含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Shimadzu LC 2010高效液相色谱仪，CLASS-VPVER6数据处理软件。PE-λ16紫外分光光度仪；ES-110S电子分析天平（Start Rius，精确到0.001）。
1.2 试药
双参龙胶囊（购自青海省格拉丹东药业有限公司）；人参皂苷 Re（中国生物制品检定所）；其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱：supelcosiltmlC18 （ 25 mm×4.6 mm，5 μm ）。流动相［1，2］：以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203 nm；流速1.0 ml/min。理论塔板数按人参皂苷Re峰计算应不低于5 000。
2.2 检测波长的选择取人参皂苷Re对照品溶液，照分光光度法［1］，在200～500 nm波长范围内进行扫描，结果人参皂苷Re在203 nm波长处有最大吸收，可作为HPLC法测定双参龙胶囊中人参皂苷Re含量的检测波长。紫外扫描图谱见图1。
2.3 供试品溶液制备方法的选择［3,4］
2.3.1 取本品50粒，取内容物，精密称定，研细，取10 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 ml，称定重量，加热回流1 h，立即冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25 ml，蒸干，残渣加水40 ml使溶解。用乙醚振摇提取3次，30 ml/次，弃去乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取4次（30，30，30，20 ml），合并正丁醇液，用1%碳酸氢钠溶液洗涤4次（30，30，30，20 ml），弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤4次（30，30，30，20 ml），分取正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇适量溶解，转移至25 ml具塞瓶中，蒸干，精密加入2ml甲醇使溶解，摇匀，即得。表1 梯度洗脱表（略）
2.3.2 取本品50粒，取内容物，精密称定，研细，混匀，取约10 g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚100 ml，加热回流提取1 h，弃去乙醚液。药渣挥去乙醚，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇100 ml，称定重量，加热回流1.5 h，放冷，再称定重量，用水饱和的正丁醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液50 ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至10 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
实验结果表明，采用方法“2.3.1”项下方法制成的供试品溶液含有较多油脂，进样后杂质峰较多，基线不平。采用“2.3.2”项下方法制成的供试品溶液杂质少，分离效果好，故选择“2.3.2”项下方法进行供试品溶液的制备。
2.4 对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥约3 h至恒重的人参皂苷 Re对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.22 g的溶液，即得。
2.5 线性关系考查精密吸取浓度为225 μg /ml的人参皂苷Re对照品溶液2，5，10，15，20 μl注入液相色谱仪，测定其峰面积积分值，以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y＝263 862X+4 890.6，r＝0.999 1。结果表明人参皂苷Re在0.45～4.5 μg范围内具有良好的线性关系。数据见表2，标准曲线图见图2。表2 线性关系考查结果（略）
2.6 精密度实验精密吸取同一供试品溶液10μl，重复进样5次，测定其峰面积积分值。结果见表3。表3 精密度实验结果（略）
结果表明：本方法精密度较好。
2.7 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10 μl，分别于0，4，8，12，16，20 h进样，测定其峰面积积分值。结果见表4。表4 稳定性实验结果（略）
结果表明，供试品溶液在20 h内峰面积值基本稳定。
2.8 重复性实验取同一批号（批号：050704）供试品5份，依法测定，结果见表5。表5 重复性实验结果（略）
结果表明，本方法重复性较好。
2.9 回收率实验取已知含量为0.037 4%（批号050704）的样品约5.5 g，共5份，精密称定，分别精密加入人参皂苷Re对照品溶液（225 μg/ml）10 ml，即2.25 mg，按含量测定项下的方法测定含量，结果见表6。表6 回收率测定结果（略）
结果表明，本方法加样回收率较高。
2.10 样品测定结果精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，在选定条件下，人参皂苷Re峰与样品中其它组分色谱峰可达基线分离，按人参皂苷Re峰计算，理论塔板数在5 000以上，阴性样品、对照品、供试品色谱图分别见图3～5。按质量标准正文中的含量测定方法测定3批样品中人参皂苷Re含量。结果见表7。表7 3批样品的人参皂苷Re含量测定结果（略）
结果表明，3批样品中人参皂苷Re平均含量为211 μg/粒。原胶囊中人参皂苷Re含量限度为30 μg/粒，考虑到原标准含量限度较低，国家药品监督管理局对国家药品标准（试行）颁布件有关说明中建议：积累含量数据，制订合理限度。综合考虑，将双参龙胶囊的人参皂苷Re的含量限度定为不得低于150 μg/粒，高于原标准。
3 讨论
研究和提高药物的质量标准一直是药物质量研究领域尤其是中药质量标准研究领域的重大课题，中国对于中药质量的研究也一直在不断地提高和深入。本研究参照《中国药典》［1］西洋参含量测定项下的方法，对双参龙胶囊中人参皂苷 Re的含量方法进行了研究，将原标准中的薄层扫描法改为高效液相色谱法，克服了原方法背景干扰较大，重复性较差的缺点。
根据国家药品监督管理局对国家药品标准（试行）颁布件的有关建议，我们通过对3批样品的含量测定结果，制订了更合理的含量限度。将原胶囊中人参皂苷Re含量限度30 μg/粒，提高到150 μg/粒，远远高于原标准，从而增加了标准对于双参龙胶囊质量的可控性。
2005版《中国药典》［1］西洋参中人参皂苷 Re的高效液相色谱含量测定方法中，采用的是梯度洗脱法，我们将该条件应用到双参龙胶囊中人参皂苷 Re的含量测定中，并选择了供试品溶液的处理方法，结果样品分离效果好，从而消除了干扰。
【参考文献】
［1］国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：87.
［2］陈军辉，谢明勇，王慧琴，等．西洋参中人参皂苷类HPLC测定及其指纹图谱研究［J］.食品科学，2005，26(11)：200.
［3］郑虎占，董泽宏，佘 靖．中药现代研究与应用［M］.北京：学苑出版社，1997：19.
［4］陈军辉，谢明勇，章志明，等．12种西洋参中总皂苷及人参皂苷Rb1的测定比较［J］.时珍国医国药，2005，16(9)：845.